초록 ▼

Mycoplasma pulmonis 감염은 실험용 마우스나 랫드에 만성 호흡기 질병을 일으켜 실험결과에 부정적인 영향을 미치고 생식능력을 저하시킨다. Mycoplasma pulmonis에 감염된 실험용 마우스나 랫드는 체중감소, 호흡곤란, 특징적인 소리를 나타내고 이는 Sendai virus나 MHV와 같은 바이러스질병과 환경암모니아 수준에 의해 악화된다. 임상증상은 미약하지만 Mycoplasma는 체액성, 세포성 면역기전을 억제시키고 종양이식과 같은 특정연구에 지장을 줄 수 있다. 국내 실험동물에서 Mycoplasmapulmoni

Mycoplasma pulmonis 감염은 실험용 마우스나 랫드에 만성 호흡기 질병을 일으켜 실험결과에 부정적인 영향을 미치고 생식능력을 저하시킨다. Mycoplasma pulmonis에 감염된 실험용 마우스나 랫드는 체중감소, 호흡곤란, 특징적인 소리를 나타내고 이는 Sendai virus나 MHV와 같은 바이러스질병과 환경암모니아 수준에 의해 악화된다. 임상증상은 미약하지만 Mycoplasma는 체액성, 세포성 면역기전을 억제시키고 종양이식과 같은 특정연구에 지장을 줄 수 있다. 국내 실험동물에서 Mycoplasmapulmonis는 근절되지 않고 있으며 barrier system에서 사육되는 동물에서조차 흔하게 검출되고 있는 실정이다. 실험동물에서 병원성 미생물의 근절은 백신에 의하지 않고 감염원인 감염동물을 도태시키는 방법이 원칙적으로 적용되고 있다. 따라서 정착하고 경제적인 진단법이 필요하다. 또한 Mycoplasma arthritidis는 Mycoplasma pulmonis와 교차반응을 일으킨다. 본 연구에서는 Mycoplasma pulmonis 종 특이적으로 진단할 수 있는 ELISA법 개발을 목표로 하고 있다.
컨벤셔널 실험동물 사육장에서 혈청학적 진단을 통해 Mycoplasma 양성 마우스와 랫드의 기관지 세척액에서 PPLO 배지를 이용하며 Mycoplasma를 분리하였다 분리된 Mycoplasma는 Dienese염색과 PCR을 이용하여 Mycoplasma pulmonis임을 확인하였다. 분리된 4개의 Mycoplasma pulmonis에서 Mycoplasma pulmonis에 자연감염된 마우스와 랫드의 혈청으로 ELISA법을 수행하여 가 높은 항원성을 나타내는 분리주를 선정하였다. 선정된 Mycoplasma pulmonis 분리주의 whole cell을 이용하여 ELISA method를 개발하여 기존의 외국산 kit와 동일한 진단결과를 얻을 수 있었다 또한 분리주에서 추출한 LAMP를 이용한 ELISA method에서도 외국산 kit와 동일한 진단결과를 얻을 수 있었다. 그리고 Mycoplasma species specific primer를 이용한 PCR기법으로 보다 정확한 진단을 할 수 있는 방안을 제시하였다. 본 연구에서 확립한 진단 kit의 개발 과정과 진단법을 다른 질병의 진단에 있어서도 하나의 프로토콜 제공 할 수 있다. 또한 Mycoplasama pulmonis ELISA kit를 이용하여 국내 실험동물사육시설의 M. pulmonis 모니터링에 활용하여 보다 나은 사육환경을 위한 방향을 제시해 줄 수 있다. 본 연구에서 개발한 M. PUImOniS ELISA kit로 외국산 진단 kit를 대체할 수 있고 M. pulmonis ELISA를 근절시킬 수 있는 방향을 제시할 수 있다. 나아가 국내 실험동물 관리체계와 시설의 선진화로 실험동물분야의 발전과 동물실험 결과의 국제적 신뢰도 확립에 기여할 수 있다.

Abstract ▼

Mycoplasma pulmonis infection causes chronic respiratory disease and decreases reproductive efficiency. Infected mice may display inactivity, weight loss, and ruffled hair coat but the most prominent signs are ″chattering ″ and dyspnea, due to rhinitis and purulent exudate in nasal passages. Concomi

Mycoplasma pulmonis infection causes chronic respiratory disease and decreases reproductive efficiency. Infected mice may display inactivity, weight loss, and ruffled hair coat but the most prominent signs are ″chattering ″ and dyspnea, due to rhinitis and purulent exudate in nasal passages. Concomitant viral pneumonia (Sendai virus, MHV) or elevated environmental ammonia concentrations may increase susceptibility to Mycoplasma pulmonis infection. Mycoplasma pulmonis infection is clinically mild but alters humoral and cellular immunity. Mycoplasma pulmonis infection Still affects mouse and rat colonies. Therefore accurate and economical diagnosis is necessary In addition antigenic cross-reactivity between Mycoplasma arthritidis and iMycoplasma pulmonis affects serological diagnosis. In this study we developed the ELISA method for Mycoplasma pulmonis using whole cell and LAMP of Mycoplasma pulmonis. We isolated Mycoplasma spp. from a small absorbent cotton swab of broncheal flushing fluid on PPLO agar in conventionally housed mice and rats. Mycoplasma spp. confirmed as M. pulmonis by M. pulmonis specific PCR was employed in the development of ELISA antigen. The results of serological test, the ELISA with M. pulmonis were equal to those of a commercial ELISA kit. We also developed Mycoplasma species specific PCR method with specific primers. Our ELISA and PCR method will be used to eradicate Mycoplasma spp. infection in laboratory animal facilities and contribute to quality control of laboratory animals.

목차 Contents

• 용역연구개발사업최종보고서...1
• 표지...2
• 제출문...5
• 연구사업 최종보고서 요약문...6
• Project Summary...7
• 목차 ...8
• 제1장 서 론...9
• 1절 역학과 병인론...9
• 2절 병리...9
• 3절 진단...10
• 4절 의의...10
• 5절 다른 Mycoplasma 감염증의 중요성...10
• 제2장 국내.외 기술개발 현황...12
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과...13
• 1절 국내실험동물 사육장의 Mycoplasma 감염실태조사...13
• 2절 마우스와 랫드에서 Mycoplasma pulmonis 분리...14
• 3절 Western blot을 이용한 항원성 분석...18
• 4절 Mycoplasma species-specific primer를 이용한 PCR 기법의 확립...20
• 5절 M. pulmonis 및 M. arthritidis에 대한 항체 생성...22
• 6절 Whole cell을 이용한 ELISA법 확립...25
• 7절 Lipid-associated membrane protein (LAMP)을 이용한 ELISA법의...30
• 8절 초원심분리를 이용한 Mycoplasma pulmonis speicific antigen 검색...34
• 제4장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도...39
• 제5장 연구개발결과의 활용성과 및 계획...40
• 가. 계량적 성과...40
• 나. 성과내용기술...40
• 다. 활용계획...40
• 제6장 기타 중요 변경사항...41
• 제7장 참고문헌...42
• 총괄 연구과제 요약...45