초록 ▼

1세부과제는 전국 18개 병원의 만성간질환 16,436명 중 68.8%가 B형간질환이었음 고대구로병원 B형간질환 2447명, 길병원 2250명. 삼성서울병원 2670명을 간질환 환자관리 프로그램을 개발하고 이를 통해 분석하였음. 급성B형간염의 빈도는 과거에 비해 크게 감소하였고 발생연령도 30대 이상이 전체의 65.4%였음. 여성 H5V보유자의 10세 이하의 자녀들의 주산기 감염율은 7.4%로 감소하여 주산기감염 예방정책의 목표치에 근접하고 있음. 만성B형간염 환자의 최초 ALT 상승 연령은 $35.7{\pm}10.5$

1세부과제는 전국 18개 병원의 만성간질환 16,436명 중 68.8%가 B형간질환이었음 고대구로병원 B형간질환 2447명, 길병원 2250명. 삼성서울병원 2670명을 간질환 환자관리 프로그램을 개발하고 이를 통해 분석하였음. 급성B형간염의 빈도는 과거에 비해 크게 감소하였고 발생연령도 30대 이상이 전체의 65.4%였음. 여성 H5V보유자의 10세 이하의 자녀들의 주산기 감염율은 7.4%로 감소하여 주산기감염 예방정책의 목표치에 근접하고 있음. 만성B형간염 환자의 최초 ALT 상승 연령은 $35.7{\pm}10.5$세였음. e항원 양성율은 평균 47%로 연령 증가에 따라 감소하였고 e항원 음성자 중 24.6%가 HBV DNA(+)였으며 관찰기간 중 e항원의 누적 음전율은 6.6%(1년), 12.0%(2년), 14.7%(3년)였음. 라미부딘 사용환자가 만성간염 중 23.0%, 간경변증 중 17.2%를 점유하고 있었음. 정기추적검사에서 발견된 간암예의 29.3% 및 초진시에 간암을 가진 환자의 8.8%정도가 혈관침범이 없는 3cm 이하의 간암이었음. 간경변 환자의 누적 생존율은 간경변의 중등도에 따라 생존율을 살펴보면 Child B에서는 1년 91%, i년 52%, 3년 70%였고 Child C군에서는 1년 70%, 2년 47%였고, 3년 31% 었으며 Chil(1분류 쿵 혁중 bilirubin치가 생존율과 가장 판련성이 높았다. 2세부과제는 C형간염환자의 임상경과와 치료반응에 영향을 미치는 요인분석을 위해 환자의 HLA typing 을 분석하여 유의한 결과를 얻었고, 바이러스의 유전자형이나 바이러스 농도 등이 치료에 영향을 미치고 유전학적으로는 특별한 연관성을 관찰하지 못하였음. C형간염의 병태생리 기작 중 간조직의 손상이 바이러스 농도 혹은 유전자형과 관련이 있는 것인지를 분석한 결과 유전자아형이나 바이러스농도와는 관련이 없었고 혈청학적 ALT는 간조직 소견 중 일부와만이 연관성을 관찰하였고, HCV에 의한 간손상의 기전중 Fas mediated apoptoisis를 통해 일어난다는 것을 환자의 간조직과 형질전환생쥐에서 증명하였음. 3세부과제는 만성B형간염에서 lamivudine 치료 후 반응률, viat breakthrough(VB)의 발생률은 외국과 큰차이가 없었으나 e항원이 음전되어 투약 종료시 재발률은 6개월에 58%이었음. 따라서 우리나라에서는 e항원이 음전되더라도 장기간의 lamivudine 유지치료가 필요할 것으로 생각됨. VB의 발생률은 e항원 음성군에서 매우 낮아 lamivudine의 장기치료시 효과적인 결과를 기대할 수 있으리라 생각된다. VB 후 임상경과는 약 45%에서 급성 악화의 양상을 보여 VB 후 lamivudine 유지 치료가 과연 효과적인가는 좀더 후속 연구로 증명되어야 하겠음. 4세부과제는 만성B형간염에서 HBV-DNA의 각종 변이의 발현빈도를 밝히기 위한 대단위 cross-sectional study를 시행하여 precore 변이는 e항원 음전시 거의 항상 일어나며 core promoter TA 변이는 e항원 양성 및 음성 환자들에서 흔하게 관찰되고 바이러스의 증식정도 혹은 간질환의 중증도와 관련이 없음을 규명 하였음. 또한 인터페론 치료에 대한 반응과 core gene mutation과의 연관성을 규명하기 위한 연구를 시행하여 core 유전자 변이가 무반응군에서 반응군에 비하여 흔히 검출되어 치료효과에 영향을 미치는 요소임을 규명하였고 lamivudine 치료 후 e항원 소실군, e항원 지속군 및 치료 중 내성변이 출현군에서의 치료 전 염기서열을 분석하여 각군 사이에 HBV-DNA 변이 발현 빈도에 의미있는 차이가 없음을 관찰하였음.
