초록 ▼

노화현상이란 생물의 생성과 성장 및 성숙 과정 후 나타나는 형태적, 기능적인 쇠퇴로 사방에 귀착되는 생리적인 현상을 말한다. 이러한 노화현상에 대한 연구가 계속되어 왔으나 아직 명확히 밝혀지지 않고 있다. 본 과제는 1995년에 이어서 1996년도에도 연속과제로 Takeda 등1)이 개발한 노화촉진생쥐(SAM P6)를 노화동물모델로 선정하여 노화과정에서 나타나는 여러가지 생리현상들을 대표적인 補陽藥인 녹용, 補氣藥인 황기, 補血藥인 숙지황 및 당귀를 각각 투여하였을 때 나타나는 여러 가지 생리적인 변화들에 대해 연구하였다. 여러

노화현상이란 생물의 생성과 성장 및 성숙 과정 후 나타나는 형태적, 기능적인 쇠퇴로 사방에 귀착되는 생리적인 현상을 말한다. 이러한 노화현상에 대한 연구가 계속되어 왔으나 아직 명확히 밝혀지지 않고 있다. 본 과제는 1995년에 이어서 1996년도에도 연속과제로 Takeda 등1)이 개발한 노화촉진생쥐(SAM P6)를 노화동물모델로 선정하여 노화과정에서 나타나는 여러가지 생리현상들을 대표적인 補陽藥인 녹용, 補氣藥인 황기, 補血藥인 숙지황 및 당귀를 각각 투여하였을 때 나타나는 여러 가지 생리적인 변화들에 대해 연구하였다. 여러 가지 종류의 한약재가 보혈, 조혈, 신혈, 양혈 등, 혈액성분과 밀접한 관계를 나타낸바는 사실은 오랫동안 알려져 왔다. 그러나 구체적인 작용기전이나 상대적인 차이점등은 비교 검토되지 않았으므로 본 연구과제에서는 대표적인 한약 4종-녹용,황기, 숙지황, 당귀-을 비교검토하여 그 효능에 대해 현대적인 면에서 재해석하고자 하였다. 또한 간단한 처방인 당귀보혈탕을 선택하여 이의 효능을 현대의학의 보혈의 개념에서 검증하고자 하였다. 연구방법은 각 한약재(5g/kg)를 SAM R1과 SAM P6에 투여한 후 0, 7, 14, 21, 30일에 각각 해당되는 날에 가능한 한 혈액을 전량 채취하여 일부는 CBC 실험을 하고 나머지 혈액은 원심분리(Beckman AvantiTm 30 Centrifuge, USA)하여 상등액만 취하여 혈장을 분리하고 생화학검사와 Cortisol,T3 및 T4 의 농도를 측정하였다. 또한 녹용의 적정투여량과 기간을 알기위하여 건조 녹용 0, 0.1, 0.3, 1, 5g/kg에 해당량의 추출액을 0, 7, 14일 동안 매일 1회 각각 경구투여한 후, 해당 실험일에 가능한 한 혈액을 전량 채취하여 일부는 혈구 분석 실험을 하고 나머지 혈액은 혈장을 분리하여 erythropoietin(EPO)과 총 철이온, growth hormone(GH), 및 insulin-like growth factor-1 (IGF-1)의 정량을 위해 냉동(-70"C) 보관하였다. 조직내에 존재하는 GSH, 총 SOD, 및 Mn-SOD의 농도를 측정하기 위해 간조직을 제거하여 냉동보관 하였다(-70"C). 본 연구자들은 이전의 연구에서 노화 촉진 생쥐 (SAM-P6)에 녹용을 투여했을 때 RBC, HGB HCT 수치가 상당히 증가하는 것을 발견하였기에 본 연구는 녹용의 조혈 작용 기전을 밝히는 작업의 일환으로 노화 촉진 생쥐에서 적혈구 증가의 원인을 규명하기 위하여 적혈구, 혈장내 EPO 및 총 철이온 양을 측정하였다. 현재 통용되는 총한약재의 약 8%를 차지하는 황기는 주생분 분리 확인연구가 일부 시행되었으며 본연구에서는 1595년도에 이어 계통분리하였고, 특히 1996년에는 n-Hexane분획에 대한 계통분리를 하였다. 당귀를 제외한 녹용, 황기 및 숙지황은 노화 촉진 쥐에서 補血作用을 하는 것으로 나타났는데 그 작용 기전이 각각 다른 형태를 보이고 녹용이 SAM P6에서 가장 RBC의 농도를 많이 상승시켰다. 생화학 검사를 종합해 보면 녹용은 노화 억제기능이 있고 황기는 alkaline phosphatase만 상승시키며 숙지황은 creatinine만 증가시키고 당귀는 alkaline phosphatase를 감소시키므로 이들 4종류의 한약들의 작용기전이 각각 다름이 밝혀졌다. 녹용 및 황기는 Cortisol 농도에는 큰 영향이 없었으나 숙지황과 당귀는 SAM P6에서 이 농도를 상승시켰다. 이들 한약재 모두 노화에 기인하는 T3와 74의 상승을 억제시키기보다는 오히려 상승시켰다. 즉 노화촉진 생쥐인 SAM P6의 특성으로 알려진 골다공증이 노화현상으로 유발되었다면 T3 가 아닌 T4의 상승으로 인한 갑상선 기능항진에 기인하는 것으로 사료된다. 당귀보혈탕은 본 연구에서는 당귀보혈탕의 투여로 인한 큰 생리적인 변화를 나타내지 않았으며 이는 아마도 본 연구에서 사용된 SAM P6가 당귀보혈탕이 사용되는 주된 증상인 혈허발열의 동물모형으로써 문제가 있는 것으로 추정된다. 이들 한해야 명확해지리라 보며 SAM P6에서 Thyroid 호르몬의 증가를 촉진시키는 작용은 좀 더 장기간의 한약 투여 연구를 해야 2차적인 효능 및 영향을 알수 있으리라고 본다.

