초록 ▼

파골세포 분화인자로부터 유도되는 세포신호전달과정에 key 역할을 할 것이라고 예상되는 AWP1의 기능을 실험 동물모델을 이용하여 규명하기 위하여 AWP1 결손생쥐를 제작하고 이 생쥐에서의 표현형을 분석함.
${\cdot}$RANK의 downstream에 있는 AWP1의 genomic DNA를 18kb 얻어서 restriction mapping과 염기서열을 분석하였음.
${\cdot}$RANK의 downstream에 있는 AWP1의 knockout vector를 제작하였음.

파골세포 분화인자로부터 유도되는 세포신호전달과정에 key 역할을 할 것이라고 예상되는 AWP1의 기능을 실험 동물모델을 이용하여 규명하기 위하여 AWP1 결손생쥐를 제작하고 이 생쥐에서의 표현형을 분석함.
${\cdot}$RANK의 downstream에 있는 AWP1의 genomic DNA를 18kb 얻어서 restriction mapping과 염기서열을 분석하였음.
${\cdot}$RANK의 downstream에 있는 AWP1의 knockout vector를 제작하였음.
${\cdot}$AWP1의 genome 중에서 한쪽 allele이 결손된 ES cell을 2개 확보함
${\cdot}$AWP1 KO ES 세포를 3.5day blastocys에 microinjection하여 chimera 생쥐를 10 line 확보하였음
${\cdot}$Cre-LoxP system으로 AWP1의 exon1과 2를 제거할 수 있는 conditional vector 1종 제작함
${\cdot}$RANK의 자극이 CLC-7의 발현을 유도함으로써 파골세포를 활성화시키는 것을 밝힘
${\cdot}$TNF에 의한NF-kB의 활성이 AWP1 결손 세포에서 지속적으로 증가되어 있는 것을 관찰함으로써 AWP1이 TNF에 의한 NF-kB의 활성화에 negative한 역할을 한다는 것을 밝힘
${\cdot}$TNF에의한 세포사멸이 AWP1 결손 흉선세포에서 억제됨을 밝힘

Abstract ▼

To evaluate in vivo role of A WP1 in RANK signaling pathway that leads to osteoclast formation and activation, we have generated AWP1 KO mice by homologous recombination.
${\cdot}$Isolation of genomic fragment of A WP1 by the screening of 129 lammda phage library and BAC library

To evaluate in vivo role of A WP1 in RANK signaling pathway that leads to osteoclast formation and activation, we have generated AWP1 KO mice by homologous recombination.
${\cdot}$Isolation of genomic fragment of A WP1 by the screening of 129 lammda phage library and BAC library
${\cdot}$Mapping and sequencing of AWP1 genomic fragment
${\cdot}$Construction of Knockout targeting vector by ligating genomic fragments to neomycin-resistent gene.
${\cdot}$Electroporation of the AWP1 targeting vector in embryonic stem cells and Screening of targeted allele and establishment of mib1 knockout ES clone.
${\cdot}$Generation of AWP1 KO chimeric mice by injection of AWP1 KO ES cells into 3.5 blastocyst.
${\cdot}$Construction of AWP1 conditional targeting vector. LoxP sequences were used to conditionally delete these exons by Cre recombinase and FRT sequences were used to delete selection marker, neomycin-resistant gene by FLP recombinase. Diphteria toxin A gene has been used as a negative selectio
${\cdot}$Osteoclast activation by RANK stimulation via CLC-7 chloride channel.
${\cdot}$Enhanced NF-kB activation by TNFa stimulation in A WP1 KO thymocytes
${\cdot}$Inhibition of TNFa-induced apoptosis in A WP1 KO thymocytes

목차 Contents

• 표지 ...1
• 제출문 ...2
• 보고서 초록 ...3
• 요약문 ...4
• SUMMARY ...6
• CONTENTS ...7
• 목차 ...8
• 제 1 장 연구개발과제의 개요...9
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황...10
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과...11
• 1. TBZF의 생체내 기능분석을 위한 TBZF KO 생쥐 제작...11
• 2. AWP1의 생체내 기능분석을 위한 AWP1 KO 생쥐의 제작...12
• 3. AWP1의 생리적 기능 규명...14
• 4. RANK로부터의 세포신호전달 연구...17
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도...19
• 1. 연구개발의 최종목표...19
• 2. 연차별 연구개발 목표 및 내용...19
• 3. 계획대비 달성도...20
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획...23
• 제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보...24
• 제 7 장 참고문헌...25
• 특정연구개발사업 연구결과 활용계획서...26
• 세부과제 : Eph와 Ephrin 유전자발현조절을 이용한 뇌중추신경제 발생에 관한연구...35