5세부과제는 B형간염바이러스의 증식에 관련되는 바이러스 구성요소와 숙주세포 구성인자의 상호작용을 이해하기 위하여 숙주세포의 세포인자인 HSP 단백질이 pol-primer complex 형성에 관여하여 primer 합성 및 DNA합성을 elongation시키는 사실을 확인하였으며, H5x 바이러??인하였음. 이들 세포에서는 미토콘드리아와 같은 세포 내 소기관이 핵 주변에 밀집되어 있는 것을 확인하였으며, 세포골격을 따라 이동하는 motor 단백질의 활성화가 변화되었음을 발견하였음. 따라서, HBx는 숙주세포의 환경을 변화시켜 바이러스가 숙주세포에 감염 및 다른 주변세포로 확산되는 과정에 영향을 미칠 수 있는 것으로 사료됨. 6세부과제에서 CAMP-response element (CRE)-decoy oligonucleotide(DO)는 CRE-binding protein (CREB) 경로억제를 통한 HBV enhancer I [특히, HBx promoter] 활성 억제로 HBV 증식을 억제할 가능성을 보여주어 HBV replication에서 CREB 경로의 중요성을 부각시켜 새로운 증식조절 기전의 존재 가능성을 제시하였고, HBV 증식과 급성기 pathogenesis의 이론적 이해와 연구에 기초자료 제공과 CRE-DO의 B형간염 치료제로서의 가능성을 한층 높인 연구결과로 CRE-DO 뿐만 아니라 CRE-directed gene regulation을 조절할 수 있는 다양한 기법을 이용한 B형간염의 치료법 개발에도 활용될 수 있을 것임. 7세부과제는 한국인 간암 발생위험 요인을 분석하여 개인별 위험요인을 간암발생 예측모형에 대입하여 간암발생 위험도를 산출하여 간암조기진단 실적을 평가한 결과 매우 일치도가 높은 것으로 확인하였음. 또한 간암의 조기진단을 위한 간암표지자 개발은 기존의 표지자를 능가하는 새 표지자가 개발되지 못했으나 PIVKA ll와 AFP-L3의 적용가능성을 확인하였다. 본 연구성과는2003년부터 실시하는 국가 간암 조기검진사업의 기초자료로 활용될 수 있으며, 전국 암등록사업과 간암 예방사업의 기초자료로 활용될 수 있음. 8세부과제 본 연구를 통하여 암세포 특히 간암 세포에만 선택적으로 증식하여 증폭된 항암효과를 가지는 conditionally replicating recombinant adenovirus를 개발하고자 하였음. 이러한 목적으로 개발된 아데노바이러스 (YKL-1, YKL-1001)들은 궁극적으로 일차감염 간암세포뿐아니라 주변의 간암세포까지도 선택적으로 살상하여 개선된 항종양효과를 나타내었음. 또한 이들 아데노바이러스와 adriamycin같은 항암제를 간암 등 암세포 주에 동시처리하면 보다 증폭된 세포 살상 효과를 얻을 수 있었음. 따라서 본 연구 결과는 선택적 증식 재조합 아데노바이러스의 암 유전자 치료 가능성을 제공함. 9세부과제는 새로운 retinoid 유도체 K10, K14, K4l이 합성되었고, K40은 약간 떨어지지만, K10과 K4l은 ATRA와 HPR에 비교될 정도로 c-Jun의 전사활성을 억제하였음. 세포증식에 미치는 영향에서 HPR의 IC50 값은 $3{\sim}20{\mu}M$, K10은 $0.5{\sim}12{\mu}M$, K4l은 $0.8{\sim}5.5{\mu}M$ 이었다. 간암 세포주의 retinoids 치료 전 후 증식 능 억제 비교 관찰에서 $1\;{\mu}M$의 RA에서 SNU368과 SNU398에서 시간에 따라 성장 억제 효과가 증가하였으나, SNU354와 Hep35에서는 미미한 성장 억제 효과가 나타났음, Retinoids에 의한 apoptosis 유도, 세포 주기 변화와 레티노이드 수용체 발현 양상 분석을 관찰하였고 Retinoid 수용체의 발현과 ICFBP-3, AFP 발현 정도를 IGFBP-3는 증가하였고 AEP는 발현이 감소하였음.

