보고서 정보
주관연구기관 |
한국생명공학연구원 Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 1997-02 |
주관부처 |
국무조정실 The Office for Government Policy Coordination |
등록번호 |
TRKO200200051561 |
DB 구축일자 |
2013-04-18
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초록
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1. 제목 가축의 장내세균 분리 동정 및 배양에 관한 연구 1) 연구의 목적 및 중요성 과학기술의 발달에 따라 의약품 및 식품에 관련된 소재와 연구가 발전함에 따라다양한 미생물의 이용에 관한 연구가 활발하게 진행되고 있다. 자연계에 존재하는 미생물은 물론 인간과 동물에 서식하는 미생물에 이르기까지 중요한 활성을 갖는 미생물과 신 물질을 찾기 위한 다양하고 고난도의 스크리닝 기술을 적용하고 발전시켜 왔다. 인체와 동물의 장관 내에 서식하는 미생물을 장내세균이라 하는데 이들의 역할과 기능에 대한 연구가 진전되면서 생리활
1. 제목 가축의 장내세균 분리 동정 및 배양에 관한 연구 1) 연구의 목적 및 중요성 과학기술의 발달에 따라 의약품 및 식품에 관련된 소재와 연구가 발전함에 따라다양한 미생물의 이용에 관한 연구가 활발하게 진행되고 있다. 자연계에 존재하는 미생물은 물론 인간과 동물에 서식하는 미생물에 이르기까지 중요한 활성을 갖는 미생물과 신 물질을 찾기 위한 다양하고 고난도의 스크리닝 기술을 적용하고 발전시켜 왔다. 인체와 동물의 장관 내에 서식하는 미생물을 장내세균이라 하는데 이들의 역할과 기능에 대한 연구가 진전되면서 생리활성기능을 지닌 미생물을 찾기 위한 연구도 활발히 진행되고 있다. 가축의 소화기관인 위장과 소장, 대장에는 다양하고 수많은 미생물들이 서식하고 있는데, 이들을 장내세균이라 한다. 이들은 장내에 유입되는 음식물을 소화 분해하며 영양소를 합성하고 생체유지에 필요한 에너지를 생성하는 등 여러 가지 중요한 작용을 하고 있다. 그 중에는 유익한 작용을 하는 것과 유해한 작용을 하는 것이 있는데, 유익한 작용을 하는 장내세균을 이용하는 방법이 끊임없이 연구되어 왔는데, 그 중에서 최근에 각광받고 있는 것이 생균활성제이다. 생균활성제 (probiotics)는 인체나 동물의 장내에 서식하면서 생체에 유익한 여러 가지 작용을 하는 미생물을 살아있는 상태로 제제화한 의약품 또는 동물약품으로서, 장내세균총의 이상발효에 의하여 야기되는 제반 증상을 치료 내지는 개선하는 효과를 나타낸다고 알려져 있다. 항생제 (antibiotics)는 미생물의 생육을 억제하거나 정지시키는 작용을 하는 물질이지만, 생균활성제는 이와 반대로 미생물을 활성화하는 작용을 갖는 개념으로 정의되었다. 날씨가 불순하거나 사료가 바뀌는 경우, 또는 가축이 이동하는 경우에 대장균, 살모넬라균, 포도상구균 등 유해미생물은 비정상적으로 증식하여 장내 미생물의 균형이 깨어지게 되며, 이때 발생하는 설사는 경우에 따라 치명적이다. 이를 예방하기 위하여 지금까지는 항생제를 사전에 사용해 왔다. 그러나 축산분야에서 사용되고 있는 항생제에 대해 내성을 갖는 유해 미생물들이 계속 분리되고 있고, 육류 제품에 항생제가 잔류 축적되어 인체의 위생에 심각한 문제를 야기시키는 것으로 보고되어, 보다 안전한 육류식품에 대한 요구가 증가되고 있다. 또한 수출․입 되는 육류제품에 대한 잔류 독성물질의 검사가 전 세계적으로 엄격해지고 강화되는 추세에 있기 때문에 항생제의 사용을 줄이고 대체물질의 개발이 필요해지고 있다. 이러한 관점에서 본다면 가축에 생균활성제를 사용해야 한다는 당위성이 인정된다. 미생물의 기능을 강화한다는 관점에서 장내와 동일한 조건인 혐기상태로 미생물을 분리하였다. 