초록

토양으로 부터 반응성이 다른 특수기능의 단백질 가수분해 효소를 탐색하고자 고온성 세균을 대상으로 다음과 같은 연구를 수행하였다.1. 토양시료에서 단백질 가수분해 효소를 생산하는 고온성 미생물의 분리2. 특수단백질 분해효소를 생산하는 고온성 미생물의 분리3. 선발된 균주의 동정4. 효소 생산조건 검토

Abstract ▼

Proteases Produced from microorganisms are widely used in the leather industry, Pharmaceatical industry, food industry and waste processing. Especially alkaine proteases have been used in detergent industry. Until now most of the research on proteases have been focused on selecting some proteases ha

Proteases Produced from microorganisms are widely used in the leather industry, Pharmaceatical industry, food industry and waste processing. Especially alkaine proteases have been used in detergent industry. Until now most of the research on proteases have been focused on selecting some proteases having high enzyme activity, so there's few reports on proteases having specific properties such as substrate specificity, regioselectivity, chiral selectivity, thermostability, solvent stability and so on. The maiority of commercially availabLe enzymes can be used in mild condition or alkaline condition only. But more and more we have needed specific functional enzymes able to act in limiting conditions as well. By using them, many useful works are to be possible in the field of biology, chemistry, and chemical engineering. In this research, our goal is to find some thermostable proteolytic enzymes to produce highly valuable compounds such as protein hydrolysate, flavoving materials, and drugs from natural raw materials. For this purpose, A total of 1,500 thermophilic bacteria were isolated from 1,000 soil samples collected in Korea . Thermophilic isolates were tested for their ability to produce proteolytic enzyme activity against 7 different substrates (skim milk, corn gluten, wheat glaten, anchovy, isolated soybean protein, defatted soybean and mussel). Strain No. 222 which showed the most strong proteolytic activity was selected and studied for microbiological and biochemical characteristics. Effects of carbon and nitrogen sources on enzyme production from the selected bacteria were examined. Studies will be continued to purify and characterize enzyme produced from the selected thermophilic bacteria.

목차 Contents

• 제1장 서 론...15
• 제2장 연구추진방법( 실험방법 )...18
• 1. 토양시료의 채취...18
• 2. 분리용 배지...18
• 3. 단백질 가수분해 효소를 생산하는 고온성 미생물의 분리...19
• 4. protease 활성 측정...20
• 5. 미생물의 동정...22
• 1) Diaminopimelic acid (DAP) isomer분석...22
• 2) Quinone 분석...22
• 3) Fatty acid 분석...22
• 4) G+C molar ratio 분석...23
• 6. 효소의 생산조건 조사...23
• 1) 탄소원의 영향...23
• 2) 질소원의 영향...24
• 제3장 결과 및 고찰...25
• 1. 단백질 가수분해 효소를 생산하는 고온성 미생물의 분리...25
• 1) 효소자원의 확보 및 미생물 분리...25
• 2) 특수 단백질 분해효소를 생산하는 고온성 균주의 분리...26
• 2. Strain No.222의 동정...28
• 3. 효소생산조건 검토...30
• 1) 탄소원의 영향...30
• 2) 질소원의 영향...31
• 참 고 문 헌...33
• 표지...37
• 요약문...39
• 목차...41
• 제1장 서론...43
• 제2장 연구 추진 방법(실험 방법)...44
• 제1절 균주및 Plasmid...44
• 제2절 배지및 배양조건...44
• 제3절 실험 방법...45
• 1. B. stearothermophilus NCIMB 10278로부터 염색체 DNA의 분리...45
• 2. Plasmid DNA의 분리...45
• 3. Probe로 이용하기 위한 aprE 유전자의 Nick Translation...46
• 4. B. stearothermophilus 염색체 DNA의 Southern Hybridization...47
• 5. Colony Hybridization...47
• 6. Nucleotide Sequencion...47
• 제3장 연구 결과및 고찰...48
• 제1절 서브틸리신 암호화 유전자의 선별...48
• 제2절 B. stearothermophilus의 Subtilisin J 유전자으 염기 서열...48
• 제3절 aprJ의 B. subtilis에서의 발현...53
• 제4장 결론...53
• 제5장 참고문헌...55
• 표지...57
• 목차...59
• 요약문...61
• 제1장 서론...63
• 제2장 연구추진방법(실험방법)...64
• 제1절 토양 미생물로부터 단백질 분해효소를 분비하는 균주들의 선별...64
• 제2절 선별된 균주의 동정...64
• 제3절 효소 활성의 측정...64
• 제4절 전기영동법...64
• 제5절 단백질 분해 효소 저해제 분석...65
• 제6절 단백질 분해 효소의 정제...65
• 제7절 안정성 측정...65
• 제3장 연구결과 및 고찰...66
• 제1절 균주의 동정...66
• 제2절 세포외 분비효소의 특성...66
• 제3절 Prt3 과 7 정제...67
• 제4절 정제된 효소에 대한 저해제의 효과...67
• 제5절 효소 활성과 안정성에 대한 pH와 온도의 영향...67
• 제4장 결론...75
• 제5장 참고 문헌...77
• 제7장 국제협력과제...79
• 제1절 국제협력 사업의 필요성...79
• 제2절 추진전략 및 방법...80
• 제3절 성과 및 기대효과...82
• 제4절 결론...83
• 제5절 수집된 정보 및 문헌, 참고문헌...89