초록 ▼

음경해면체 평활근 세포에 존재하는 이온통로의 역할을 규명하고 정상적인 긴장도를 유지하기 위한 이온통로들의 상호작용을 연구하여 음경 발기현상의 기전의
일단을 밝히고자 한다. 이온통로를 유전적으로 조절하는 연구를 통하여 평활근의 긴장도를 낮추는 방법을 찾아 발기부전 환자의 치료에 있어 이온통로를 대상으로
하는 유전자치료법 개발을 위한 기초 자료를 확보한다.
일차연도에는 인체 음경해면체 평활근세포에서 평활근의 긴장도 조절에 관여하는 이온통로 중 agonist들을 투여하였을 때 활성화되는 이온통로(receptor-opera

음경해면체 평활근 세포에 존재하는 이온통로의 역할을 규명하고 정상적인 긴장도를 유지하기 위한 이온통로들의 상호작용을 연구하여 음경 발기현상의 기전의
일단을 밝히고자 한다. 이온통로를 유전적으로 조절하는 연구를 통하여 평활근의 긴장도를 낮추는 방법을 찾아 발기부전 환자의 치료에 있어 이온통로를 대상으로
하는 유전자치료법 개발을 위한 기초 자료를 확보한다.
일차연도에는 인체 음경해면체 평활근세포에서 평활근의 긴장도 조절에 관여하는 이온통로 중 agonist들을 투여하였을 때 활성화되는 이온통로(receptor-operated calcium channel, ROCC)의 특성을 규명하고자 하였다. Phenylephrine, endothelin-1
및 lysophosphatidylcholine(LPC)은 G-protien coupled receptor를 통해 nonselecltive
cation channel(NSCC)을 활성화시켰다. 활성화된 NSCC의 전류-전압 관계는 발현된 TRP channel의 전류-전압곡선과 유사한 모양을 보여주었다. 이러한 칼슘통로는 혈관 평활근에서 세포로 칼슘을 공급하는 역할을 수행하였다. Mn quenching 실험을 통해
LPC 및 endothelin-1에 의해 &Ca_2+& influx가 증가함을 관찰하였다. 이와 같은 agonist에 의한 칼슘공급 및 수축작용에 관여하는 TRP 통로 (TRPC6 통로 및 TRPC4 통로)를 분자생물학적 및 전기생리학적으로 확인하였으며 각 통로의 dominant negative form들도 찾았다.
이차연도에서는 TRP 통로 dominant negative form의 cDNA를 ex vivo transfection 후의 세포의 기능적 변화를 연구하였다. 먼저 site-directed
mutagenesis를 통해 TRPC6의 pore region에 존재하는 아미노산들(Leu-Phe-Trp)을 alanine으로 바꾸어 dominant negative form을 만들었다. HEK 세포 혹은 배양된 음경해면체에 transfection 시켰을 때 endothelin-1에 의한 이온전류의 발생을 억제하였
다. wild type의 TRPC6을 발현시켰을 때에는 endothelin-1에 의한 전류가 증가하였다. TRPC6의 dominant negative form은 endothelin-1에 의한 세포내칼슘 증가도 억제하였다. TRP 통로 dominant negative form의 cDNA를 in vivo transfection 후
음경해면체 내압의 변화를 연구하여 백서의 음경해면체 내압이 증가하는지 실험하고 있는 중이다.
1) International Journal of Impotence Research에 투고하여 revision 중
2) 미국 Biophysical Society에서 초록 발표
3) TRPC4 및 TRPC6의 dominant negative form 제작
4) 인력양성: 박사학위 취득(2명)

Abstract ▼

The study aimed for elucidating the role of ion channels in maintaining the
contractility of corporal smooth muscle cells through the interaction of K
channels and TRP channels. In addition, we are going to develop the gene
therapy for erectile dysfunction using the results from the basic r

The study aimed for elucidating the role of ion channels in maintaining the
contractility of corporal smooth muscle cells through the interaction of K
channels and TRP channels. In addition, we are going to develop the gene
therapy for erectile dysfunction using the results from the basic researches
about the ion channel genes.
(1) the first year
- the expression of TRP channels
- finding out the dominant negative forms of TRP channels
- electrophysiological characteristics of receptor-operated calcium channels
activated by phenylephrine, endothelin-1 or lysophosphatidylcholine(LPC)
- analysis of the contribution of TRP channel or receptor-operated
calcium channels to the intracellular calcium concentration of corporal
smooth muscle cells
(2) the second year
- mutation of TRPC6 with site-directed mutagenesis
- ex vivo transfection of dominant negative forms of TRP channels in HEK
cells
- ex vivo transfection of dominant negative forms of TRP channels in HEK
cells
- measuring ionic currents and intracellular calcium concentration in corporal
smooth muscle cells expressing ion channels
- in vivo transfection of dominant negative forms of TRP channels
- measurement of intracorporal blood pressure
- basic researches about K channels and TRP channels
- understanding the role of TRP channels in native tissues
- understanding the mechanism of erectile dysfunction from the aspect of
ion channel as well as the other factors
- development of the gene therapy with ion channel genes
- the application of this method to other tissues or organs

목차 Contents

• Ⅰ. 연구계획 요약문...3
• 1. 국문요약문...3
• Ⅱ. 연구결과 요약문...4
• 1. 국문요약문...4
• 2. 영문요약문...5
• Ⅲ. 연구내용...6
• 1. 서론...6
• 2. 연구방법 및 이론...10
• 3. 결과 및 고찰...13
• 4. 결론...27
• 5. 인용문헌...28