초록 ▼

${\bullet}$ 최적의 High throughput screening (HTS) system 운영 프로토콜 확립
${\bullet}$ 토양으로부터 메타게놈 DNA (20 kb 이상) 추출
${\bullet}$ 메타게놈 유전자를 이용하여 4.3 Gb의 메타게놈 라이브러리 확보
${\bullet}$ 구축된 4.3Gb의 메타게놈 라이브러리에서 lipolytic 효소 활성 탐색
${\bullet}$ Lipolytic

${\bullet}$ 최적의 High throughput screening (HTS) system 운영 프로토콜 확립
${\bullet}$ 토양으로부터 메타게놈 DNA (20 kb 이상) 추출
${\bullet}$ 메타게놈 유전자를 이용하여 4.3 Gb의 메타게놈 라이브러리 확보
${\bullet}$ 구축된 4.3Gb의 메타게놈 라이브러리에서 lipolytic 효소 활성 탐색
${\bullet}$ Lipolytic 활성 클론 180종 확보
${\bullet}$ Lipolytic 활성 클론 180종 중 2종에서 유전자형 DNA 절편의 염기서열 분석

Abstract ▼

Lipolytic Enzymes, esterase and lipase, are widely used in various biotechnological applications such as paperprocessing, food manufacturing, and biofuel production. Metagenomics, an approach to access global microbialgenetic diversity, has been recently used to discover novel important enzymes incl

Lipolytic Enzymes, esterase and lipase, are widely used in various biotechnological applications such as paperprocessing, food manufacturing, and biofuel production. Metagenomics, an approach to access global microbialgenetic diversity, has been recently used to discover novel important enzymes including lipolytic enzymes. In this study, we carried out the construction of metagenomic libraries (4.3 Gb) and screening of lipolytic enzymes from various environmental soils using a copy control fosmid vector (pCCFOS1) with insets of 30-50 kb DNA in E.coli EPI300 as host. In the about 100,000 clones, we obtained 180 positive clones showing lipolytic enzyme activity on the LB-agar plates containing 1% tributyrin as a substrate. Fosmid DNA from positive clones were extracted and classified by restriction fragment length polymorphism. Eleven fosmid clones having different DNA fragments were identified. Among 11 fosmid clones, 2 fosmid clones were shotgun cloned and the lipolytic enzyme genes were obtained.

목차 Contents

• 표지...1
• 제출문...2
• 보고서 초록...3
• 요약문...4
• SUMMARY...8
• CONTENTS...9
• 제 1 장 연구개발과제의 개요...11
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황...14
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과...23
• 1. 연구 최종 목표...23
• 2. 실험 내용 및 결과...23
• 가. 고효율 유전자 라이브러리 제조를 위한 분자다양성 확보기술 개발...23
• 나. Metagenomic library 확보...24
• 다. HTS system의 구축...30
• 라. 초고속 효소 탐색을 위한 HTS 운영 프로토콜 개발...31
• 마. Metagenome으로부터 유용 효소자원의 발굴...34
• (1). Metagenome으로부터 lipolytic enzyme 활성 clone 탐색...34
• (2). Lipolytic enzyme 활성 측정 배지...34
• (3). 구축된 library로부터 lipolytic enzyme 활성 유전자 확보...34
• (4). Lipolytic enzyme gene 확보를 위한 Shotgun cloning...40
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도...43
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획...44
• 제 6 장 참고문헌...45