초록 ▼

본 연구는 anti-A, anti-B 단클론항체 진단시약의 품질 평가를 위한 혈액형 항원 혈액표준품 제조에 대한 필요성과 국내의 혈액형 판정용 시약에 대한 규격과 시험평가 방법이 인종에 따른 혈액형 빈도의 차이가 반영되지 않은 부분이 있어 이에 대한 근거를 제시하기 위해 진행되었다. 따라서 본 과제에서는 전국적인 규모로 ABO, RhD혈액형 및 그 아형의 빈도를 조사하였고 국제 심포지움 개최를 통하여 효과적인 혈액형 판정용 시약의 품질관리 규격 및 시험평가 방법을 조사하였다. 또한, 국내 시판 중인 혈액형 판정용 시약의 비교평가를

본 연구는 anti-A, anti-B 단클론항체 진단시약의 품질 평가를 위한 혈액형 항원 혈액표준품 제조에 대한 필요성과 국내의 혈액형 판정용 시약에 대한 규격과 시험평가 방법이 인종에 따른 혈액형 빈도의 차이가 반영되지 않은 부분이 있어 이에 대한 근거를 제시하기 위해 진행되었다. 따라서 본 과제에서는 전국적인 규모로 ABO, RhD혈액형 및 그 아형의 빈도를 조사하였고 국제 심포지움 개최를 통하여 효과적인 혈액형 판정용 시약의 품질관리 규격 및 시험평가 방법을 조사하였다. 또한, 국내 시판 중인 혈액형 판정용 시약의 비교평가를 통하여 각 시약 제품들의 적합성을 평가하였으며, 연구용 혈액을 확보하기 어려운 국내 현실을 감안하여 혈액형 판정용 시약의 품질 관리를 위한 국가표준품 개발을 위하여 품질관리용 적혈구표준품 제조기술을 개발 및 확립하고자 하였다.
국내 헌혈자의 혈액형 분포는 A형 34%, B형 27%, O형 27%, AB형 12%, RhD 양성 99.6%, RhD 음성 0.39%, RhD 약양성 0.01%이었고, ABO 아형은 평균 0.058%의 빈도를 보였다. ABO 아형은 A2B형이 27.4%, A2B3가 25.5%로 가장 많았고, 생물학적제제 기준 및 시험방법 기준 고시에 포함되어 있는 A2혈액형은 전체 아형의 2.54% (전체의 0.0015%)에서 발견되었다. 선진국의 혈액형 판정용 시약의 관리시스템을 분석하였으며, 이러한 외국의 사례를 혈액형 판정용 시약을 자체 제조하지 않고 수입하여 사용하는 국내에 적용하기는 어려운 것으로 판단하였고, 이에 국내 적합한 혈액형 판정용 시약의 품질관리 규격 및 시험평가방법을 제시하였다. 국내 시판 4개 제품을 사용하여 특이성시험, 응집력시험 및 응집소역가시험을 실시하여 제품별로 약간의 차이가 존재하였지만, 현재의 기준에 적합함을 확인하였다.
고농도 글리세롤을 이용한 적혈구 냉동법을 기초로 품질관리용 적혈구표준품 제조기술을 확립하였으며, 가장 적절한 글리세롤의 농도를 검색하기 위하여 글리세롤 농도에 따른 적혈구 냉동 전 후의 적혈구 회수율과 적혈구 항원성의 변화를 측정하여 이를 검증하였다. 해동적혈구는 Alsever`s 용액에 보관하여 안정성을 유지하였으며, 보관에 따르는 적혈구 항원강도의 감소도 관찰되지 않았다. 또한, 품질관리용 적혈구표준품에 대해 ABO 혈액형 유전자 분석을 실시하였고, 국내에서 상대적으로 발견 빈도가 높은 것으로 추정되는 2례에 대해서 품질관리용 적혈구 표준품의 패널로 포함시켰다. 본 연구결과 A, B형 각 5종, O형 10종, AB형 4종과 RhD 양성 4종, RhD 음성 5종, RhD 약양성 1종으로 구성된 적혈구표준품 패널과 A와 B 혈액형 아형의 적혈구 10예로 구성된 ABO 아형 패널을 확립하였다. 본 연구 결과로 혈액형 판정용 시약의 품질관리용 표준혈액을 통해 국내 환경에 적합한 시험평가가 이루어질 수 있게 되었고 항혈청에 대한 새로운 생물학적 제제 기준의 개정을 위한 자료를 제공하였으며 안정적인 품질관리용 표준혈액 공급으로 연구용 혈액검체를 얻기 어렵다는 진단 시약 업체들의 민원 해소에 크게 기여할 것으로 생각된다.