즉 가축의 장내는 산소가 존재하지 않는 혐기상태이므로 혐기성 미생물이 장내세균의 대부분을 차지하기 때문에 장내에 유입되어 정착 서식하는데는 기존의 호기성 장내세균보다 혐기성 세균이 훨씬 유리하다는 이점이 있다. 따라서 본 연구에서는 가축의 장관으로부터 혐기적인 방법으로 내산성, 내담즙성, 유해미생물 억제능력 등 무수한 생리적 활성을 갖는 장내세균을 분리․탐색하여 분류․동정하고, 생리․생화학적 특성 등의 기반연구를 수행한다. 또한 선발된 우수균주의 특성연구를 바탕으로 생리적인 활성, 항병원성, 항생제 내성, 장내 정착력 및 산업화를 위한 대량배양, 제제화 연구 등을 통해 제품화하여 사료 첨가제로 활용될 수 있도록 하고자 한다. 2. 생균제용 균주의 분리 및 탐색 1) 재료 및 방법 내산성 및 내담즙성을 가진 혐기성 미생물을 분리하기 위하여, 혐기백 (Gas Pack pouch ; BBL사)을 이용하여 11개월령의 건강한 암퇘지로부터 분변을 채취하였다. 채취한 시료 1g을 pH 2로 조정한 혐기희석액으로 1 : 10으로 희석하고, 진탕기를 이용하여 120분간 진탕하였다. 진탕액 1㎖을 옥스갈 (Difco사) 0.2 %를 첨가한 BL 고체배지 (영연화학사)에 도말하고, 37℃에서 48시간 Anaerobic system (Forma Scientific사)내의 배양기에서 혐기적으로 배양하였다. 2) 결과 출현한 콜로니를 형태와 모양이 다른 것들을 취하여 BL 고체배지에 옮기고 2차 계대배양하고, 단일콜로니를 슬라이드 글라스에 도말하여 그람 염색하고 현미경을 이용하여 검색한 다음, 그람 양성이며 간균 형태인 미생물 144개를 선발하였다. 3. 균주의 특성 및 효능 검증시험 1) 내산성 내산성Test는 pH를 2.0과 3.0으로 적정한 0.85% Saline에 시료를 현탁한 후 37℃에서 시간별로 배양한 후 시료를 희석액에 10진희석하여 MRS배지에 도말 후 나타난 Colony를 계수하여 결과를 얻었다. 시험한 결과 분리된 균주는 pH를 2.0 이상에서 모두 생장하여 내산성이 있음을 확인하였다. 2) 내담즙산성 LBS배지 상에 나타난 Colony를 MRS broth배지에서 배양한 후 옥스갈이 농도별로 첨가된 MRS agar배지에서 배양하였다. 옥스갈 첨가농도 0.5%이하에서 모든 권주가 생장하였다. 3) 유해 미생물에 대한 억제능 시험 ① 재료 및 방법 시험균으로 분리한 144 균주에 대하여 병원성균 억제능력의 유무를 검사하기 위하여 13종의 병원성 미생물을 대상으로 생장억제능을 비교하였다. 유해미생물로서 사용된 종류는 다음과 같다. 대장균(E. coli) KCTC 2441, 대장균(E.coli) KCTC 2571, Klebsiella pneumoniae KCTC 2208, Staphylococcus aureus KCTC 1621, Staphylococcus epidermidis KCTC 1917, Salmonella enteritidis kim sp14, Shigella flexneri KCTC 2008, Proteus vulgaris KCTC 2579, Enterobacter cloacea KCTC 2361, Enterococcus lactis KCTC 1913, Serratia marscense KCTC 2172, Citrobacter freundii KCTC 2006, Bacillus subtilis KCTC 1021. 시험균 144개를 MRS 배양액에서 18시간 혐기적으로 배양하여 이를 시험액으로 사용하였다. 유해미생물을 MRS 배양액에서 18시간 배양한 후 각각에 대하여 배양액 0.1㎖을 취하고, 지름 150mm인 페트리접시에 준비한 MRS 고체배지에 도말하고 30분 동안 건조한 후, 지름 8mm인 멸균된 페이퍼디스크를 접시 당 40개 얹었다. 시험액 30㎕를 페이퍼디스크에 접종하고, 지름 150mm인 페트리접시를 48시간 배양하였다. 