초록 ▼

${\circ}$ 세포의 발생과 분화 및 노화 과정에서 많은 세포들이 apoptosis라는 자연적인 세포사멸과정에 의해 제거된다.
${\circ}$ 그러나 세포의 분화 및 발생과정에서 뿐만 아니라 질병이나 방사선 조사 등에 의해서도 apoptosis의 특징적인 현상들이 나타나는 것으로 밝혀져 apoptosis의 원인 및 발생기전 나아가 apoptosis를 방지할 수 있는 약물의 개발 등에 관한 연구가 활발히 이루어지고 있다.
${\circ}$ 세포의 사멸과 연관된

${\circ}$ 세포의 발생과 분화 및 노화 과정에서 많은 세포들이 apoptosis라는 자연적인 세포사멸과정에 의해 제거된다.
${\circ}$ 그러나 세포의 분화 및 발생과정에서 뿐만 아니라 질병이나 방사선 조사 등에 의해서도 apoptosis의 특징적인 현상들이 나타나는 것으로 밝혀져 apoptosis의 원인 및 발생기전 나아가 apoptosis를 방지할 수 있는 약물의 개발 등에 관한 연구가 활발히 이루어지고 있다.
${\circ}$ 세포의 사멸과 연관된 세포내 신호전달과정이 많이 있으나 근래 $Ca^{2+}$ homeostasis의 상실도 세포의 사멸을 유발하는 요인으로 생각되고 있다.
- 그러나 세포내 칼슘증가가 어떤 기전에 의해 일어나는지 아직 밝혀져 있지 않음.
${\circ}$ 따라서 본 연구에서는 대표적인 세포사멸 유발물질인 staurosporine을 사용하여 세포내 칼슘의 동원 부위 및 칼슘증가가 세포사멸에 미치는 영향을 밝히고자 하였다.
${\circ}$ 타액선세포에서 staurosporine에 의해 세포사멸이 유도될 때 세포내 칼슘이 증가하는데 이때 칼슘을 동원하는 부위가 어디인지 확인.
- 타액선세포를 carbachol로 자극하고 세포외부의 칼슘을 제거한 후 staurosporine을 투여하면 세포내 칼슘농도가 증가하는데 이는 staurosporine에 의한 세포질내 칼슘증가가 세포외부나 소포체 (endoplasmic reticulum) 이외의 다른 세포내 소기관에서 칼슘이 유리되어 일어남을 보여주는 결과이다.
- 타액선세포를 carbachol로 자극한 후 세포외 칼슘을 제거하여 소포체의 칼슘을 고갈시키고, 미토콘드리아의 막전위차를 없애주어 미토콘드리아내 칼슘을 세포질로 유리시키는 carbonyl cyanide p-trifluoromethoxyphenylhydrazone (FCCP)를 투여하였으나 칼슘농도의 증가는 거의 없었으며 칼슘 ionophore인 ionomycin을 투여하여도 역시 칼슘증가가 매우 작은 것으로 보아 타액선세포에서는 미토콘드리아에 많은 양의 칼슘이 저장되어 있지 않으며, 따라서 staurosporine에 의한 칼슘증가에 미토콘드리아는 관여하지 않음을 확인하였다.
- Carbachol로 타액선세포를 자극한 후 세포외 칼슘을 제거하고 ionomycin과 monensin (세포 소기관내 pH를 외부와 같게 해주는 $Na^+/H^+$ exchanger)을 투여하면 세포내 칼슘이 즉각 증가하는데, 이는 분비과립과 같은 세포내 산성 소기관에 고농도의 칼슘이 들어있음을 의미한다. 또한 staurosporine을 처리하여 세포내 칼슘농도를 증가시킨 후 ionomycin과 monensin을 투여하면 세포내 칼슘 농도가 전혀 증가하지 않아, staurosporine에 의한 칼슘 증가와 ionomycin과 monensin에 의한 칼슘증가는 동일한 세포내 칼슘 저장고로부터 나온다는 것을 알 수 있었다.

Abstract ▼

Apoptosis, which is characterized by cell shrinkage, membrane blobbing, and nuclear DNA condensation and fragmentation, is an intrinsic cellular suicidal p개gram activated during normal physiological process involved in the development However, apoptotic pathways are also known to be activated by var

Apoptosis, which is characterized by cell shrinkage, membrane blobbing, and nuclear DNA condensation and fragmentation, is an intrinsic cellular suicidal p개gram activated during normal physiological process involved in the development However, apoptotic pathways are also known to be activated by various diseases, chemicals and radiations. Although the mechanisms by which such insults induce apoptosis remain unknown, they may serve as therapeutic targets for the diseases. It is now believed that the disruption of intracellular $Ca^{2+}$ homeostasis is a critical event in apoptosis. The $Ca^{2+}$ -ionophore, such as A23187 and ionomycin, and the selective inhibiter of endoplasmic reticular $Ca^{2+}$ -ATPase thapsigargin elevate cytosolic $Ca^{2+}$ concentration ([$Ca^{2+}$]c) and cause apoptosis. In addition, increase in [$Ca^{2+}$] has been reported to contribute to apoptosis in response to various pathological conditions. A variety of compounds and experimental conditions, including staurosporine, oxidative stress and withdrawal of trophic factors, induce apoptosis in various cells. Staurosporine, a potent inhibitor of protein kinases, has been widely used as a usefull tool in understanding the biochemical chain of events involved in apoptosis. The exact mechanism by which staurosporine induces apoptosis has not been established yet. In the present study, we aimed to elucidate the source and the role of $Ca^{2+}$ in staurosporine-induced apoptosis in salivary acinar cells. Staurosporine increased [$Ca^{2+}$]c after inositol 1,4,5-trisphosphate ($IP_3$)-sensitive $Ca^{2+}$ store was depleted. Ionomycin caused only small increases in [$Ca^{2+}$]c after the depletion of $IP_3$-sensitive $Ca^{2+}$ store, whereas ionomycin+monensin caused large increases. However, ionomycin+monensin did not increase [$Ca^{2+}$]c when added after [$Ca^{2+}$]c was increased by staurosporine, indicating that acidic $Ca^{2+}$ store was the main source of $Ca^{2+}$. The acidic $Ca^{2+}$ store appeared to be associated with secretory granules, since ionomycin+monensin- and staurosporine-induced [$Ca^{2+}$]c increases were significantly reduced when the acinar cells were degranulated using isoproterenol. The effect of staurosporine on [$Ca^{2+}$]c was mimicked by other protein kinase C inhibitors. These data indicate that staurosporine mobilizes $Ca^{2+}$ from secretory granules probably through the inhibition of protein kinase C in rat submandibular acinar cells.

목차 Contents

• 표지...1
• 제출문...2
• 목차...3
• I. 연구개발결과 요약문...4
• (한글)...4
• (영문)...6
• II. 총괄연구개발과제 연구결과...8
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...8
• 2. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과...12
• 3. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...21
• 4. 총괄연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도...23
• 5. 총괄연구개발과제의 활용계획...25
• 6. 첨부서류...25
• 7. 참고문헌...25
• 첨부서류...26