초록 ▼

연구목표
합성에스트로젠(xenoestrogen)이 웅성생식주기와 정자형성과정에 미치는 영향을 조사하고 steroidogenesis 에 미치는 영향과 작용기전을 확인하여 정소의 발생과 분화에 미치는 영향을 알아보기 위함이다.
연구내용
1. 웅성생식세포의 체외배양법을 통하여 체외배양된 정소세포에 미치는 합성에스트로젠(BPA, OP, PCB)의 영향을 확인함. 2. 생쥐(4주령)에 합성에스트로젠을 투여하여 생쥐의 정소로부터 정소조직의 발생과 정자형성과정의 변화를 조사하고 CYP 동위효소의 발현과 inhibin, activ

연구목표
합성에스트로젠(xenoestrogen)이 웅성생식주기와 정자형성과정에 미치는 영향을 조사하고 steroidogenesis 에 미치는 영향과 작용기전을 확인하여 정소의 발생과 분화에 미치는 영향을 알아보기 위함이다.
연구내용
1. 웅성생식세포의 체외배양법을 통하여 체외배양된 정소세포에 미치는 합성에스트로젠(BPA, OP, PCB)의 영향을 확인함. 2. 생쥐(4주령)에 합성에스트로젠을 투여하여 생쥐의 정소로부터 정소조직의 발생과 정자형성과정의 변화를 조사하고 CYP 동위효소의 발현과 inhibin, activin 의 발현을 확인함으로써 외인성 합성에스트로젠의 영향을 확인함. 3. 가임생쥐에 합성에스트로젠의 투여를 통하여 임신 중 처리에 의한 태아기 및 신생아기의 정소의 발생과 분화에 미치는 영향을 확인하였다. 본 연구는 태아기 18일과 신생아기 7일에 적출하여 정소의 형태학적인 변화와 정소발현 유전자의 변화를 확인함. ①태아기와 신생아기 체중변화와 정소의 크기변화를 조사하고 H-E 염색을 통하여 정소의 조직학적인 변화를 관찰. ② 정소내 정자형성과정과 호르몬형성과정에 관여하는 유전자의 발현의 조사. ③SF-1, inhibin, activin의 발현을 조사. ④호르몬 분비와 AR의 발현을 조사.
연구성과
1. 체외배양을 통하여 정소세포에 미치는 합성에스트로젠의 영향 ① BPA와 OP $10^{-4}$M에서 유의하게 세포의 생존율이 감소. $10^{-3}$ mM에서 세포가 사멸. ② 처리군에서 CYPscc의 유전자 발현이 낮은 경향. 3$\beta$-HSD의 유전자 발현은 BPA군에서는 농도 의존적으로 발현양이 감소. OP와 PCB 군에서는 저농도에서는 다소 높은 발현을 보였지만 $10^{-5}$ M의 군에서는 대조군에 비해 낮게 발현. 그러나, $CYP_{17}{\alpha}$의 유전자 발현은 모든 처리군에서 농도가 증가할수록 낮음. 특히 OP와 PCB 군에서 유의하게 낮음. ③ inhibin $\alpha$의 발현은 확인할 수 없었고 $\beta$ 는 A와 B type 모두 E 군에서 점진적으로 증가하는 양상을 확인, estrogen과 inhibin $\beta$간에 상관관계가 있음. 그러나, 처리군에서는 변화가 없음. ④ 처리군에서 ER 유전자의 발현은 E 군과 유사하게 높은 발현양상. AR 유전자 발현은 농도가 증가함에 따라 조금씩 증가하는 양상. ⑤ E 와 T의 양은 고농도인 BPA 와 OP ($10^{-4}$ M)군에서 낮은 수치가 측정. 2. 생쥐(4주령)에서 정자형성과정과 steroidogenesis에 미치는 합성에스트로젠의 영향 ① 웅성정소조직에서의 CYP 동위효소의 발현은 OP 군에서 대조군에 비해 낮아지는 경향. BPA 군에서는 변화가 없음. ② inhibin $\alpha$, $\beta$와 activin 의 유전자 발현은 OP 200 mg/Kg 군에서 $\alpha$, $\beta$의 감소를 확인. ③ 웅성생쥐정소조직에서는 처리된 BPA, OP PCB 군에서 ER$\alpha$, $\beta$와 AR의 변화는 없음. ④ BPA를 처리한 웅성생쥐군에서는 T의 변화를 관찰할 수 없었으나 OP를 처리한 군에서는 농도가 증가함에 따라 점진적으로 증가. 3. 가임생쥐에 합성에스트로젠의 투여를 통한 태자기 및 신생아기의 정소의 발생과 분화에 미치는 영향. ① 체중의 변화는 성별에 따라, 농도에 따라 그리고 태자기와 신생아기에 따라 변화가 있었다. 즉 낮은 농도(OP 2, 20 mg/kg)에서 태아기에서 암컷은 증가하는 반면, 수컷은 감소하고 높은 농도( OP 200 mg/kg)에서는 체중이 모두 감소함. ② OP 2 mg/kg, BPA 2 ${\mu}g$/kg 군에서 정세관의 크기가 유의하게 증가함. ③ 임신기간중 모체의 E 의 변화는 나타나지 않았음. ④ 태자기 OP 2, 20 mg/kg에서 CYPscc, $CYP_{17}{\alpha}$는 증가하는 경향, 3$\beta$-HSD는 유의하게 증가. 17$\beta$-HSD, CYParom 발현은 OP 2 mg/kg에서 유의한 증가. ⑤ SF-1은 태자기 OP (2, 20mg/kg)과 신생자기 BPA (200 ${\mu}g$/kg)군에서 증가하는 경향. inhibin과 activin의 변화는 신생자기에서 고농도 BPA 처리군( 200 ${\mu}g$/kg)에서 inhibin $\beta$가 유의하게 증가함.