배양 후 나타난 억제환의 직경을 측정하여 대조군과 비교하였다. ② 결과 144개의 미생물을 시험균으로 하여 유해미생물 13종 각각에 대한 생장억제능의 유무를 시험한 결과, 13종을 부분적으로 억제하는 것과 억제하지 못하는 것이 다양하게 나타났으며, 여러 종의 유해미생물을 억제하는 시험균을 무수한 능력이 있는 균주로 선발하였다. 13종의 유해미생물에 대하여 억제효과를 모두 나타낸 분리균주 1종을 선발하여 시험균으로 선정하고 그 균을 동정하였다. 4) 항생제 감수성 시험 ①재료 및 방법 13종의 항생제에 대한 감수성을 시험하였는데, 그 종류는 세파렉신(Cephalexcin, 동화약품사), 에리스로마이신 (Erythromycin, Sigma사), 플루메퀸 (Flumequinine, 대성미생물사), 퓨라졸리딘 (Furazolidine, 대성미생물사), 겐타마이신 (Gentamycin, 동아바이오텍사), 페니실린 (procaine Penicillin G, Antibioticos사), 노플락사신 (Norflaxacine, 대성미생물사), 스펙티노마이신 (Spectinomycin, 대성미생물사). 테트라사이클린 (Tetracycline, 대성미생물사), 티아물린 (Tiamuline, 대성미생물사), 네오마이신 (Neomycin, Sigma사), 클로람페니콜 (Chloramphenicol , Sigma사), 가나마이신 (Kanamycin, Sigma사)등으로 이들을 적절한 농도로 용매에 용해하고 멸균된 membrane filter로 제균하여 4℃에 보관하면서 사용하였다. ② 결과 시험균마이신과 페니실린을 제외한 11종에 대해서는 강한 저항성을 가지고 있는 것으로 나타났다. 결과 판정은 배양 후 나타나는 억제환의 직경을 측정하였고, 최소억제농도(㎍/㎖)로 표시하였다. 4. 균주의 동정 및 분류학적 고찰 1) 재료 및 방법 분리된 시험균주는 우선적으로 API 32A와 API CHL Kit (바이오메리오사)를 사용하여 기질의 이용성과 효소 활성 등을 조사하고, 표준균주와 비교하여 종과 속을 결정하였다. 또한 생화학적 대사특성을 이용한 동정방법으로서 95가지의 Carbon 이용성을 조사하여 자체의 software로 표준균주와의 상동성을 비교, 동정하는 Micro Station System 3.50 (Biolog사)를 이용하였다. 그리고 Gas Chromatography (Shimazu사)를 이용한 대사산물의 분석 방법을 이용하여 속의 결정에 이용하였다. 또한 균주가 지니는 세포지방산을 추출, 세척, 농축하여 그 종류와 양을 분석, 비교하는 Gas Chromatography인 Microbial Identification System (MIDIHP 5890 GC, Microbial ID사)를 이용하였다. 이와 같은 결과를 종합하고 Bergeyꡑs manual을 참고하여 동정하였으며, 결과의 확인을 위하여 유전자 염색체 16s rRNA을 분리하고 염기의 서열을 결정․비교하여 미생물의 속(genus)과 종(species)을 결정하였다. 2) 결과 분리한 균주를 BL 고체배지에서 48시간 배양하였을 때 0.4 -1.0 mm 크기의 유갈색이고 융기되며, 불투명하고 원활한 형태의 집락을 형성하였다. MRS 고체배지에서는 콜로니 형태는 유백색이었으며, 나머지 특성은 일치하였다. 고체배지에서 배양한 후 염색성은 그람 양성이고, 간균이며 포자생성은 없었으며, 배양되고 있는 세포의 크기는 0.5 -1.5㎛이었다. 혐기성세균에 사용되는 API 32A와 유산균에 사용되는 CHL Kit (바이오메리오사)에 의한 생화학적인 특성과 생리학적인 결과를 얻었다. 또한 Gas Chromatography (Shimazu사)에 의한 대사산물의 검출은 표준물질의 젖산 피크에 해당하는 피크만이 검출되어 시험균은 젖산만을 대사산물로 생산하는 락토바실러스속으로 동정되었다. MIDI 결과, 락토바실러스속을 구성하는 세포지방산의 조성인 것으로 나타났다. 미생물의 생화학적 대사특성을 이용하여 95가지의 Carbon 이용성을 조사한 Micro Station System 3.50의 software 검색결과는 락토바실러스속의 표준균주와 상동성이 가장 높은 것으로 나타났다. 