초록 ▼

본 연구는 pALS genomic DNA cloning과 ALS 유전자의 생체 발현 특성 구명, pALS expression과 expressed pALS protein의 항혈청생산 및 IGF system components의 RIAs개발과 종돈의 성장단계 및 모돈의 번삭단계별 IGF system components의 혈중농도와 경제형질과의 상관관계 구명으로 대분될 수 있다. 먼저 pALS genomic DNA를 cloning하기 위해 타 종에서 보고된 consensus sequences 부위에서primers를 합성하고, genomi

본 연구는 pALS genomic DNA cloning과 ALS 유전자의 생체 발현 특성 구명, pALS expression과 expressed pALS protein의 항혈청생산 및 IGF system components의 RIAs개발과 종돈의 성장단계 및 모돈의 번삭단계별 IGF system components의 혈중농도와 경제형질과의 상관관계 구명으로 대분될 수 있다. 먼저 pALS genomic DNA를 cloning하기 위해 타 종에서 보고된 consensus sequences 부위에서primers를 합성하고, genomic DNA를 template로 하여 PCR 방법으로 증폭시켜 얻은 3개의 overlapping DNA 단편을 sequencing 함으로써 mature pALS의 모든 coding sequence를 확보하였다. 생체 조직에서의 ALS 유전자발현 특성을 구명하기 위해서는 태아기부터 성돈에 이르기까지 간에서의 mRNA abundance를 Northern blot 방법으로 분석하였고, 성돈의 간 이외 조직에서의 ALS 유전자 발현 여부와 상대적인 수준은 Northern blotting보다 감도가 높은 solution hybridization/RNAse protection assay로 확인하였다.
pALS의 expression construct를 제작하기 위해 먼저 mature pALS의 모든 coding sequence를 포함하는 두 개의 overlapping pALS genomic DNA 단편을 in-frame되게 PCR로 증폭하여 annealing시킨 다음 pBS plasmid vector에 삽입시켰다. pBS vector에 삽입된 insert는 vector로부터 잘라내어 pGEX-2T plasmid(procaryotic) expression vector와 pEBG baculovirus(eucaryotic) expression vector에 삽입하였다. 이들 expression systems로부터 생산된 glutathione S-transferase(GST)-pALS fusion protein은 affinity chromatogaphy로 정제하였고, recombinant eucaryotic pALS protein은 New Zealand White rabbit에 주사하여 다클론(polyclonal) 항혈청을 확보하였다.
먼저 농협중앙회 종돈사업소 보유 종돈을 육종가 기준으로 low vs high 성장능력 lines와 low vs high 번식능력 lines로 구분하였다. 성장형질분석에서는 종돈의 성장단계별(25, 60 & 100kg) 혈액을 채취하고 100kg시 일당증체량, 등지방두께, 등심단면적 및 정육률을 측정하고 품종별/성장단계별 IGF system components 혈중농도의 low- vs high-lines간의 차이 유무와 각각의 성장혈질과의 상관관계를 분석하였다. 번식형질에서는 모돈(gilts)의 임신 90일과 분만 후 15일에 혈액을 채취하고 산자수 및 총 이유자돈 체중을 측정하여 품종별/번식단계별 IGF system components 혈중농도의 low-vs high-lines간의 차이 유무와 각각의 번식혈질과의 상관관계를 분석하였다.

Abstract ▼

The present study can be divided into three parts: cloning of pALS genomic DNA and characterization of in vivo pALS gene expression, expression of pALS and pALS RIA development including antiserum production and analysis of relationships between plasma concentrations of the IGF system components and

The present study can be divided into three parts: cloning of pALS genomic DNA and characterization of in vivo pALS gene expression, expression of pALS and pALS RIA development including antiserum production and analysis of relationships between plasma concentrations of the IGF system components and growth/reproduction traits at various growth/reproduction stages. In the first part, three overlapping DNA fragments spanning a region coding for the entire pALS protein were amplified by PCR using genomic DNA as template, followed by nucleotide sequencing. Hepatic ALS gene expression during fetal and postnatal development up tot he marketing stage was determined by Northern blot analysis using acloned pALS genomic DNA fragment as probe. In addition, non-hepatic pALS genomic DNA fragment as probe. In addition, non-hepatic pALS gene expression also was detected by a more sensitive solution hybridization/RNAse protection assay.
To make a pALS expression construct, the entire coding sequence for mature pALS protein was amplified from two over lapping pALS genomic DNA fragments, followed by annealing of the two in-frame fragments and insertion into the pBS plasmidvector. The insert isolated from the pBS vector was next inserted into the pGEX-2T plasmid(procaryotic) vector and the pEBG baculovirus(eucaryotic) expression vector. The glutathione S-transferase(GST)-pALS fusion protein from these express systems was purified by an affinity chromatography, after which a polyclonal antiserum was obtained following injection of the recombinant eucaryotic pALS into a New Zealand White rabbit.
All the breeding pigs of the Swine Breeding Center of National Agricultural Cooperatives Federation were divided into low- vs high-growth ability lines and also into low- vs high-reproductive ability lines. For the analysis of growth ability, blood samples were taken at different stages(25, 60 & 100kg) and average daily gain, back fat thickness, loin muscle area and lean percentage were measured at 100kg. Analyzed were the significance of difference between the low- vs high-lines in plasma concentrations of the IGF system components and also the correlations between the concentrations of the IGF system components and the growth traits at different growing stages in different breeds. In reproductive traits, blood samples were taken from experimental gilts at day 90 of pregnancy and subsequently at day 15 post-partum and their litter sizes and total weaned litter weights were recorded, followed by analysis of significance of differences between the low- vs high-lines in plasma concentrations of the IGF system components and also the analysis of correlations between the concentrations of the IGF system components and there productive traits at different stages in different breeds.

목차 Contents

• 제출문 ...1
• 요약문...2
• SUMMARY...8
• CONTENT...15
• 목차...18
• 제 1 장 서 론...21
• 제 1 절 연구개발의 목적과 중요성...21
• 제 2 절 연구개발 내용 및 범위...27
• 제 2 장 ALS Genomic DNA Cloning과 생체조직의 ALS 유전자 발현특성 구명...30
• 제 1 절 서 설...30
• 제 2 절 재료 및 방법...31
• 제 3 절 결과 및 고찰...35
• 제 3 장 ALS Expression과 항혈청 생산...45
• 제 1 절 서 설...45
• 제 2 절 Procaryotic expression...46
• 제 3 절 Eucaryotic expression...53
• 제 4 절 항혈청 생산...60
• 제 4 장 IGF system components의 혈중농도와 종돈의 경제형질간의 상관분석...62
• 제 1 절 서 설...62
• 제 2 절 재료 및 방법...64
• 제 3절 결과...68
• 제 4절 고찰...81
• 제 5절 별첨: ALS 및 IGFBP-3...83
• 제 5 장 연구개발 결과 및 활용에 대한 건의...96
• 제 1절 주요 결과와 제언...96
• 제 2 절 연구 성과(발표 논문)...98
• 제 6 장 인용문헌...99