초록 ▼

식습관의 변화와 이미 노령화 사회로 진입한 우리나라에서 심혈관계질환은 매우 심각한 관점에서 다루어야 할 연구과제임. 따라서 본 연구에서는 기술․사회․산업적으로 큰 파급효과를 가지는 국내외 유일한 항혈전제제 개발을 목표로 하였음. 연구결과 지렁이유래 FXa inhibitor를 분리 정제(EST)하였고 이로부터 small peptide를 선정하여 신약후보물질로서의 효능효과를 입증함. 약물학적 특징연구에서 EST II crude form과 small peptide III를 상대로 수행한 연구에서 FXa

식습관의 변화와 이미 노령화 사회로 진입한 우리나라에서 심혈관계질환은 매우 심각한 관점에서 다루어야 할 연구과제임. 따라서 본 연구에서는 기술․사회․산업적으로 큰 파급효과를 가지는 국내외 유일한 항혈전제제 개발을 목표로 하였음. 연구결과 지렁이유래 FXa inhibitor를 분리 정제(EST)하였고 이로부터 small peptide를 선정하여 신약후보물질로서의 효능효과를 입증함. 약물학적 특징연구에서 EST II crude form과 small peptide III를 상대로 수행한 연구에서 FXa inhibition효과를 예측할 수 있는 FXa cleavage 실험 결과 대조군인 SPI${\sim}$SPIV 중 SPIII에서 강장 높은 수율의 FXa cleavage 효과가 관찰되어 항혈전제로서의 개발이 용이할것으로 판단되었음. 또한 FXa에 기인하는 신호전달 중 혈전형성이외의 중요한 신호전달기전으로 알려진 염증신호전달에 대하여 실시한 FXa 유발 염증인자 생성(IL-6, IL-8 & MCP1)에서도 패턴의 경향성은 다르나 EST II crude form과 SPIII에서 모두 염증인자 생성을 억제하는 것으로 관찰되었으며, 특히 small peptide인 SPIII의 전 농도($0.01{\sim}1{\mu}g/mL$)에서 매우 우수한 염증인자 억제효과가 측정되어 급성염증으로 인한 전신성 패혈증 등의 영역으로 연구의 범위가 확대 될 수 있을 것으로 보임. 최종적으로 수행한 inflammatory cytokine antibody array에서 SPIII에 의해 IL-1, IL-6, IL16, MCP-1 및 RANTES 등의 생성이 억제되어 FXa inhibitor효과에 의한 항혈전제와 아울러 항염효과를 가지는 multifunctional drug으로 개발이 가능할 것으로 판단됨.

Abstract ▼

I. Object
$\bigcirc$ A attack rate of cardiovascular disease by increasing elderly people and by the change of dietary life is growing every year. Of these, cardiovascular disease caused by thrombus is Increasing steadily, and the market of thrombosis is deepened as time goes by.

I. Object
$\bigcirc$ A attack rate of cardiovascular disease by increasing elderly people and by the change of dietary life is growing every year. Of these, cardiovascular disease caused by thrombus is Increasing steadily, and the market of thrombosis is deepened as time goes by.
$\bigcirc$ Worldwide thrombus-related market has shown an remarkable increasing tendency(15% yearly) and the market has already reached to $10 billion since 2005. Additionally, domestic market is attractive territory due to the market potential exceeding ₩100 billion.
$\bigcirc$ Therefore, this study primarily aimed to develop the unique anti-thrombotic new bio-drug using whole information from the preliminary study on eisenstasin isolated from earthworm which has FXa inhibitory effect. Specially, as FXa inhibition is a typical upstream signal pathway inducing thrombogenesis, FXa inhibitor has been the main research and development target.
II. Contents and Ranges
$\bigcirc$ In this study, we wished to develop a superior FXa inhibitor simplified to small peptide using the secured novel gene library as follows.
1. Molecular cloning of eisenstasin through gene expression system
2. Selection of the most potential small peptide from full-length peptide
3. Secure of the most active small peptide well reacting with FXa
4. Secure of mechanism proving the functional excellency for development as a brand new anti-thrombotic new drug candidate.
5. Secure the scientific data on anti-inflammatory effect of eisenstasin
III. Study results
$\bigcirc$ We confirmed a relatively excellent FXa inhibition activity in EST II and the small peptide(SPIII) synthesised from EST II also showed the most effective results(33%). In an applied study(Pharmaco-immunological), FXa cleavage was well inhibited by SPIII comparing to other small peptides(SPI${\sim}$SPIV). This indicates that SPIII is the most active form for use on anti-thrombotic study.
$\bigcirc$ Moreover SPIII in all concentrations($0.01{\sim}1{\mu}g/mL$) also inhibited the production of proinflammatory cytokine such as IL-6, IL-8 and MCP-1 in HUVEC and the inhibition was also found in EST II crude form which implies that the research area could be enlarged up to an acute inflammation such as septic shock.
$\bigcirc$ From an additive cytokine array study screening the cytokines related with inflammation, we found that IL-1, IL-6, IL-16, MCP-1 & RANTES were decreased. Taken together, we concluded that SPIII has multifunction for antithrombosis as well as antiinflammtion
IV. Application plans
$\bigcirc$ With these study background on eisenstasin, it will be possible to apply to the following bio-new drug.
1. Application to studies on naturally-occurring FXa inhibitors different from existed FXa inhibitors(e.g. synthetic FXa inhibitor or antistasin)
2. Development of more stable small peptides which keeps the high functionality
3. Clinical use of small peptide overcoming defects in a short period of time
4. Activation of an earthworm farming when EST is proved as a highly qualified antithrombotic peptide.

목차 Contents

• II. 총괄연구과제 연구결과...12
• 1. 연구개발과제의 배경 및 필요성...13
• 2. 국내외 기술개발 현황...22
• 3. 연구개발과제의 추진체계...25
• 4. 연구개발수행 내용 및 결과...28
• 4.1. 연구회 운영실적...50
• 5. 목표달성도 및 관련분야 기여도...50
• 5.1. 총괄연구개발과제의 목표달성도...50
• 5.2. 관련분야 기여도...50
• 6. 향후 연구성과 추진 계획...51
• 7. 연구개발결과의 파급효과...52
• 7.1. 기술적 파급효과...52
• 7.2. 경제.산업적 파급효과...53
• 7.3. 사회적 파급효과...53
• 8. 연구개발결과의 활용계획...54
• 8.1. 연구개발결과의 활용계획 및 추가연구의 필요성...54
• 8.2. 사업화(기업화) 목표 달성도 및 계획...55
• 8.3. 사업화 수준(계획 및 완료 포함)...55
• 9. 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보...55
• 10. 참고문헌...55
• IV. 첨부서류...57
• 1. 자체평가의견서...58
• 2. 연구성과 실적 증빙서류...61
• 3. 기타 요청서류...65