Abstract ▼

The 1st project: Of the 16,436 patients, with chronic liver disease from 18 hospitals, 68.8% had HBV-related liver disease. We analyzed the data of 7367 patients who had HBV-related liver diseases. Acute hepatitis B infection has decreased markedly over the past years and the 65.4% of total patients

The 1st project: Of the 16,436 patients, with chronic liver disease from 18 hospitals, 68.8% had HBV-related liver disease. We analyzed the data of 7367 patients who had HBV-related liver diseases. Acute hepatitis B infection has decreased markedly over the past years and the 65.4% of total patients was over 30 years. old. Perinatal infection rate of the children unde. age 10 with HBsAg(+) mother was now 7.4%. The mean age when ALT strats to rise in chronic hepatitis B patients was 35.7110.5. The positive rate(47%) of e antigen decreased with increasing age. Of the patients with e antigen(-), 24.6% was HBV DNA(+). Cumulative rate of HBeAg loss was 6.6%(Iyr), 12.0%(2yrs) and 14.7%(3yrs). 23.0% of pts with chronic hepatitis and 17.2% of liver cirrhosis were treated with lamivudine. 29.3% of cases who were found to have HCC during periodic follow up and 8.8% of casese who were diagnosed with HCC on initial visit, the size of the mass was about 3cm without vascular invasion. The cumulative survival rate of patients with liver cirrhosis was 91%, 1st year, 82%, 2nd year and 70%, 3rd year in Child B group and 70%, 1st year, 47%, 2nd year and 31% 3rd year in Child C group. The 2nd project To investigate the factors influencing clinical course and the efficacy to antiviral therapy in chronic liver diseases with HCV infection, we performed HLA typing and moleular work including HCV genotyping and HCV RNA quantitation. These results virological factors but not host genetic factor influence the efficacy toativiral therapy. To clarify the mechanism of pathogenesis of liver damage by HCV, we studied the relationships betwee the histopathology of the liver and virological and seological parameters. Finally we demonstrated that Fas mediated apoptosis occurred in the patients HCV infection and in vivo transgenic mice expressing HCV coreprotein. The 3rd project: The rates of response and viral breakthrough for lamivudine therapy in Korean patients with chronic hepatitis B were similar to those in other Asian and Caucasian patients. However, the relapse rate in patients with e loss after cessation of lamivudine therapy was high (5.8% in 6 month after cessation). Therefore, long duration of lamivudine therapy after e loss is needed for durable response in Korea. The effective lamivudine therapy is expected in e-negative chronic hepatitis B because of lower viral breakthrough rates in spite of YMDD variants emerged. The further studies are needed for management strategy of patients with viral breakthrough because about of half of breakthrough cases experienced acute exacerbation. The 4th project: performed a large scale cross-sectional study and revealed that precore stop codon mutation occur almost invariably along with e항원 seroconversion and core promoter TA mutation is frequent both in the e-positive patients and e-negative patients irrespective of viral replication levels or disease severity. The 4th project also revealed that mutations in the core protein of HBV occur more frequently in non-responders than responders to interferon treatment of chronic hepatitis B and may be a factor responsible for the failure of interferon treatment. But no correlation was found between the response to lamivudine therapy and HBV-DNA mutations.
