초록 ▼

● 동위원소 치환 RNA 및 단백질 4개를 합성 및 정제함: FMDV를 비롯한 18개의 RMA 시료를 NMR 연구에 충분한 양으로 합성 및 정제하였고, 이중 ScV SL2 및 HCV Ⅲ'-1, Influenza virus promoter, Influenza virus 변이 promoter, FMDV 4-2 domain 등 총 5개의 RNA를 13C, 15N으로 동위원소 치환하여 RNA를 합성한 후 구조연구를 수행하였다. 암전이 관련 PRL-3와 비만 관련 단백질 hBCCP를 13C, 15N으로 동위원소 치환하여 시료를 합성 정제하였

● 동위원소 치환 RNA 및 단백질 4개를 합성 및 정제함: FMDV를 비롯한 18개의 RMA 시료를 NMR 연구에 충분한 양으로 합성 및 정제하였고, 이중 ScV SL2 및 HCV Ⅲ'-1, Influenza virus promoter, Influenza virus 변이 promoter, FMDV 4-2 domain 등 총 5개의 RNA를 13C, 15N으로 동위원소 치환하여 RNA를 합성한 후 구조연구를 수행하였다. 암전이 관련 PRL-3와 비만 관련 단백질 hBCCP를 13C, 15N으로 동위원소 치환하여 시료를 합성 정제하였다.
● RNA 및 단백질 입체구조를 규명함: ScV SL2와 Influenza virus promoter, Influenza vims 변이 promoter, Hemimethylated GATC, AA mismatch를 포함하는 DNA 2종 등 총 7종의 핵산 입체구조와 암전이 관련 단백질 PRL-3 구조, aspartidyl-tRNA synthetase의 N말단 peptide의 구조를 규명하였다.
● High-throughput 시료준비과정 평가시스템을 도입함: (1) 5'-extension과 3'-tagging sequence를 포함하는 sequence design (2)화학합성된 DNA template와 T7 RNA polymerase를 이용한 RNA 합성 yield (3)DHAzyme과 DNA affinity column을 이용한 정제 후 yield (4)NMR 실험가능 여부 등을 단계적으로 체크하여 구조연구 대상 RNA에 대한 시료준비과정 평가시스템 확립하였다
● 최신 NMR 기법 5개를 도입함: 최신 NMR 기법인 (1)TROSY, (2)RDC, (3)SAR-by-NMR, (4)Affinity NMR (5) Diffusion NMR기법을 확립하고, 기법을 적용하여 구조계산 및 Ligand screening에 이용하였다.
● Ligand screening: HCV Ⅲb와 Ⅲd 그리고 Influenza Virus Promoter를 target으로 하여 400만개 화합물 DB에 대하여 screening 시도하여 70-90개의 ligand가 선정하였다. PRL-3 단백질 결합 ligand에 대한 NMR 실험을 하여 binding을 연구하였다.

Abstract ▼

Establish high-throughtput sample preparation system
- Isotopes labeled RNA synthesize and purify : Synthesize and purify the 13C, 15N labeled RNA which are NCR of HCV, Influenza, FMDV etc.
- Isotopes labeled protein synthesize and purify : Synthesize and purify the 13C, 15N labeled protein th

Establish high-throughtput sample preparation system
- Isotopes labeled RNA synthesize and purify : Synthesize and purify the 13C, 15N labeled RNA which are NCR of HCV, Influenza, FMDV etc.
- Isotopes labeled protein synthesize and purify : Synthesize and purify the 13C, 15N labeled protein that are related to cancer and fatness.
- Evaluation of high-thoughput sample preparation system : Step by step evaluation of high-throughput sample preparation such as sequence design, synthesis yields, purification yields and NMR experiments ability.
Establich the newly developed 4 NMR teclmiques
- Establish the Residual dipolar coupling, TROSY, SAR-by-NMR, Affinity NMR techniques
Determine three-dimensional structures of RNA and protein
- Determine the 3D structure of virus NCR RNA and disease related proteins.

목차 Contents

• 표지 ...1
• 제출문 ...2
• 보고서 초록 ...3
• 요약문 ...4
• SUMMARY ...5
• CONTENTS ...6
• 목차 ...7
• 제 1 장 연구개발과제의 개요...8
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황...12
• 제1절 RNA 구조 규명 기술 ...12
• 제2절 NMR spectroscopy 기술 ...13
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과...15
• 제1절 High-throughput 시료합성 및 정제 시스템 구축 ...15
• 제2절 최신 NMR 기법 4개 이상 도입 ...31
• 제3절 RNA 및 단백질 구조규명 ...37
• 제4절 Ligand screening ...50
• 제5절 NMR Park ...58
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도...60
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획...62
• 제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보...63
• 제 7 장 참고문헌...64
• 특정연구개발사업 연구결과 활용계획서...66