Abstract

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목차 Contents

• Ⅰ. 서 론...7
• 1. 연구목적...7
• 2. 혈액의 구성...7
• 3. 개별 한약재 (단미제)...9
• 4. 當歸補血湯 (복합처방)...14
• Ⅱ. 재료 및 실험 방법...18
• 1. 동물 실험...18
• 2. 분석 실험...19
• 2-1. 혈구분석실험 (Coulter's Complete Blood Cells Counts)...19
• 2-2. 생화학 검사...19
• 1) alkaline phosphatase...20
• 2) 알부민...20
• 3) 칼슘...21
• 4) creatinine...21
• 5) glucose...21
• 6) 무기성 phosphate...22
• 7) urea...22
• 8) 총 철이온(total iron ion) 농도의 정량...22
• 2-3. 혈장증의 Cortisol,T3,T4 농도의 측정...23
• 1) Cortisol assay...23
• 2) total T4...24
• 3) total T3...24
• 2-4. 혈장 중 erythropoietin 농도 측정...24
• 2-5. Superoxide dismuse (SOD) 활성 측정...25
• 2-6. Glutathione (GSH) 정량...25
• 2-7. 혈장내 성장 호르몬 (Growth hormone) 정량법...27
• 2-8. 혈장내 IGF-1 (Insutine-like Growth Factor-1 hormone) 정량법...27
• 3. 한약의 추출...27
• 3-1. 실험재료 및 추출...27
• 3-2. 분리...28
• 4. 통계처리...29
• Ⅲ. 실험 결과...30
• 1. 동물실험...30
• 2. 분석실험...31
• 2-1. 혈구분석 (CBC)실험...31
• 2-2. 셍화학적 검사...43
• 2-3. 혈장중 cortisol,T4,T3 농도 정량...58
• 2-4. Erythropoietin 정량...64
• 2-5. Superoxide dismuse (SOD) 활성 측정...64
• 2-6. Glutathione (GSH) 정량...68
• 2-7. 혈장내 성장 호르몬 (Growth hormone) 정량법...68
• 2-8. 혈장내 IGF-1 (Insuline-like Growth Factor-1 hormone) 정량법...68
• 3. 황기에서 분리한 화합물의 구조분석...68
• Ⅳ. 고 찰...110
• 참고문헌...125