초록 ▼

식물체 내에서의 의약용 단백질 생산을 위해, 소의 성장호르몬인 bovine growth hormone (bGH)과 빈혈치료제인 erythropoietin (EPO) 유전자를 이끼에 도입하여 유전자 발현 양상과 활성도에 관하여 연구하였다. EPO와 bGH 유전자를 particle gun을 이용하여 이끼 내로 형질전환 하였고 PCR과 Southern 분석을 통하여 우전자 도입을 확인하였다. 이들 유전자가 대량 발현되는 형질전환체만을 Northern과 Western을 이용하여 선발하였다. 자체 개발한 20L 액체배양 기술로 대용량으로 증

식물체 내에서의 의약용 단백질 생산을 위해, 소의 성장호르몬인 bovine growth hormone (bGH)과 빈혈치료제인 erythropoietin (EPO) 유전자를 이끼에 도입하여 유전자 발현 양상과 활성도에 관하여 연구하였다. EPO와 bGH 유전자를 particle gun을 이용하여 이끼 내로 형질전환 하였고 PCR과 Southern 분석을 통하여 우전자 도입을 확인하였다. 이들 유전자가 대량 발현되는 형질전환체만을 Northern과 Western을 이용하여 선발하였다. 자체 개발한 20L 액체배양 기술로 대용량으로 증식시킬 수 있었다. 형질전환 이끼로부터 저순도로 분리 정제된 EPO는 약간의 활성도가 있는 것으로 확인되었으며, bGH 형질전환 식물은 활성도를 검증하지 못했지만, 형질전환된 효모에서 추출한 bGH를 사료에 첨가하여 어류를 이용하여 시험한 결과 활성도가 높은 것으로 판명되었다.

Abstract ▼

Recently, plant biotechnology combined with plant tissue culture techniques has been rapidly developed to engineer crop plants. Furthermore, plants are very attractive biological systems for the production of pharmaceutical recombinant proteins owing to many advantages, such as mass production with

Recently, plant biotechnology combined with plant tissue culture techniques has been rapidly developed to engineer crop plants. Furthermore, plants are very attractive biological systems for the production of pharmaceutical recombinant proteins owing to many advantages, such as mass production with relatively low costs, extremely stable storage of proteins in tissues, similarity of translational modification machinery with animal, and safety from animal virus contamination. The moss Physcomitrella patens is well known for easy transformation, simple life cycle and the possibility of mass production. Therefore, it is worthy of trying to produce pharmaceutical proteins through nuclear and plastid transformation in mass scale with a view of industrialization. In this project, we used bovine growth hormone (bGH) and erythropoietin (EPO) genes for producing their recombinant proteins in Physcomitrella. First of all, genes for bGH and EPO were introduced into vectors for the nuclear and plastid transformation. These vectors were transformed into Physcomitrella via particle bombardment. The presence of introduced genes were identified by genomic PCR and Sourthern blot analyses. Foreign gene expression within transgenic plants were examined by northern blot analyses. Over-expressed lines were selected and subjected to immunoblot analyses.

목차 Contents

• 제 1 장 연구개발과제의 개요...10
• 1 절 연구개발의 배경 및 필요성...10
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황...17
• 1 절 국내외 타 연구기관의 연구개발 실적...17
• 2 절 현 기술상태의 취약성...18
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과...19
• 1 절 연구의 재료 및 연구방법...19
• 2 절 연구 내용 및 결과...21
• 3 절 대표적 성공사례...39
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도...40
• 1 절 연구 개발목표의 달성도...40
• 2 절 관련 분야의 기술 발전에의 기여도 40...41
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획...43
• 1 절 추가연구의 필요성...43
• 2 절 기업화 추진방향...43
• 제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보...44
• 1 절 이끼 Physcomitrella patens에 관한 genomics 관련 연구의 증가...44
• 제 7 장 참고문헌...45