E 형 간염 바이러스 항체 및 유전자 표준품 개발 기초 연구 A Feasibility Study on Development of Reference Materials for Antibodies and Nucleic Acids Used in Diagnostics of Hepatitis E Virus원문보기
보고서 정보
주관연구기관
서울대학교 Seoul National University
연구책임자
유한상
보고서유형
최종보고서
발행국가
대한민국
언어
한국어
발행년월
2003-11
과제시작연도
2003
주관부처
식품의약품안전청
사업 관리 기관
식품의약품안전청 Korea Food & Drug Administration
등록번호
TRKO200400000938
과제고유번호
1470001204
사업명
식품의약품안전성관리
DB 구축일자
2013-04-18
키워드
E형간염바이러스.항체.유전자 표준품.Hepatitis E virus.reference materials.Nucleic acid Automobiles.
초록▼
E형 간염은 non-A, non-B 간염의 중요한 원인체로서 주로 분변의 오염에 의하여 전파되는 질병으로, 개발도상국에서 공중보건학적 측면에서 매우 중요시 되는 질병이다. 이 질병은 주로 청 장년기에 발생하는 경향이 높으며, 임산부에 감염되면서 치사율이 20%에 까지 이를 정도로 위험한 질병이다. 그러나 국내 뿐 만아니라, 전 세계적으로도 아직까지 이에 대한 특별한 예방기법이 개발되어 있지 못한 상태이다. 최근 여러 나라에서 E 형 간염 바이러스(Hepatitis E virus, HEV)의 분리 보고가 많이 있고, 항체의 분포율이
E형 간염은 non-A, non-B 간염의 중요한 원인체로서 주로 분변의 오염에 의하여 전파되는 질병으로, 개발도상국에서 공중보건학적 측면에서 매우 중요시 되는 질병이다. 이 질병은 주로 청 장년기에 발생하는 경향이 높으며, 임산부에 감염되면서 치사율이 20%에 까지 이를 정도로 위험한 질병이다. 그러나 국내 뿐 만아니라, 전 세계적으로도 아직까지 이에 대한 특별한 예방기법이 개발되어 있지 못한 상태이다. 최근 여러 나라에서 E 형 간염 바이러스(Hepatitis E virus, HEV)의 분리 보고가 많이 있고, 항체의 분포율이 높음을 보고하고 있다. 또한 이 질병의 발생 및 항체분포가 직업과의 밀접한 관련성이 보고 되고, 돼지와 사람에서 분리된 HEV가 염기서열에서 높은 상동성을 나타내고 있는 결과를 볼 때 중요한 인수공통전염병 원인체의 하나로 최근 부각되고 있다. 국내에서는 돼지에서 HEV의 검색 및 사람과 돼지에서의 항체 양성에 대한 보고가 있다. 그러나 아직까지 HEV 검색을 위한 진단기법 및 HEV의 정량적 검색을 위한 정량적 검사법등이 확립되어 있지 않았다. 이에 본 연구에서는 현재까지 세계적으로 분리 보고된 virus의 염기서열을 비교 분석 하였고, 이를 바탕으로 HEV 검색을 위한 PCR 기법을 확립하였다. 이 기법을 국내유래 돼지 HEV에 효율적으로 적용이 가능하였다. 또한, 이 기법으로 전국적으로 수집한 사람의 혈청에서 HEV의 검색을 시도하였다. 현재까지 640개의 혈청 중에서 이들로부터 HEV 유전자를 검색할 수는 있어서, HEV 검색을 위한 PCR 기법을 확립되었음을 확인 할 수 있었다. 이를 바탕으로 HEV 정량적 검색을 위해서 이들의 유전자 염기서열을 바탕으로 한, 정량적 Real-time PCR 기법을 확립하였고, 이들 유전자를 이용하여 in vitro trascription에 의해서 합성한 mRNA에 적용한 결과 DNA를 template로 하는 경우 8.4 copies를 합성된 mRNA를 template로 하는 경우 8.4 x $10^{3}$ copies까지 검출이 가능하였다. 이상의 결과들을 국내에서 사람의 HEV 검출을 위한 PCR기법과 정량적 검출을 위한 Real-time PCR의 표준품으로 제공할 수 있고, 또한 Real-time PCR 기법을 확립함으로써 HEV의 검색을 통한 이에 대한 예방대책의 수립으로 공중 보건상 중요한 HEV에 대한 예방대책수립을 위한 기초를 마련하였다고 생각한다.
Abstract▼
Hepatitis E virus(HEV), the principal agent of enterically transmitted non-A, non-B hepatitis, is a 7.5kb of single-stranded, naked RNA virus. It is one of the important public concerns in many developing countries. The highest incidence of HEV infections occurs in young adults and mortality rate of
Hepatitis E virus(HEV), the principal agent of enterically transmitted non-A, non-B hepatitis, is a 7.5kb of single-stranded, naked RNA virus. It is one of the important public concerns in many developing countries. The highest incidence of HEV infections occurs in young adults and mortality rate of HEV-infected pregnant women is approximately 20%. The HEV is mainly transmitted through a fecal-oral route by consuming contaminated water. However, there is no critical diagnosis method to detect HEV yet. Recently, several HEV isolates were subsequently identified in many countries. It has been known that the homology of swine and human HEV in nucleotide and amino acid sequence was very high. Therefore, the disease has been focused as a new zoonotic agent. Recently, HEV was identified in swine in our country and seroprevalence in human and swine had been reported. However, it has not been established effective methods to prevent the infection in our country. Based on the these situation, we tried to identify HEV agent in human sera with a new diagnostic method developed by comparison of nucleotide sequence of HEV isolated from human and swine in different counties. With 640 human sera, HEV was detected with the method. And, the method could apply to swine HEV that may have high degree of sequence identity with human HEV. The gene was cloned and sequenced to confirm. The cloned is expressing in E. coli. To develop quantitative detection method, mRNAs were generated by in vitro transcription using swine HEV ORF2 gene. Real-time PCR was establish with primers and a probe designed based on the nucleotide sequence of the HEV. With the method, up to 8.4 copies of HEV were detected with plasmid DNA as a template while 8.4 x $10^{3}$ copies of HEV mRNA generated by in vitro transcription could detect. Our data suggested that the the PCR method could applay succefully to detect HEV and no. of HEV particles could quantified with the real-time PCR. With the results generated using the method, preventive measures aginst HEV could be established to improve human health.
목차 Contents
용역연구개발사업최종보고서...1
제출문...2
연구사업 최종보고서 요약문...3
Project Summary...4
목차...5
제1장 서론...6
1절. 연구목적 및 필요성...6
2절. 연구결과에 대한 기여도, 기대효과 및 활용방안...8
제2장 국내.외 기술개발 현황...10
제3장 연구개발수행 내용 및 결과...12
1절. 용역연구수행내용...13
가. E 형 간염 바이러스 검색을 위한 혈청 수집...13
나. PCR기법을 이용한 사람 E형 간염 바이러스의 검색...13
다. human Hepatitis E virus 검색을 위한 PCR기법...36
라. Hepatitis E virus의 정량적 검출 위한 real-time quantitative PCR...42
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