Abstract ▼

Purpose of Research
This study w as carried out the effects of xenoestrogen on steroidogensis in spermatogenesis of m ice spermatogenic cells and testis treated EDs.
Contents of Research
This study was carried out the effects of xenoestrogen on steroidogensis in spermatogenesis of mice sper

Purpose of Research
This study w as carried out the effects of xenoestrogen on steroidogensis in spermatogenesis of m ice spermatogenic cells and testis treated EDs.
Contents of Research
This study was carried out the effects of xenoestrogen on steroidogensis in spermatogenesis of mice spermatogenic cells and testis treated EDs. We performed to identify the expression of some testis-specific genes(LDH, SP-1, protamine-2), cytochrome P450 enzymes(CYPscc, 3$\beta$-HSD, $CYP_{17}{\alpha}$, CYP19) involved in sterodogenesis and estrogen/androgen receptor. And inhibin $\alpha$, $\beta$and activin in related feedback loop in mammals and steroidogenic factor (SF-1) is dectected in spermatogenic cell and testis tissue of 4-week-old mice.Firstly, to identify the pre-meoitic stage germ cell, we examined the testis of male ICR mice by histologic and molecular biologic methods. Mouse testiscular cells were prepared from 15-day-old mice which have only pre-meiotic germ cells by enzyme digestion using collagenase and trypsin. Testicular cells cultured in DMEM supplemented with FSH and with EDs which is octylphenol(OP), bisphenol(BPA), estrogen(E2) (10-9, 10-8,10-7, 10-6,$10^{-5}$, $10^{-4}$M, respectively) and aroclor 1254(A1254) known as PCBs for 48 hrs and 96 hrs. The gene expression of P450 enzymes and LDH, SP-10 known as testisspecific gene, inhibin, acitivin and ER/AR used to examine by semi-quantitive RT-PCR. 4-week-old mice inject sc with PCBs, OP, BPA for 10 days, daily. Secondly, we performed to investigate the gene expression of P450 enzymes and others in these tests as mentioned before. To investigate the morphological finding of spermatogenic cells and testis tissues used to immunocytochemistry. Finally, to identify testis of fetus in pregnant mice, we examined the testis of male ICR mice by histologic and molecular biologic methods. Testis of fetus was prepared from pregnant mice treated with EDs by daily or two days. The gene expression of P450 enzymes and LDH, SP-10 known as testis- specific gene, inhibin, acitivin and ER/AR used to examine by semi-quantitive RT-PCR. 4-week-old mice treated with EDs for 10 days, daily.
Effectiveness of Research
Body weights were significantly increased in the groups treated with all doses of OP and BPA. Maximum seminiferous tubules diameters on gestational day 18 were not changed in any treatment group, however, they were significantly increased on the neonatal day 7 in the group treated with low-dose of OP (2 mg/kg) and BPA (2 ${\mu}g$ /kg). Increased expression of the P45017$\alpha$-hydroxylase dehydrogenase (P45017$\alpha$), 3$\beta$ -hydroxylase dehydrogenase (3$\beta$-HSD), and 17$\beta$-hydroxylase dehydrogenase (17$\beta$ -HSD) on gestational day 18 were observed in the groups treated with 2 or 20 mg/kg of OP compared to control group. However, expression of the steroidogenic enzymes were not changed in the groups treated with all the doses of BPA. In contrast with the results from fetal testis, no expressional changes of these enzymes was found in all the OP-treated group and increased expression of inhibin/activin $\beta$B subunit mRNA were observed in the 200 ${\mu}g$/kg BPA-treated group in the neonatal day 7.
The results of this study suggest that gestational exposure to low level of xenoestrogen causes a stimulatory effects on the transcriptional expressions of steroidogenic enzymes and subunits of inhibin/activin and on the seminiferous tubule development by their estrogen-like actions. But gestational exposure to high level of xenoestrogne causes a inhibitory effects. Therefore, effects of xenoestrogen on steroidogensis in spermatogenesis of m ice sperm atogenic cells and testis treated EDs is dependent on concentration of xenoestrogen.

목차 Contents

• Ⅰ. 연구계획 요약문 ...3
• 1. 국문요약문 ...3
• Ⅱ. 연구결과 요약문 ...4
• 1. 국문요약문 ...4
• 2. 영문요약문 ...5
• Ⅲ. 연구내용 ...6
• 1. 서론 ...6
• 2. 연구방법 및 이론 ...9
• 3. 결과 및 고찰 ...11
• 4. 결론 ...21
• 5. 인용문헌 ...22