The 5th project: For a good understanding of the interaction between cellular factors and viral factors involved in the H5V viral DNA replication, we confirmed that two different heat schock proteins such as Hsp60 and Hsp90 were involved in the formation of pol-primer complex and in the translocation of pol-primer complex to DR1 region in the DNA replication. And also we found that newly constructed cell lines over-expressing HBx protein influenced on the expression level of several genes such as $PKC{\alpha}$. In this cell line, cellular organelles such as mitochondria came to near the nuclei and meter proteins moving along the cytoskeleton were activated. This study provides the understanding on HBV replication and the pathogenesis in acute phase of HBV infection. The 6th project: In this study, it was demonstrated that CAMP-response element (CRE)-decoy oligonucleotide inhibited transactivator activity of the enhancer I in hepatitis B virus (HBV) genome by interfering the CRE-binding protein (CREB)-dependent signaling pathway. It was suggested that CRE-decoy oligonucleotide blocked the H5V replication by that means and CRE-directed gene regulation play an important role in the HBV replication. This study provides the understanding on HBV replication and the pathogenesis in acute phase of HBV infection. It is possible that not only CRE-decoy oligonucleotide but also the technique modulating CRE-directed gene regulation are developed as therapeutics of H8V infeccon. The 7th project: This study is conducted to develop a new screening method for early diagnosis of hepatocellular carcinoma. We established individual prediction model according to risk factors for development of HCC in Korea. We cordirmed the reliability of the newly established model by the prospective study. Therefore this model can improve the efficiency of screening programs by focusing on high risk group and our study can help to establish national screening program for early diagnosis of HCC in Korea. The 8th project: We attempted to generate recombinant adenovirus, conditionally replicating in human hepatocellular carcinoma .(HCC) cells. As a result, we demonstrated that both YKL-1 and YKL-1001 were capable of replicating in and killing HCC cells, which led to further killing of neighboring cancer cells. In addition, co-administration of these adenoviruses with adriamycin induced much enhanced anticancer effect in vitro. Thus, the current study illustrated the promising antitumoral efficacy of conditionally replicating recombinant adenovirus, such as YKL-1 or YKL-1001. The 9th project: K10, K40, K4l (new retinoid derivatives) was synthesized and they inhibited the transcriptional activity of c-Jun. They also inhibited cell growth and IC50 was $3{\sim}20{\mu}M$ (HPR), $0.5sim}12{\mu}M$ (K10), and $0.8{\sim}5.5{\mu}M$ (K4l). $One\;{\mu}M$ of RA inhibited cell growth of live. cancer cell lines, especially Apoptosis and cell cycle arrest bt retinoids was observed and expression of IGFBP-3 and AFP was also observed. Increased expression of ICFBP-3 and decreased expression of AFP was observed.

목차 Contents

• Ⅰ. 연구개발결과 요약문...8
• 총괄연구개발 추진체계의 기능적 추진체계...8
• 연차별 연구개발 추진계획표...9
• Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과...11
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...11
• 2. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과...13
• 3. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...15
• 4. 총괄연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도...17
• 5. 총괄연구개발과제의 활용계획...28
• 6. 첨부서류...30