락토바실러스속의 정확한 종(species)을 결정하기 위하여, 유전자의 16s rRNA 염기서열을 확인한 결과 Lactobacillus reuterii 라는 균으로 판명되었다. 5. 생균제제의 기초 동물시험 1) 재료 및 방법 대량으로 배양한 시험균을 동결건조하여 생균제제를 조제하고, 이를 자돈에 섭취시키면서 사료섭취량, 증체랑, 설사발생 빈도, 분변 내 유산균과 대장균의 균총 등을 지표로 4주간 투여효과를 관찰하는 과정으로 실시하였다. 경남도종축장에서 각 구 당 5마리씩 5구로 구분하여 1개월령의 자돈을 대상으로 생균제제를 14일간 투여하였다. 자돈에 투여하는 방법은 다섯 구로 구분하여 실시하였다. 2) 결과 및 고찰 자돈의 관리와 사육상태는 양호하였고, 사육 중에 설사가 발생하곤 하였으나 곧회복되었으며, 폐사된 자돈은 없었다. 시험기간 중 대장균총의 변화는 항생제 무첨가 사료만을 투여한 1구에서는 거의 변화가 없었으나, 나머지 구에서는 투여 후부터 뚜렷하게 감소하였다. 항생제가 첨가된 일반 사료만을 투여한 2구에 비하여 3, 4구에서 보다 낮은 대장균수가 나타났고, 항생제와 생균제를 혼합 첨가한 사료를 투여한 5구에서는 가장 낮은 대장균수를 보였다. 유산균총의 변화는 항생제 무첨가 사료만을 투여한 1구에서는 약간의 변화가 있었고, 2구에서는 미약한 감소가 있었지만, 생균제제가 첨가 투여된 나머지 구에서는 투여 후부터 뚜렷한 증가가 나타났다. 항생제가 첨가된 일반 사료만을 투여한 2구에 비하여 항생제가 없는 사료가 투여된 1구에서 유산균수가 높은 것은 항생제에 의한 저해로 볼 수 있는 결과이다. 항생제와 생균제가 혼합 첨가된 사료를 투여한 5구에 비하여 항생제 없이 생균제제 만을 투여한 3, 4구에서 가장 높은 유산균수를 보였으며, 3구보다 4구에서 높게 나타난 것은 투여량이 많았기 때문으로 해석된다. 생균제의 투여 전보다 투여 이후의 유산균수의 증가는 최저 302%(5구)에서 최고 1745%(4구)까지 이루어졌다. 중요한 사실은 시험기간 중 생균제의 투여가 중지된 이후에도 투여전보다 훨씬 많은 유산균수를 보였다는 것인데, 이것은 투여된 유산균이 장내에 일정부분 정착하였음을 보여주는 결과이다. 즉, 외부에서 투여된 유산균이 자돈의 장내에서 정착하여 살아갈 수 있으며, 자돈의 성장에 유익한 여러 가지 생리활성기능을 발휘할 수 있다는 가능성을 확인해주는 점이다. 5구에서도 같은 곁과를 보이는 것은 투여된 유산균이 항생제에 저항성을 지니고 있음을 나타내는 것이다. 사료 요구율은 생균제제를 투여하는 모든 구에서 대조구에 비하여 10-26% 감소하였으며, 3구와 4구의 경우에서는 5구의 경우보다 훨씬 많은 16%의 사료 요구율 감소가 있었다. 이러한 결과는 보다 적은 사료를 소비하면서 보다 많은 증체효과를 얻을 수 있다는 경제적인 측면에서의 효과를 나타낸다. 시험자돈의 증체효과는 생균제제 첨가구에서의 증체율이 대조구에 비하여 5-27% 높게 나타났으며, 3구와 4구의 경우보다 5구에서 22-32% 높은 증체율이 나타났다. 이것은 항생제 첨가사료에 의한 기존의 사육방법이 일정부분 가축의 증체에 효과적이라는 사실을 반영하는 것으로 보이며, 생균제제와 혼합하여 사용할 때에도 좋은 증체효과를 얻을 수 있음을 나타낸다. 그러나 최근의 육고기에 대한 항생제의 잔류 축적 문제가 사회적인 문제로 거론되었고, 인체로의 이행으로 발생하는 여러 가지 문제로 인하여 항생제의 사용규제가 강화되고 있는 현재로서는 가축의 사육방법으로서 적절치 못하며, 생균제제를 사용한 사육법으로 대체되어야 할 것이다. 6. 균주의 안정성 시험 1) 재료 및 방법 균주의 동결보호기능과 보존 중의 안정성을 유지 또는 향상시키는 효과를 보이는 것으로 알려진 여러 종류의 물질을 선별하고, 종류별로 적당량 첨가하여 그 효능에 관한 실험을 수행한다. 