초록 ▼

- 1차년도
가. 멘케스, 월슨씨 유전자 (cDNA) 와 유전자 변이 확보 및 조사, 특이적 항체 개발, Metallothionein(MT)의 생성과 분해 기작.
나. 사람 미토콘드리아 RNA 중합효소(h-mtRP), 전사 촉진인자(h-mtTFA), 전사 종결인자(h-mtTERF) 유전자를 클로닝.
다. Gene targeting을 위한 2 종류 vector 제조, homologous recombination 유도용 vector에 삽입
라. 초파리 monoamine 계 신경전달물질 생합성 관련 유전자들

- 1차년도
가. 멘케스, 월슨씨 유전자 (cDNA) 와 유전자 변이 확보 및 조사, 특이적 항체 개발, Metallothionein(MT)의 생성과 분해 기작.
나. 사람 미토콘드리아 RNA 중합효소(h-mtRP), 전사 촉진인자(h-mtTFA), 전사 종결인자(h-mtTERF) 유전자를 클로닝.
다. Gene targeting을 위한 2 종류 vector 제조, homologous recombination 유도용 vector에 삽입
라. 초파리 monoamine 계 신경전달물질 생합성 관련 유전자들의 규명하고 그 구조 및 특성 분석.
마. 국내실정에 적합한 신생아 난청의 조기진단을 위한 검진 시스템 구축.
바. 고콜레스테롤중 환자 및 가계 확보, LDL receptor 유전자 돌연변이 검색, LDL receptor 유전자 돌연변이 및 polymorphism 분석, DNA marker들에 의한 linkage analysis.
사. OTC 및 ASS 결핍중환자의 가계도 확립 및 등록사업, 세포주 확보.
아. 환자 조직 및 혈액의 수집 및 세포 배양과 세포주 확립, 11p15 imprinted gene들의 불활성화 기작의 연구
자. 모델동물의 육종과 교배실험, 유전자 지도 작성을 위한 마커 탐색, fine mapping, 백내장 동물모델의 백내장 생성과정 확인.
차. 특정 PSI 발현 세포주 개발, 정상 및 이상 PSI들에 의한 세포 손상 기전 규명
- 2차년도
가. 멘케스, 월슨씨 환자의 유전자 변이 규명 및 세포내 발현부위 인지, 월슨씨 유전자의 alternative form 과 프로모터 스크리닝을 통한 조절부 위의 조사.
나. 사람 미토콘드리아 RNA 중합효소, 전사 촉진인자, 전사 종결인자 재조합 단백질들을 E. coli내에서 발현시키고 순수 정제.
다. DNA transfection과 homologous recombination을 통해 gene targeting vector를 iNOS gene 양말단에 integration시킨다. Positive, negative selection을 이용, 정확하게 targeting된 clone을 확보·분석.
라. Igf2r, U2afl-rsl, p57???의 생쥐 노화에 따른 메틸화의 변화 조사, 관련 유전자에 대한 자료 수집 및 조사방법의 확립, 실험의 비교대조군 확립
