초록 ▼

$\circ$ 연구목표
마우스 모델에서 바이러스 벡터를 매개로 형질 도입된 수지상세포 백신 및 B세포 백신의 효과를 검증하는 기준을 확립하고 작용 기전을 규명하는 실험을 수행한다. 수지상 세포 및 B세포 백신을 면역화하여 암항원인 HPV16 E6-E7에 대하여 면역 반응 생성 여부를 마우스 in vivo 실험과 인간 PBMC 시스템에서 확인하고 이를 통해 궁극적으로 세포 치료제의 유효성 평가 기술로 활용하고자 한다.
1차년도 (2006년 당해연도) 연구목표
- 마우스 모델에서 바이러스 벡터를 매개

$\circ$ 연구목표
마우스 모델에서 바이러스 벡터를 매개로 형질 도입된 수지상세포 백신 및 B세포 백신의 효과를 검증하는 기준을 확립하고 작용 기전을 규명하는 실험을 수행한다. 수지상 세포 및 B세포 백신을 면역화하여 암항원인 HPV16 E6-E7에 대하여 면역 반응 생성 여부를 마우스 in vivo 실험과 인간 PBMC 시스템에서 확인하고 이를 통해 궁극적으로 세포 치료제의 유효성 평가 기술로 활용하고자 한다.
1차년도 (2006년 당해연도) 연구목표
- 마우스 모델에서 바이러스 벡터를 매개로 형질 도입된 수지상 세포 백신 및 B세포 백신의 제작과 효과 검증 기준을 확립하고 작용 기전을 규명함.
2차년도 연구목표
- 인간 PBMC 시스템에서 HPV16 E6-E7을 발현하는 바이러스로 형질도입된 항원제시 세포 백신의 효과를 검증함.
$\circ$ 연구내용
마우스에서 항원 제시 세포 분리 방법 수립 및 수율을 측정한 결과, 수득된 여러 기원의 세포에서 바이러스 형질 도입에 차이가 없었으므로 B 세포의 경우 비장에서 얻은 세포를, 수지상세포의 경우 골수에서 얻은 monocyte를 분화시킨 것을 사용함. NKT hybridoma와 coculture실험을 통하여 NKT cell을 활성화시키는 조건을 설정함. aGalCer가 적재된 B세포를 투여함으로써 24시간 이내에 in vivo에서 NKT 세포와 NK 세포의 활성화를 확인할 수 있었고 aGalCer가 적재된 B세포 역시 효과적으로 활성화되는 것을 관찰함. OVA를 발현하는 바이러스로 형질도입된 항원 제시세포 백신의 유효성 평가 및 항암 효과 검증을 위한 마우스 모델을 정립하였고, AdOVA로 형질 도입되고 aGalCer를 적재한 세포 백신을 통하여 T 세포 반응이 활성화되는 것을 OVA 특이적인 T cell adoptive transfer 실험을 통하여 관찰하였음. HPV E6/E7을 발현하는 바이러스로 형질도입된 항원 제시세포 백신의 유효성을 평가한 결과, 면역화된 마우스에서 항원 특이적인 CTL이 유도되며 E7 CTL epitope에 특이적으로 IFN-g를 분비하는 CD8 T cell이 증가함을 확인함. 또한 HPV 16 E7 단백질을 사용한 ELISA를 통하여 항원 특이적인 항체반응이 유도되었음을 확인하였음. 이러한 활성화된 면역 반응에 의한 항암 효과를 측정하고자 E6/E7을 발현하는 TC-1 암세포를 사용하여 백실의 효능을 평가함 세포백신으로 면역화한 마우스에 TC-1 세포를 s.c로 투여한 예방 모델에서 세포 백신에 의해 암 성장이 예방되며, 암세포를 s.c로 투여한 후 1일 후에 면역화한 치료 모델에서도 세포 백신의 항암 효과가 있는 것을 확인하였음. 현재 메모리 반응 유도 가능성, 면역화 스케줄 및 암세포 적용량, 암 모델 (전이암 또는 고형암)에 따른 백신 효과를 비교하는 실험을 진행 중임. 백신의 투여량 및 투여 회수를 조정하여 항암 효과를 비교하는 실험을 계획 중이며 이와 함께 세포 백신으로 활성화되는 면역 세포의 항암 활성에 기여하는 정도를 확인하기 위하여 특정 면역 세포가 제거된 마우스에서의 항암 활성을 측정할 예정임.
$\circ$ 연구성과(응용분야 및 활용범위포함)
마우스 모델에서 항원 제시 세포 백신의 유효성을 평가하기 위하여 각 조직으로부터 항원 제시 세포 분리 방법을 수립하였고, 수율을 확인함. NKT hybridoma인 DN32.D3을 이용하여 NKT 세포의 활성화를 정량적으로 측정하는 방법을 확립함. 또한 항원 제시 세포의 활성화와 in vivo에서 NKT, NK 세포의 활성화를 측정하는 기준을 제시하였음. OVA 모델에서 항원 제시세포 백신의 유효성 평가 및 항암 효과 검증을 위하여 OVA를 발현하고 있는 마우스 암 세포주 모델을 정립하고, adoptive transfer 실험을 통하여 항원 특이적인 T 세포 활성화를 확인할 수 있었음. 표적 질환인 자궁 경부암의 원인인 HPV 항원을 발현 하는 바이러스로 형질도입된 항원제시세포 백신의 효?한 결과, 아데노바이러스로 형질 도입되고 aGalCer가 적재된 항원 제시 세포에 의하여 효과적으로 면역 반응이 유도됨을 확인함. E6/E7을 발현하는 아데노바이러스 백신의 항암효과를 E6/E7을 발현하는 TC-1 암세포를 사용한 예방 및 치료 모델에서 확인할 수 있었음. 이를 바탕으로 세포 백신의 효능을 검정하기 위한 요소로서 항원 특이적인 면역세포의 활성화 측정과 함께, 궁극적인 항암 활성을 여러 방면에서 확인하는 방법론을 제시함.

목차 Contents

• 당해연도 연구개발사업 실적...5
• 1. 연구개발과제의 최종 연구개발목표와 당해년도 연구개발목표...5
• 2. 연구개발과제의 당해년도 연구개발내용...6
• 3. 연구개발과제의 당해년도 연구성과...15
• 4. 연구수행에 따른 문제점 및 대책...16
• 5. 실적요약문...17
• 차년도 연구개발사업 계획...19
• 1. 요약문...20
• 2. 연구개발비 총괄표...21
• 3. 연구책임자 인적사항 및 연구개발실적 (변경된 경우만 작성)...26
• 4. 참여 연구원 편성표...29
• 5. 총괄연구과제의 차년도 연구개발목표...33
• 6. 총괄연구과제의 차년도 연구개발계획...33
• 7. 연차별 연구수행일정...38
• 8. 첨부서류...39