먼저 glucose 5%, lactose 5%, maltose 5%, fructose 5%, sucrose 5%, raffinose 5%, inosito| 5%, starch 5%, inuline 3%, mannitol 5%, pectin 4.7%, sorbitol 0.5M, trehalose 7%, mollasses 1%, mollasses 2% 등을 대상으로 15%(w/v)의 시험균체와 혼합하고, 혼합액 0.3㎖씩을 glass vial에 분주하여 -80℃ Deep freezer에서 30분간 동결한 후, 동결건조기에서 12시간 건조시킨 다음, 실온에서 보존하면서 일정간격(7일)으로 건조균체를 취하여 희석하고 MRS agar에 배양하여 생균수를 조사한다. 2) 결과 10% 탈지분유에 아래와 같은 물질을 적당량 첨가하여 생균수를 조사한 결과는 다음과 같다. 보존 2주 동안에 sorbitol 0.5M% 첨가구에서 거의 변화 없는 곡선을 보이며, 3주부터 약간의 상승곡선이 나타나 6주까지 이어지고, 8주부터 12주까지는 초기보다 약간 높은 균수를 보여주는 좋은 효과를 나타냈다. Na-glutamic acid 3% 첨가구에서는 보존 2주 동안 약간의 감소를 보이고, 3주부터 8주까지 거의 변화를 보이지 않으며, 12주부터 약간의 감소를 보이지만 우수한 보존효과를 나타냈다. 대조구에 비하여 낮은 효과를 보이지만 mollasses 1%와 5% 첨가구에서 새로운 보존제로서의 가능성을 나타내는 곡선을 보이고 있다. 다른 물질과의 조합으로 보존효과를 높일 수 있는 가능성이 있음을 확인하였다. 대조구에 비하여 raffinose 5%, lactose 5%. glucose 5%, β-glycerophosphate 0.25% 첨가구에서 보존 12주 동안 거의 변화가 없는 생균수를 보이고 있어 우수한 동결보존의 효과를 나타내고 있다. adonitol 0.75M 첨가구에서도 6주 동안은 변화가 적은 곡선을 보이고 있으나 8주부터는 급격한 감소를 보인다. mollasses 1%에 NZ-amine 0.75% 첨가구에서 생균수의 감소가 이루어지지만 그 변화의 폭이 citric acid 0.65%에 NZ-amine 0.75% 첨가구보다 훨씬 적게 나타났다. 결론적으로 skim milk 10%에 첨가하여 가장 우수한 효과를 보이는 물질은 sorbitol 0.5M%. Na-glutamic acid 3%. raffinose 5%. lactose 5%. glucose 5%. β-glycerophosphate 0.25% 등으로 나타났다. 증류수를 대조구로 하여 실험한 결과 raffinose 5%, starch 5%. inuline 3%. trehalose 7% 첨가구에서 우수한 결과를 보이고 있다. 무첨가구인 대조구에서 거의 변화가 없는 균수를 보이는 것이 특이한 현상이라 할 수 있다. 우수한 보존효과를 보이는 inuline 3% 첨가구의 경우 지금까지 보존제로서 보고된 예가 거의 없었던 물질들이며, 그 효과도 좋은 것으로 나타났다. mollasses 2% 첨가구에서는 10% 탈지유에 첨가했을 때 보다 더 좋은 결과를 보였다. mollasses의 경우 1% 첨가보다 2%의 첨가에서 그 효과가 높게 나타나고 있다. 그러나 지금까지 효과가 좋은 것으로 알려진 mannitol, sorbitol 등은 대조구보다 좋지 않은 결과를 보이고 있어 홍미롭다. 결론적으로 대조구인 증류수에 비하여 raffinose 5% starch 5%. inuline 3%. trehalose 7% 첨가구에서 생균수의 감소가 거의 없는 좋은 보존효과가 나타나 무수한 동결보호작용이 있는 것으로 생각된다. 3) 대량배양 조건 연구 ① 재료 및 방법 대량배양을 위해 우선적으로 4 Liter의 MRS 액체배지에서 seed 배양을 하고, 이를 통해 Growth curve 및 배양시간 등 균주의 배양조건을 최종 점검하였다. 균주의 배양을 위해 사용된 배지는 MRS agar 이다. 선발 균주의 seed 배양은 12시간동안 행해졌으며, 최종배양의 1%에 해당되는 양을 접종하였다. 