초록 ▼

본 연구는 B형 간염 백신의 제조를 위한 펩타이드성 면역항원의 성능개선 및 생산공정의 최적화를 목표를 하였다.
- 펩타이드 항원들이 인체 면역 반응에 합당한 지를 간염환자의 혈액을 이용하여 확인하였고, HBV preS(120-145)는 B-세포 항원부위로, preS(23-33)？ preS(62-72)는 T세포 항원부위로 우세한 효과를 나타내었다.
-B세포 항원부위인 preS(120-145)의 특성연구를 통하여 항체 유도 기능은 유지하면서 인테 알부민과의 결합 특성이 제거된 preS(120-145/Y140S)을 기능 향상된

본 연구는 B형 간염 백신의 제조를 위한 펩타이드성 면역항원의 성능개선 및 생산공정의 최적화를 목표를 하였다.
- 펩타이드 항원들이 인체 면역 반응에 합당한 지를 간염환자의 혈액을 이용하여 확인하였고, HBV preS(120-145)는 B-세포 항원부위로, preS(23-33)？ preS(62-72)는 T세포 항원부위로 우세한 효과를 나타내었다.
-B세포 항원부위인 preS(120-145)의 특성연구를 통하여 항체 유도 기능은 유지하면서 인테 알부민과의 결합 특성이 제거된 preS(120-145/Y140S)을 기능 향상된 신규 항원 서열로 도출하였다.
- in vitro HLA-DR reconstitution assay system, HLA-DR transferctant cell-based assay system을 체계화하고 인간에 대한 백신의 개체수준에서의 효능검사를 위해 인간의 MHC calss II 분자인 HLA-DR을 발현하는 형질전환 마우스를 제조함으로서 펩타이드 백신의 효능 검증 시스템을 구축하였다.
- 펩타이드 면역항원의 대랸 생산 공ㅈ벙 확립을 위하여 합성 과정에서 합성 효율에 영향을 미칠 수 있는 요인들을 분석하여 각 반응 단계에서의 최적 반응 조건들을 결정하였고 대용량 합성기를 개발하여 효율적이 펩타이드 백신의 생산을 위한 합성 체계를 정립하였다.

Abstract ▼

The hepatitis B virus (HBV) is the etiological agent for heptatitis B, which is the most common cause for chronic liver diseases worldwide with an estimated number of 350 million chronic carriers nowadays. The introduction of extensive vaccination programs and the availibility of recombinant hepatit

The hepatitis B virus (HBV) is the etiological agent for heptatitis B, which is the most common cause for chronic liver diseases worldwide with an estimated number of 350 million chronic carriers nowadays. The introduction of extensive vaccination programs and the availibility of recombinant hepatitis B vaccines have helpd immensely to reduce the number of new infections. Nevertheless, limitation in both the currently used plasma-derived and recombinant HBV vaccines have problems in safty, contaminants derived from recombinant protein expression host an in dealing with non-responder vaccinees or immunocompromised individuals. In an effor to increase the efficacy and the potency of existing HBV vaccines, some modifications in the immunizing antigens have been suggested. Among them, peptide vaccine containing the preSI, preS(1-119), and/or preS2 region, preS(120-174), of the heptitis B virus surface antigen (HBsAg) is very attractibe. The ratinale of this assumption is derived from observations where there was shown that the preS2 region includes strong T-cell and B-cell epitopes that can confer protection to experimental HBV infactions, which is not contained in the currently used 226 amino acid S-protein.
In this study we analyzed human B-and T-cell epitopes within the HBV preS reion using various in vitro methods including indirest ELISA, competitive ELISA, computermodeling, in vitro HLA-DR binding assay, cell-based HLA-DR binding assay and so on. From these studies we seleted preS2(120-145) sequence as a dominant B-cell epitope and preS1(23-33), preS1(62-72) as T-cell epitopes. And we designed preS2(120-145/Y140S) as a novel B-cell epitope which has no affinity to serum albumin but which were expected still to be able to raise strong immune repsponsed. To immunize these small size peptide antigens more efficiently they are palmitoylate and imcorporated into large unilamellar vesicle liposome which is confirmed as a safe and efficient adjuvant.

목차 Contents

• 제1장. 연구개발 과제의 개요 ... 22
• 제1절. 연구 개발의 목적 ... 22
• 제2절. 연구 개발의 필요선 ... 22
• 제2장. 국내외 기술개발 현황 ... 25
• 제1절. 1단계 및 2단계 사업의 연구결과 ... 25
• 제2절. 3단계 연구개발의 중심내용 ... 26
• 제3장. 연구 개발 수행 내용 및 결과 ... 29
• 제1절. 펩타이드성 B형 간염백신 면역항원의 최종적 아미노산 서열 선정 및 면역원성 최대화를 위한 펩타이드 구조변화 ... 29
• 제2절. In vitro refolding 및 재조합 HLA-DR 분자를 이용한 후보 펩타이드 물질의 면력항원 역가의 측정 ... 44
• 제3절. HLS-DR 발현 세포주를 이용한 후보 백신 펩타이드의 MHC class II 결합 특정 ... 50
• 제4절. 백신의 효능 검증을 위한 HLA_DR4 발현 형질 전환 쥐의 개발 ... 56
• 제5절. 인지질 리포즘에 리포 펩타이드를 재조합시키는 반응조건 및 면역반응을 향상시키기 위한 주사 방법의 적정화 ... 66
• 제6절. 면역항원의 대량생산 제조공정의 최적화 ... 76
• 제4장. 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 164
• 제5장. 연구개발결과의 활용계획 ... 166
• 제6장. 연구개발화정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 167
• 제7장. 참고문헌 ... 167