마. T-T의 앞, 뒤 염기가 A인 DNA와 T-T위치에서 세 가지 광손상 duplex 제조, mismatch된 DNA duplex 구조 규명과 각 광손상 돌연변이 유발성의 변화 규명.
바. 초파리의 monoamine 계 신경전달물질 생합성 유전자들의 발현 조절 기작 분석
사. Protocol에 의한 가계도 작성 및 난청유형분석, Cx26 35de1G이외의 다른 형태의 변이 연구.
아. 고콜레스테롤 혈중 환자 및 가계 확보, ApoB 유전자에서 돌연변이 탐색 조건 확립, LDL receptor 및 ApoB 유전자의 돌연변이 탐색 및 분석, 한국인 특유 돌연변이의 분자 병리 특성 연구.
자. OTC 및 ASS결핍증의 원인이 되는 유전자 분석기술의 확립, 새로운 돌연변이 및 SNP 발견.
차. 수집한 조직 및 혈액에 대한 유전자 변형과 imprinting이상의 조사, 환자의 가계로부터 조직 및 혈액의 수집의 지속.
카. BAC, PAC을 이용한 contig작성, 백내장 동물모델에서 단백질과 수정체 상피세포의 변형조사 및 가족성 백내장 가계의 확보
타. PSI과 APP 유전자 산물의 인산화 경로 규명
- 3차년도
가. 윌슨유전자 조절인자의 분리정제 시스템 구축, 구리 및 다른 2가 이온농도 변화에 따른 MREa 결합차이 연구와 월슨씨 단백질 세포발현부위 관찰 방법 확립, 멘케스 유전자 조절기작 연구, MT분해통한 간세포괴사의 원인규명 여부.
나. 사람 미토콘드리아의 전사 체계를 시험관내 재구축과 멜라스 유전병이 미토콘드리아 내 전사에 미치는 영향을 규명.
다. iNOS gene의 자, pegl. peg3, impact, grfl 등 각인된 유전자 발현양상 조사 및 메틸화 변화 조사, 각 생쥐 strain간의 RFLP 동정통한 대립형질간의 발현변화 비교 및 methylation 조사.
마. T-T의 앞, 뒤 염기가 G인 DNA와 T-T위치에서 세 가지 광손상 duplex제조, 주리 엽기가 A와 비교하여 이웃한 엽기가 미치는 영향 규명.
바. monoamine 계 신경전달물질 관련 초파리 돌연변이 주들을 transient expression astray 및 transgenic fly system을 통해 유전자 발현 조절 분석.
사. 정상 신생아에서 Cx26변이율 조사, Cx26이외의 다른 난청유전자 발굴
아. genetype-phenotype 연관관계 조사 및 예후의 예측, 진단에의 응용.
자. 유전병에 대한 유전자 진단법의 모색 및 유전병과 암과의 연관성에 관한 분자생물학적 조사
차. 원인유전자의 후보 유전자 도출을 위하여 원인유전자의 물리적 지도 작성, 새로운 STS 마커의 개발, 가족성 백내장 pedigree 완성, 백내장 동물모델에서 유전자 발현의 특이성 조사시험
카. PSI 유전자 이상에 의한 APP 유전자의 대사 조절 경로 규명

