초록 ▼

제대혈로부터 중간엽 줄기세포를 분리한 후, 2-3주일 뒤 부착성 세포들을 관찰함. 분리한 세포가 중간엽 줄기세포임을 입증하기 위해 면역 표식자 분석을 실시, CD13, CD29, CD44, CD90, CD105의 발현으로 중간엽 줄기세포임을 입증하였으며, 골수에서 분리한 중간엽 줄기세포도 같은 결과를 보임. 제대혈과 골수유래 중간엽 줄기세포의성장 특성을 분석한 결과, 성장속도는 골수가 제대혈액에 비해 빠르게 나타났으나, 계대수가 증가할수록 세포증식 속도가 느려짐은 골수와 제대혈액에서 같은 양상을 나타냄, 또한 CFU-F assay

제대혈로부터 중간엽 줄기세포를 분리한 후, 2-3주일 뒤 부착성 세포들을 관찰함. 분리한 세포가 중간엽 줄기세포임을 입증하기 위해 면역 표식자 분석을 실시, CD13, CD29, CD44, CD90, CD105의 발현으로 중간엽 줄기세포임을 입증하였으며, 골수에서 분리한 중간엽 줄기세포도 같은 결과를 보임. 제대혈과 골수유래 중간엽 줄기세포의성장 특성을 분석한 결과, 성장속도는 골수가 제대혈액에 비해 빠르게 나타났으나, 계대수가 증가할수록 세포증식 속도가 느려짐은 골수와 제대혈액에서 같은 양상을 나타냄, 또한 CFU-F assay 결과, 골수는 다수의 군집을 이루는 반면, 제대혈액 경우 군락 형성을 못함으로 인해 제대혈로부터 중간엽 줄기세포의 분리가 용이하지 않다는 것을 확인함. 증식요소로 bFGF를 사용한 결과, 10ng/ml 농도가 함유된 배지에서 중간엽 줄기세포의 최고 증식 증가를 확인함. 중간엽 줄기세포를 지방세포, 골모세포, 연골세포, 골격근모세포, 신경세포, 내피세포로 분화 유도하고, 특정유전자 발현정도를 확인하여 분화 시 유전자발현의 영향을 입증함. 또한 비타민 $K_2$가 지방세포, 골모세포 분화 시 미치는 영향을 염색법 및 유전자 발현방법을 통해 검사한 결과, 비타민 $K_2$가 골모세포 형성 시 증가활성 효과를 주고, 지방세포 형성 시 lipid vacuoles 생성 억제 효과 있음을 확인함, 중간엽 줄기세포를 척수조직이 손상된 쥐에 이식하여 효과를 보고자 한 전임상 적용 결과, 손상된 부위로의 세포 이동을 확인하였으며, 손상부위의 치료효과를 관찰함.

Abstract ▼

Mesenchymal stem cells (MSCs) have the potential to self-replicated, proliferate and differentiate ito chondrocytes, adipocytes, osteocytes and myocytes. In the study, we isolated MSCs from Bone Marrow (BM) and Umbilical Cord Blood (UCB), and to cofirm that cells were analyzed FACS and CFU-F assay.

Mesenchymal stem cells (MSCs) have the potential to self-replicated, proliferate and differentiate ito chondrocytes, adipocytes, osteocytes and myocytes. In the study, we isolated MSCs from Bone Marrow (BM) and Umbilical Cord Blood (UCB), and to cofirm that cells were analyzed FACS and CFU-F assay. Cells were seeded serially for passage culture and harvested for calculation of cell number. MSCs growth curves depended on the passage from which the cells were derived. MSCs culture from BM grew at faster rates and generated significantly more cells by the end of the same days growth period as compared to cultures from UCB. Also MSCs were differentiated into adipogenic, osteogenic, myogenic, neuronal lineages, During adipogenesis and osteogenesis RT-PCR analysis revealed that genes were differentiatlly. Moreover, recent studies indicate that vitamin $K_2$ also plays a role in bone metabolism. But the mechanism is still unclear. We evaluated effect of vitamin $K_2$ on osteogenesis and adipogenesis of MSCs from UCB. vitamin $K_2$ induces osteogenesis and inhibits adipogenesis in expression of Alizari Red/Oil Red O staining, RT-PCR, microarray analysis. vitamin $K_2$ impacts on the transcription of ALP, CBFA1/Runx2, Collagen, osteocalcin in osteogenesis and FABP4, LIFR, LPL, $PPAR\gamma$, OSF-2os in adipogenesis. We confirmed that MSCs are present in human umbilical cord blood and can be successfully isolated, cultured and expanded. Although it is difficult to isolate MSC from UCB and MSC from UCB proliferate slowly in vitro in compassion to BM, UCB could be regarded as a source of MSC for experimental and clinical needs. Forker study to establish rapid and easy methods for isolation of MSCs from UCB will be needed.

목차 Contents

• 표지 ...1
• 제출문 ...2
• 보고서 요약서 ...3
• 요약문 ...4
• SUMMARY ...6
• 목차 ...54
• 제 1 장 연구개발과제의 개요...55
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황...58
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과...59
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도...95
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획...97
• 제 6 장 참고문헌...98
• 제 7 장 첨부서류...100