초록 ▼

최근에 혈장유래 의약품의 안전성 보증을 위해 효과적인 세척공정의 확립과 검증에 대한 관심이 증대 하고 있다. 세척공정 검증은 제조공정 중 행해지는 세척공정이 일관성 있게 교차오염, carryover-centamination, 세척액, 미생물과 기타 불순물들을 제품의 안전성, 효력, 순도 등의 quality에 영향을 미치지 않을 규정된 수준 이하로 제거하는 것을 체계적으로 검토하는 문서화된 일련의 검증행위라 할 수 있다. 혈장분획제제 중 혈액응고인자제제와 일부 면역글로불린제제는 혈장에 존재하는 다양한 단백질로부터 유효한 단백성분만을

최근에 혈장유래 의약품의 안전성 보증을 위해 효과적인 세척공정의 확립과 검증에 대한 관심이 증대 하고 있다. 세척공정 검증은 제조공정 중 행해지는 세척공정이 일관성 있게 교차오염, carryover-centamination, 세척액, 미생물과 기타 불순물들을 제품의 안전성, 효력, 순도 등의 quality에 영향을 미치지 않을 규정된 수준 이하로 제거하는 것을 체계적으로 검토하는 문서화된 일련의 검증행위라 할 수 있다. 혈장분획제제 중 혈액응고인자제제와 일부 면역글로불린제제는 혈장에 존재하는 다양한 단백질로부터 유효한 단백성분만을 선택적으로 분리 정제하기 위해 친화 크로마토그래피, 이온교환 크로마토그래피, 소수성 크로마토그레피등 다양한 크로마토그래피 방법을 사용하여 생산된다. 크로마토그래피 공정은 크로마토그래피 media가 원하는 단백질을 선택적으로 흡착하거나 원하지 않는 단백질을 선택적으로 흡착하여, 유효한 단백성분을 선택적으로 분리 정제하는 공정으로 이러한 크로마토그래피 과정 중 바이러스가 원하는 단백질과 partitioning이 일어 날 수 있다. 하지만 혈장에 오염될 수 있는 바이러스들이 크로마토그래피 media에 오염되어 batch-to-batch 오염이 일어날 수 있어 효과적인 cleaning 공정이 필요하다. 혈장분획제제의 안전성 보증을 위해서는 크로마토그래피의 cleaning 공정에서 감염성 위해인자의 제거 및 불활화 공정의 검토 강화가 필요하다 본 연구에서는 혈장분획제제 제조공정에 사용되는 크로마토그래피의 cleaning 공정에서 감염성 위해인자의 제거 및 불황화 공정의 검토 강화로 혈장분획제제의 안전성을 확보하기 위해 크로마토그래피 cleaning 검증 시스템을 구축하고 적용하고자 하였다. 이를 위해 아래와 같은 연구를 진행하였다. 1) 선진국 및 국제기구의 크로마토그래피 cleaning 검증에 대한 관리 지침의 검토 2) 문헌에 나타난 선진국 사례를 중심으로 혈장분획제제 제조공정에서 크로마토그래피 cleaning 공정의 바이러스 제거 및 불활화 방법의 효율성 검토 3) 국내 혈장분획제제 재조사에서 실시하고 있는 크로마토그래피 sanitization 공정(NaOH 처리 공정)의 바이러스 불활화 효율 검증, 불활화 기작 규명 및 최적 NaOH 처리 공정 확립 4) 물리 · 화학적 처리에 큰 저항성을 갖는 Porcine parvovirus(PPV)를 모델로 Real-time PCR을 이용 한 크로마토그래피 cleaning 검증 시스템 구축 5) 크로마토그래피 cleaning 검증을 위한 바이리스 spiking 실헐법 확립 6) 구축된 크로마토그래피 cleaning 검증 시스템의 적용 : SP-Sepharse 양이온 크로마토그래픽 공정, Q-Sepharose 음이온 크로마토그래피 공정, Heparin affinity 크로마토그래피 공정에 적용 7) 구축된 크로마토그래피 cleaning 검증 시스템의 적합성 평가 8) 제조사 및 식약청에 관련 기술 이전을 위한 SOP 작성 위와 같은 연구를 통해 혈장분획제제 제조공정의 크로마토그래피 cleaning 검증 시스템을 구축하였다.

Abstract ▼

Manufacturing processes for blood products have the risk of viral contaminations. Viral safety of the products is ensured through complementary manufacturing and quality control measures that include control of raw materials, validation and implementation of effective virus clearance technology, and

