초록 ▼

배경: 최근 고감도 C-반응성 단백질(hs-CRP)은 미래의 심혈관계 질환을 예측하는 가장 강력하고 유의성 있는 위험 예보자로써 이에 대한 진단시스템에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다.
연구목표: 심혈관계 질환 예측검사에 핵심인자인 hs-CRP의 형광 면역 진단키트를 개발하고 키트의 유용성을 평가한다.
연구내용: CRP를 항원으로 하여 단일클론항체를 생산하고 이 항체를 이용하여 혈중 CRP를 검사할 수 있는 형광면역 크로마토그라피법을 개발한다. 이 측정방법은 전혈을 사용하여 CRP를 정량 검사하는 새로운 방법으로 일회용

배경: 최근 고감도 C-반응성 단백질(hs-CRP)은 미래의 심혈관계 질환을 예측하는 가장 강력하고 유의성 있는 위험 예보자로써 이에 대한 진단시스템에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다.
연구목표: 심혈관계 질환 예측검사에 핵심인자인 hs-CRP의 형광 면역 진단키트를 개발하고 키트의 유용성을 평가한다.
연구내용: CRP를 항원으로 하여 단일클론항체를 생산하고 이 항체를 이용하여 혈중 CRP를 검사할 수 있는 형광면역 크로마토그라피법을 개발한다. 이 측정방법은 전혈을 사용하여 CRP를 정량 검사하는 새로운 방법으로 일회용 카트리지와 레이저 검출시스템을 이용한 형광 판독기로 구성되어 있다. 측정 방법을 보면 형광이 표지된 항체의 완충액과 혼합된 전혈샘플을 테스트 카트리지에 적하하고 12분 동안 반응시킨 뒤 형광 판독기에 장착하여 카트리지 스트립 내의 CRP의 농도를 측정하였다. 개발된 CRP 정량 시스템의 직선성, 검출한계, 재현성 등의 성능 및 기존 자동화 장비의 CRP 검출시스템과 조사하였다.
결과: 검체의 CRP 농도와 신규 개발된 정량법에서 도입한 알고리즘에 의해 계산된 면적비 사이에서 신뢰할 만한 관계성을 얻을 수 있었다 (r=0.998). CRP농도 0-10 ㎎/L 범위 내에서 직선성(linearity)을 나타내었으며 검출한계(detection limit)는 0.133 ㎎/L, 검출범위 내에서의 평균 회복률(recovery)은 105.2％의 결과를 얻었다. CRP 노도 0.5-6 ㎎/L에서 정확도(precision)를 보면 intra-assay의 CV％는 6％이내, inter-assay의 CV％는 8％이내의 우수한 재현성을 보여주었다. 환자의 검체를 본 연구를 통해 개발한 시스템과 면역혼탁법의 도시바 Hitachi 911의 CRP 검출시스템을 이용하여 상관계수를 구해 본 결과 두 검사치 간에 높은 상관관계를 보였다.(R=0.97, p＞0.001). 또는 Dade-Behring 기기를 비교하였을 때에도 매우 높은 상관관계를 보여(R=0.97, p＞0.001) 본 연구를 통해 개발된 현장검사 장비가 임상적으로 유용함을 알 수 있었다.
결론: 본 연구에서 개발된 형광면역 크로마토그라피법을 이용하는 CRP 정량법은 사용하기에 신속하고 간편하며 기존 자동화 기기측정법과 비교하여도 매우 신뢰성이 있는 것으로 나타났다. 특히 전혈을 사용하여 전체 15내에 고감도 C-반응성 단백질(hs-CRP)을 측정함으로써 현장진단 검사용 방법으로 사용될 수 있는 장점을 지니고 있다.

Abstract ▼

Background: C-reactive protein (CRP) is emerging as a potential risk predictor for future cardiovascular diseases and diagnostic assay systems for CRP recently have been developed widely and applied for clinical purposes. Objective: The objective of this study was to develop a fluorescence immunochr

Background: C-reactive protein (CRP) is emerging as a potential risk predictor for future cardiovascular diseases and diagnostic assay systems for CRP recently have been developed widely and applied for clinical purposes. Objective: The objective of this study was to develop a fluorescence immunochromatographic assay system for hs-CRP and to evaluate its technical performance. Methods: Monoclonal antibody was generated against human CRP antigen and fluorescence immunochromatographic assay system using anti-CRP antibody was developed to quantify CRP concentration in whole blood. The assay system consisted of a fluorescence antibody detector buffer, a test strip housed in a disposable cartridge, and a laser fluorescence scanner. Whole blood sample was mixed with detector, loaded onto a cartridge, incubated for 10 min, and the concentration of CRP was measured in a laser-fluorescence scanner. The linearity, limit of detection, and performance of new assay system was tested and evaluated. The comparability of assay was examined with an automated reference method. Results: A reliable correlation of coefficient (r=0.998) was obtained between the ratio value (Ar/Ac) converted from fluorescence intensity by fitting algorism and a concentration of CRP in samples. The linearity fell in the range of 0-10 mg/L of CRP, and the analytical detection limit of assay was 0.133 mg/L. The mean recovery of the control was 105.2％ in a working range. The precision of the intra- and inter-assay in a range of 0.5-6 mg/L was CVs ＜6％ and ＜8％, respectively. The new fluorescence immunochromatographic assay system correlated well with a traditional immunoturbidimetric assay of Hitachi 911 and Dade-Behring (r=0.970, p＜0.001; r=0.970, p＜0.001). Conclusion: The developed fluorescence immunochromatographic assay system through this study was turned out very reliable compared to automated reference method. Specially, the new assay system is a reproducible platform for point-of-care-testing of hs-CRP in whole blood.

목차 Contents

• Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과...6
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...6
• 2. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과...16
• 3. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...18
• 4. 총괄연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도...19
• 5. 총괄연구개발과제의 활용계획...20
• 6. 첨부서류...20
• Ⅲ. 제 1 세부연구개발과제 연구결과...21
• 1. 제 1 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...22
• 2. 제 1 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...26
• 3. 제 1 세부연구개발과제의 최종 연구개발결과...35
• 4. 제 1 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...56
• 5. 제 1 세부연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도...59
• 6. 제 1 세부연구개발과제의 활용계획...60
• 7. 참고문헌...62
• Ⅳ. 제 2 세부연구개발과제 연구결과...66
• 1. 제 2 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...67
• 2. 제 2 세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...69
• 3. 제 2 세부연구개발과제의 최종 연구개발결과...70
• 4. 제 2 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...80
• 5. 제 2 세부연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도...81
• 6. 제 2 세부연구개발과제의 활용계획...82
• 7. 참고문헌...83