Abstract ▼

The purpose of this project is to unveil the necessity for production of standard RBC reagents for quality control of blood grouping monoclonal anti-A and anti-B reagent and the fact that the performance evaluation criteria of blood grouping reagents was designed ignoring the difference in the frequ

The purpose of this project is to unveil the necessity for production of standard RBC reagents for quality control of blood grouping monoclonal anti-A and anti-B reagent and the fact that the performance evaluation criteria of blood grouping reagents was designed ignoring the difference in the frequency of blood groups between the race. Therefore, in this study, the frequency of the ABO, RhD and other subgroups was investigated nationwide and more efficient performance evaluation criteria of blood grouping reagents were surveyed by holding an international symposium. In addition, the compatibility of the reagents was examined by comparing blood grouping reagents marketed in Korea, and since the blood product for research usage is limited in Korea, the study focused on the development and establishment of standard RBC reagent for setting a national standard for quality control of the blood grouping reagents.
According to the blood group distribution study, the estimated percentage of blood groups A, B, O, AB, RhD negative and RhD weak positive was 34%, 27%, 27%, 12%, 0.39% and 0.01%, respectively, among blood donors in Korea. The ABO subgroup showed a frequency of 0.058%, and frequency of A2B and A2B3, which were the most frequent subgroups, were 27.4% and 25.5%, respectively. In contrast, A2 blood type which is included in the method of examination & criteria of biological reagents were found in only 2.54% among ABO subgroups, which is only about 0.0015% of all blood types. Quality management systems of blood grouping agents in other countries were investigated and as a result those were not suitable to be applied in our system. Thus, new performance evaluation criteria for blood grouping reagents appropriate for our system was recommended. The specificity, avidity, and potency test were carried out with reagents produced by four different manufacturers in Korea, and the results confirmed that the reagents were compatible to be used although some differences between four products was observed.
The method of preparing standard RBC reagent was established based on the freezing technology with the high glycerol method. In order to elucidate the most appropriate glycerol concentration, recovery rate and antigenic modification of the RBCs before and after freezing were evaluated according to different glycerol concentration. Thawed RBCs were preserved in Alsever`s solution, and decrement of the antigenic strength was not observed. Also. genetic analysis of ABO blood type was carried out for the reference standard RBC reagents, and two types found relatively frequently were added to the standard RBC reagent panel. Thus, we established standard RBC reagent panel comprising five A, B groups, ten O group, four AB group, four RhD positive and five RhD negative, one RhD weak positive and ABO subgroup panel including ten cases of RBCs in ABO subgroup.
As a result, appropriate performance evaluation is now available for our system through the establishment of standard RBC reagents and provided a valuable information to improve the method of examination & criteria of biological reagents for anti-sera that is more suitable to be applied in our system, and this will also satisfy the demand from the diagnostic reagent manufacturers for the need of blood products for research purposes as well.

목차 Contents

• 용역연구사업 연구결과보고서...1
• 제 출 문...4
• 목 차...5
• I. 연구개발결과 요약문...6
• 연구결과보고서 요약문...6
• Summary...8
• II. 총괄연구개발과제 연구결과...11
• 제 1 장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...11
• 제 2 장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법...20
• 제 3 장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발...33
• 제 4 장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...70
• 제 5 장 총괄연구개발과제의 연구성과...79
• 제 6 장 기타 중요변경사항...81
• 제 7 장 참고문헌...81
• 제 8 장 첨부서류...84
• 8.1 연세대학교 의과대학 세브란스병원 임상연구 승인서...84
• 8.2 유럽의 혈액형 시약관리...88
• 8.3 일본의 혈액형 판정용 항체기준...100
• 8.4 시험성적서 (일본)...113
• III. 제1 세부연구개발과제 연구결과...120
• 제 1 장 제1 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...121
• 제 2 장 제1 세부연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법...128
• 제 3 장 제1 세부연구개발과제의 최종 연구개발 결과...140
• 제 4 장 제1 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...162
• 제 5 장 제1 세부연구개발과제의 연구성과...167
• 제 6 장 기타 중요변경사항...169
• 제 7 장 참고문헌...169
• IV. 제2 세부연구개발과제 연구결과...172
• 제 1 장 제2 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...173
• 제 2 장 제2 세부연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법...179
• 제 3 장 제2 세부연구개발과제의 최종 연구개발 결과...184
• 제 4 장 제2 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...205
• 제 5 장 제2 세부연구개발과제의 연구성과...210
• 제 6 장 기타 중요변경사항...212
• 제 7 장 참고문헌...212