Manufacturing processes for blood products have the risk of viral contaminations. Viral safety of the products is ensured through complementary manufacturing and quality control measures that include control of raw materials, validation and implementation of effective virus clearance technology, and monitoring of final-filled product for the presence of virus. Recently, increasing attention has been focused on establishing efficient cleaning procedures to prevent carry-over contamination from batch to batch. Treatment with NaOH is widely accepted for cleaning chromatography media and systems. However, the validation method for evaluation of viral clearance during the NaOH treatment has not been properly established. Therefore, we have developed a real-time PCR and cleaning validation system using porcine parvovirus(PPV) as a model, since PPV has a high resistance to a range of physico-chemical treatment. In order to develop a cleaning validation system for chromatography during manufacture of plasma derivatives, following researches were conducted. 1) Review of regulatory guidelines for the cleaning validation of chromatography system 2) Literature review for the evaluation of the viral inactivation efficiency of chromatography cleaning methods conducted during manufacture of plasma derivatives 3) Evaluation of efficiency of the use of sodium hydroxide for cleaning and sanitizing chromatography media and systems, elucidation of the inactivation mechanism of viruses by NaOH treatment, and optimization of the cleaning method 4) Development of a quantitative real-time PCR assay for the validation of PPV inactivation during cleaning and sanitizing chromatography media and systems 5) Method validation of the quantitative real-time PCR assay for the cleaning validation sensitivity, specificity, reproducibility, and limit of quantitation were validated. 6) Establishment of virus spiking test for the cleaning validation of chromatography media and systems 7) Application of the cleaning validation system to chromatography process such as SP-Sepharose cation chromatography for thrombin production, Q-Sepharose anion chromatography for factoe VIII production, and heparin affinity chromatography for anti-thrombin III 8) Evaluation of the cleaning validation system 9) Documentation of the standardization and Standard Operating Procedures (SOP) Through this study, a cleaning validation system for chromatography process was developed using a quantitative real-time PCR for PPV as a model of severe test. The validation system was successfully applied to chromatography processes for manufacture of thrombin, factor VIII, and anti-thrombin III.

목차 Contents

• 용역연구개발사업 연구결과보고서...1
• 표지...2
• 제출문...4
• 요약문...5
• Summary...6
• 목차...7
• 제1장 서론...9
• 1.1. 연구의 목적...9
• 1.2. 연구의 필요성...12
• 제2장 국내.외 기술개발 현황...15
• 2.1. 생물학적 의약품의 바이러스 안정성...15
• 2.2. 혈장 유래 의약품의 바이러스 안정성...16
• 2.3. 바이러스 안정성 확보를 위한 기본적 접근 방법...16
• 2.4. 바이러스의 제거 또는 불활화 방법...17
• 2.5. 바이러스 안전성 검증의 필요성...17
• 2.6. Cleaning 검증...18
• 2.7 본 연구의 배경...19
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과...20
• 3.1. 연구내용...20
• 3.2. 연구방법...21
• 3.2.1. 자료수집...21
• 3.2.2. 미국, 유럽 등 선진국 및 국제기구의 크로마토그래피 cleaning 검증에 대한 관리 지침의 검토...22
• 3.2.3. 문헌에 나타난 선진국 사례를 중심으로 혈장분획제제 제조공정에서 크로마토그래피 cleaning 공정의 바이러스 제거 및 불활화 방법의 효율성 검토...22
• 3.2.4. Real-time PCR을 이용한 크로마토그래피 cleaning 검증시스템 구축...22
• 3.2.5. 국내 혈장분획제제 제조사에서 실시하고 있는 크로마토그래피 sanitization 공정의 바이러스 불활화 효율 검증 및 불활화 기작 규명...25
• 3.2.6. 크로마토그래피 cleaning 검증을 위한 바이러스 spiking 실험법 확립...28
• 3.2.7. 구축된 크로마토그래피 cleaning 검증 시스템의 적용...28
• 3.2.8. 구축된 크로마토그래피 cleaning 검증 시스템의 적합성 평가...29
• 3.2.9. SOP를 작성하고 제조사 및 식약청에 관련 기술 이전...29
• 3.3. 연구결과...29
• 3.3.1. 미국, 유럽 등 선진국 및 국제기구의 크로마토그래피 cleaning 검증에 대한 관리지침의 검토...29
• 3.3.2. 문헌에 나타난 선진국 사례를 중심으로 혈장분획제제 제조공정에서 크로마토그래피 cleaning 공정의 바이러스 제거 및 불활화 방법의 효율성 검토...31
• 3.3.3. Real-time PCR을 이용한 PPV DNA 정량법 확립...31
• 3.3.4. Real-time PCR을 이용한 PPV DNA 정량법의 method validation...35
• 3.3.5. 국내 혈장분획제제 제조사에서 실시하고 있는 크로마토그래피 cleaning 공정의 바이러스 불활화 효율 검증...37
• 3.3.6. NaOH 처리에 의한 PPV 불활화 기작...42
• 3.3.7. 크로마토그래피 cleaning 검증을 위한 바이러스 spiking 실험법 확립...42
• 3.3.8. 구축된 크로마토그래피 cleaning 검증 시스템의 적용...45
• 3.3.9. 구축된 크로마토그래피 cleaning 검증 시스템의 적합성 평가...48
• 3.3.10. SOP를 작성하고 제조사 및 식약청에 관련 기술 이전...49
• 제4장 연구개발 달성도 및 대외기여도...50
• 4.1. 연구개발목표 달성도...50
• 4.2. 대외 기여도...51
• 제5장 연구개발결과의 활용성과 및 계획...52
• 가. 계량적 성과...52
• 나. 성과내용기술...52
• 다. 활용계획...52
• 제6장 기타 중요변경사항...53
• 제7장 참고문헌...54
• 별첨 1. Porcine parvovirus(PPV) 유전자 검출(예시)...57
• 별첨 2. Porcine parvovirus(PPV) 정량분석을 위한 real-time PCR...61