Abstract ▼

In order to identify a variety of human genetic disease in Korea and establish basic database for developing pharmaceutic drugs, we performed the for following experiments and studies.
- First year
가. Cloning and sequencing of Menkes'(MNK) and Wilson's(WD) cDNA from patients, Production of s

In order to identify a variety of human genetic disease in Korea and establish basic database for developing pharmaceutic drugs, we performed the for following experiments and studies.
- First year
가. Cloning and sequencing of Menkes'(MNK) and Wilson's(WD) cDNA from patients, Production of specific antibodies against WD Protein, Verification of mechanism on generation and degradation of Metallothionein (MT).
나. Cloning of CDNA of human mitochondrial RNA polymerase(h-mtRP ) and transcription factors(h-mtTFA and h-mtTERF).
다. Construction through isertion of homology arms (iNOS gene) amplified by PCR into gene targeting vector.
라. Isolated and identification of the biosynthetic genes for drosophila monoamine neurotransmitters, Analysis of their genetic characteristics.
마. TEOAE Hearing screening test for all newborns at Ajou univ. Hospital Genomic DNA sequencing for Cx26 in nonsyndremic deafness patients.
바. Selection of the FH patients ant collection of blood samples from the Korean FH patients and families, Screening and identification of mutations of LDLR gene, Linkage analysis of DNA markers,
사. Amplification and sequencing of the OTC genes or ASS genes of probands.
아. Collection of tissues from BWS patients and families, Elucidation of on mechanism of genomic imprinting using cell culture, Collection of tissues free normal families.
자. Mapping of the cataractous gene(1r2) in high resolution, Development of new markers for fine mapping.
차. establishment of wild type and mutant PSI stable cell line, Studies of cel1 death mechanism based on wild type and mutant PSI
- Second year
가. Identification of localization and expression of the WD mutant protein in HepG2 cell, Examination of WD alternative form, Screening of 5'-flanking region of WD gene.
나. Expression and purification of h-mtRP, h-mtTFA, and h-mtTERF recombinant proteins in E.coli.
다. Integration of gene targeting vectors into both ends of iNOs gene on the genome by DNA transfection and homologous recombination.
라. Investigation of methylation changes in mouse imprinted genes such as Igf2r, U2afl-rsl and p57Kip2 during aging.
마. Preparation of photo-damaged DNA, Determination of mechanism of mutagenesis related to photo-damaged DNA with the mismatched photo-damaged DNA duplex
바. Analysis of the expression of the blosynthetic genes for drosophila monoamine neurotransmitters and the regulatory elements important for the promoter activity.
사. Analysis of NSLD allele and pedgree by protocol, Examination of other mutant except Cx2635de1G.
아. Establishment of a method screening mutations in ApoB gene, Screening and identification of mutations in LDLR gene and ApoB gene as described above, Molecular pathology of novel mutations in Korean FH Patients by expression of the LDLR.
자. Based on their molecular lesions, performance of the prenatal monitoring of fetuses from four unrelated families at risk using genomic DNA from chorionic villi sampling(CVS).
차. Analysis of genetic alteration and imprinting status for tissues of BWS patients, Studies on alteration of imprinting using cell culture, Continuation en collection of BWS patients and their tissues.
카. Physical mapping using YAC and BAC, Construction of korean pedigree which showed cataract.
타. Intracellular phosphorylation pathways of PSI and APP.
- Third year
가. Establishment of purification system of MREa binding protein (MREaBP) and examinantion of MREaBP binding pattern responding to copper ion. Analysis of mouse liver cell's degradation with MT. Localization of the WD wild type protein and study on the effect of MREa in the MNK promoter.
나. Characterization of human mitochondrial transcription factors (h-mtRP, h-mtTFA, and h-mtTERF), Selection of mTERF binding sites using SELEX, Effects of the MELAS mutation on mTERF-binding.
다. In vivo excision and amplification of the target iNOS gene.
라. Investigation for the changes of expression level and imprinting status of several mouse imprinted genes(p57kip2, Hl9, Igf2, peg1, peg3, impact and grf1), Investigation of methylation status of mouse imprinted genes showing any changes of expression level.
마. Preparation of photo-damaged DNA flanked by GC base pairs, Sructural comparison of photo-damaged DNA related to mutagenesis about the effects on the rate of repair, Explanation the sequenceeffects on the mutagenic properties of the photo-damaged DNA through obtaining the solution structure.
바. Analysis of the promoter mutants by transient expression assay and employment transgenic fly system for in vivo expression.
사. Study on Cx26 mutant rate from normal newborn, Analysis of other allele of NSLD.
아. Construction of the mutant OTC cDNAs and cotransfection with β-galactosidase gene into COS-1 cells.
자. Continuation on collection of BWS patients tissues and analysis of genetic alteration and imprinting status, Studies en diagnosis methods for BWS, Studies on relationship between BWS and cancer, Search for new imprinted genes.
차, Development of new STS marker, establishment of Korean cataract pedigree and analysis of the gene expression.
카. Effect of PSI mutation on APP processing pathway

목차 Contents

• 제 1 장. 서 론...35
• 제 2 장. 국내외 기술개발 현황...54
• 제 3 장. 연구개발 수행내용 및 결과...58
• 제 4 장. 연구개발 목표 달성도 및 대외기여도...100
• 제 5 장. 연구개발 성과 및 활용계획...118
• 제 6 장. 참고문헌...130