유전자재조합식품 안전성관리사업 연구보고서;다중분석 PCR을 이용한 GMO 가공식품 검출방법 Detection of Genetically Modified Foods using Multiplex PCR원문보기
보고서 정보
주관연구기관
식품의약품안전청 Korea Food & Drug Administration
연구책임자
김해영
발행국가
대한민국
언어
한국어
발행년월
2002-00
주관부처
식품의약품안전청
사업 관리 기관
식품의약품안전청 Korea Food & Drug Administration
등록번호
TRKO200300002515
DB 구축일자
2013-04-18
초록▼
1. 외국의 GMO 분석 방법 조사 및 개발된 GMO에 삽입되어진 외래 유전자 확인·비교 분석 미국, 일본, 유럽연합 등을 중심으로 각 국에서 허용하고 있는 GMO 식품의 분석 방법 조사와 각각의 GMO에 삽입되어진 외래 유전자를 문헌과 인터넷 기타 관련된 연구기관을 활용하여 확인하였으며, 우리나라 시중에 유통되고 있는 이러한 미국산 원료를 이용한 가공식품에 GMO 여부를 확인하였다. 2. 유전자재조합 농산물의 열처리를 이용한 genomic DNA의 pattern 변화와 Duplex PCR을 통한 민감도 측정 식품의
1. 외국의 GMO 분석 방법 조사 및 개발된 GMO에 삽입되어진 외래 유전자 확인·비교 분석 미국, 일본, 유럽연합 등을 중심으로 각 국에서 허용하고 있는 GMO 식품의 분석 방법 조사와 각각의 GMO에 삽입되어진 외래 유전자를 문헌과 인터넷 기타 관련된 연구기관을 활용하여 확인하였으며, 우리나라 시중에 유통되고 있는 이러한 미국산 원료를 이용한 가공식품에 GMO 여부를 확인하였다. 2. 유전자재조합 농산물의 열처리를 이용한 genomic DNA의 pattern 변화와 Duplex PCR을 통한 민감도 측정 식품의 가공조건 중 genomic DNA의 분해정도에 가장 큰 영향을 미칠 것으로 예상되는 열처리 조건을 유전자재조합 콩에 처리하여 온도 상승에 따라 DNA의 분해정도가 점차적으로 커져감을 확인하였으며 ferritin primer (243bp) 와 EPSPS (5-enolpyru vylshikimate-3-phosph-ate synthase) primer (121bp)를 이용한 duplex PCR를 통해 DNA의 분해정도에 따른 민감도를 측정하였다. 3. Nested-PCR에 의한 검출한계 측정 3%, 2%, 1%, 0.5% 0.1%, 0.05%, 0.01%, 0.005% 유전자재조합 콩으로부터 각각의 DNA를 분리한 후 EPSPS3/EPSPS2 primer pair (600bp)를 이용하여 1차 PCR를 실시하여 검출한계를 확인한 후 각각의 PCR products를 EPSPS5/EPSPS4 primer pair (107bp)를 이용하여 Nested-PCR를 실시함으로써 각각의 % 함량에 따른 검출한계치가 보다 더 높게 나타남을 확인하였다. 4. 다양한 GM유전자가 삽입된 농산물 및 가공식품의 다중 분석 PCR 방법의 확립 수입 농산물 대두 및 옥수수와 현재 시중에 판매되고 있는 대두와 옥수수 가공식품 중 GMO 표시대상식품을 대상으로 콩 가공식품들 (콩가루, 콩나물, 두부, 영유아용 조제식, 된장, 청국장 등)과 옥수수 가공식품들 (옥수수가루, 팝콘용 옥수수, 스프, 영양보충용식품 등)을 본 연구의 sample로 이용하였다. 또한 이러한 식품들의 비교대상으로써 Glyphosate tolerant soybean (GTS, 제초제 Glyphosate에 내성을 갖도록 유전자재조합 된 콩)과 Non-GTS를 Monsanto사 (USA)에서 제공된 두 종류의 GTS와 Non-GTS 콩을 사용하였으며, 옥수수는 3% (Event176, Btll, Mon810, GA2l, T25가 모두 혼합되어 있는 3% maize powder) GM maize를 이용하였다. GTS 검출을 위한 primer들과 GTS에 삽입되어진 Agrobacterium tumefaciens CP 4의 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase (EPSPS) gene, Nopaline synthase (NOS) terminator gene과 cauliflower mosaic virus의 35S promoter (CaMV 35S) gene을 근거로 하여 13개의 primers를 gene bank를 통하여 제작하였고, 옥수수의 경우 기존에 알려져 있던 primer와 식품의약품안전청으로부터 분양받은 primer, 그리고 새롭게 제작한 primer를 이용하여 GM maize 5개 lines에 대한 multiplex PCR의 조건을 확립하였다. 모든 sample들은 CTAB method와 Wizard magnetic DNA purification system for food kit, 그리고 QIAGEN DNeasy mini kit을 이용하여 DNA을 추출하였다.
Abstract▼
The different kinds of genetically modified organisms (GMO) have been approved in several countries during recent year and many of them have been utilized as foods and feeds. Identification of GMO in foods has been becoming an issue of great interest, because of the increasing number of GMO-derived
The different kinds of genetically modified organisms (GMO) have been approved in several countries during recent year and many of them have been utilized as foods and feeds. Identification of GMO in foods has been becoming an issue of great interest, because of the increasing number of GMO-derived products launched into the food market and the increased customer demand for safety and labeling of such foods. To cope with this demand, it is necessary for the establishment of rapid and sensitive techniques in the detection of genetically modified materials from foodstuffs.From this study, we demonstrated multiplex PCR to develop for detecting the multigenes inserted in genetically modified soybean and corn such as Roundup Ready soybean, Event 176, Btll, T25, Mon810 and GA2l. First, the patterns of genomic DNA were investigated for temperature and pH condition of processed foods. Effect of temperature on soybean showed the degradation of genomic DNA in broad ranges. Secondly, the genetically modified soybean and maize were monitored to the simultaneous detection of various genetically modified materials from the commercialized foods in market. Primer sets for the specificity of multiplex PCR were designed and the experimental conditions were studied for application. It is concluded that this study is useful for fast and convenient screening of GM soybean and maize.
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