균주의 최종배양은 180 Liter의 발효기를 이용하였으며 37℃에서 13시간동안 이루어졌다. 이때 교반기 속도는 100rpm이었다. ②결과 균체 대량배양시의 증식변화는 다음과 같다. 초기탁도(OD value) -0.232 (104-5 ), 중기탁도(OD value) -1.350 (1010), 말기탁도(OD value) -2.551 (1011). 균주 대량배양시의 pH변화는 중기이후부터 급격하게 저하되기 시작하였으며, 증식변화는 완만한 직선으로 나타났다. 균주 대량배양 후 배양균주 wet cell의 총 무게는 1.2㎏/180Liter (6.67g/Liter)로 나타났으며, 이들의 건조 후 무게는 1g 건조시 약 0.2-0.3g으로 조사되었다. 또한 균주 수는 배양 후 3.6 × 1011/g이며, 건조 후는 4.8 ×1011/g으로 조사되었다. 7. 결 론 이 연구는 국내산 돼지의 장관으로부터 생균제용 혐기성 세균을 분리하였다는 점과 국내 분리균주의 생리 생화학적 특성이 외국에서 상품화된 균주에 비하여 결코 뒤떨어지지 않는다는 점에 또한 그 의의가 있다. 혐기적 분리방법을 통하여 내산성과 내담즙성이 뛰어난 144 균주를 분리하였으며, 그 중에서 병원성 세균의 억제력이 가장 강한 균주를 동정한 결과 Lactobacillus reuterii 라는 균이었다. 항생제에 대한 내성 또한 뛰어난 것으로 나타나 한국 특허를 출원중이며, 특허균주 기탁(번호 KCTC 0315BP)을 하였다. 균주를 배양하여 생균제제를 시험 제조하고 자돈에게 1개월 동안 투여하면서 장내세균총의 변화를 관찰하였는데, 일반사료를 투여한 시험구보다 제제를 투여한 구에서 대장균총의 감소가 급격하게 나타났고 유산균의 증가는 최저 302% 에서 최고 1745% 까지 증가하였다. 사료 요구율은 생균제제를 투여하는 모든 구에서 대조구에 비하여 10-26% 감소하였다. 증체효과는 생균제제 첨가구에서의 증체율이 대조구에 비하여 5-27% 높게 나타났으며, 항생제 첨가사료 투여시 22-32% 높은 증체율이 나타났다. 10% 탈지분유에 sorbitol 0.5M%, Na-glutamic acid 3%, raffinose 5%, lactose 5%, glucose 5% 그리고 β-glycerophosphate 0.25% 첨가하였을 때 3개월 간 거의 변화가 없는 생균수 곡선을 보이며, 증류수를 대조구로 하였을 때 raffinose 5%. starch 5%, inuline 3%. trehalose 7% 첨가구에서 우수한 결과를 보이고 있다. 결론적으로 증류수를 대조구로 하였을 때 raffinose 5%에서 10% 탈지유에서는 sorbitol 0.5M% 첨가가 가장 우수한 동결보존 효과를 보이는 것으로 나타났다. 대량배양 조건에서 MRS 액체배지를 사용하여 180 Liter의 발효기에서 37℃,13시간동안 배양시, 말기 OD value가 2.551이며, wet cell weight는 1.2㎏ 균수는 3.6 × 1011/g으로 나타났다.
Abstract
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The development and industrial application of intestinal bacteria is highly important in the manufacture of foodstuffs and medical products. We have conducted studies, screening anaerobic intestinal bacteria for acid and bile tolerance and for pathogens suppression in the intestine of swine. One suc
The development and industrial application of intestinal bacteria is highly important in the manufacture of foodstuffs and medical products. We have conducted studies, screening anaerobic intestinal bacteria for acid and bile tolerance and for pathogens suppression in the intestine of swine. One such study was taxonomic in nature and dean with the isolateꡑs biochemical responses and their ecolgy in the animalꡑs intestine. The study included antibiotic susceptibility testing and the isolateꡑs response to preservation. The results indicated that those strians isolated which suppressed various pathogens (13 typica| strains), were identified as Lactobacillus reuterii. The strain was able to tolerate acid condition down to pH 2 and could also tolerate bile at oxgall 0.5%. The strain exibited resistance to a range of antibiotics including, cephalexin, erythromycin, flumequine, furazolidine, gentamycin, penicillin G, norfloxacin, spectinomycin, tetracycline, tiamuline, neomycin, chloramphenicol, kanamycin etc.. Ecolgical studies of swine intestines showed a high recovery rate of the test strain and strong suppression of pathogens during the course of probiotic ingestion. The test strain, after storage at room temperature for up to 3 months, retained active viablility. The cryoprotective agents found to be most effective, when added to 10% skim milk were sorbitol 0.5M%, Na-glutamic acid 3%, raffinose 5%, lactose 5%, glucose 5% and β-glycerophosphate 0.25%. In deionized water, the most effective agents were raffinose 5%, starch 5%, inulin 3% and trehalose 7%.
목차 Contents
- 제 1장. 서 론...15
- 1) 연구의 목적...15
- 2) 연구의 중요성...16
- 제 2장. 생균제용 균주의 분리 및 탐색...19
- 1) 재료 및 방법...19
- 2) 결과...19
- 제 3장. 균주의 특성 및 효능 검증시험...21
- 1) 내산성...21
- 2) 내담즙산성...21
- 3) 유해 미생물에 대한 억제능 시험...21
- 4) 항생제 감수성 시험...25
- 제 4장. 균주의 동정 및 분류학적 고찰...27
- 1) 재료 및 방법...27
- 2) 결과...27
- 제 5장. 생균제제의 기초 동물시험...32
- 1) 재료 및 방법...32
- 2) 결과 및 고찰...32
- 제 6장. 균주의 안정성 시험...40
- 1) 재료 및 방법...40
- 2) 결과...40
- 3) 대량배양...48
- 제 7장. 결 론...50
- 제 8장. 참고문헌...54
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