보고서 정보
주관연구기관 |
한양대학교 HanYang University |
연구책임자 |
윤용달
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참여연구자 |
강성구
,
김해권
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보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2003-10 |
과제시작연도 |
2002 |
주관부처 |
과학기술부 |
사업 관리 기관 |
한국과학재단 Korea Science and Engineering Foundtion |
등록번호 |
TRKO200900070250 |
과제고유번호 |
1350010497 |
사업명 |
목적기초연구사업 |
DB 구축일자 |
2013-04-18
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키워드 |
조직재구성.Matrix metalloproteins.생식세포사멸.세포사멸.난포퇴화.난포액.cDNA expression array.자궁 주기.수란관.Tissue remodelling.Oocyte demise.Follicular fluid.Germ cell apoptosis.Matrix metalloproteinase.Oviductal fluid.cDNA expression array.Follicular atresia.Placenta.
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초록
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포유동물의 생식기관은 조직재구성 (Tissue remodelling, TR)과 세포사멸 (apoptosis, APT), 혹은 예정세포사 (programmed cell death, PCD)에 의해 구조와 기능이 생물학적 시계 (Biological rhythmic clock)처럼 주기성을 가진다. 이런 주기성을 조절하는 기작을 분자생물학적 방법으로 밝히고자한다.
생물학적 주기중 생식세포 및 조직에서 (1) 생식세포, 난포퇴행분화, 황체 소멸시 APT 유전자의 발현 기작; (2) 난소 및 난관의 조직재구성시 matrix me
포유동물의 생식기관은 조직재구성 (Tissue remodelling, TR)과 세포사멸 (apoptosis, APT), 혹은 예정세포사 (programmed cell death, PCD)에 의해 구조와 기능이 생물학적 시계 (Biological rhythmic clock)처럼 주기성을 가진다. 이런 주기성을 조절하는 기작을 분자생물학적 방법으로 밝히고자한다.
생물학적 주기중 생식세포 및 조직에서 (1) 생식세포, 난포퇴행분화, 황체 소멸시 APT 유전자의 발현 기작; (2) 난소 및 난관의 조직재구성시 matrix metalloproteinase (MT-MMPs)의 유전자 발현 양상; (3) cDNA expression array를 이용한 자궁의 조직재구성 특이 유전자군을 탐색하는 연구를 하였다. MTT test, TUNEL, ISEL apoptotic assay, elisa assay, DNA fragmentation, flowcytometry, immunohistochemistry (IHC), electron microscopy (EM), PLD activity 측정법의 정립을 통하여 난자, 난포, 황체의 퇴행 분화과정을 연구하였다. 또 생식호르몬의 측정은 RIA, NIA로; preapoptotic and postapoptotic genes의 transcript는 RT-PCR로, 형질 단백질의 발현은 IHC, Western blot analysis등의 방법으로 세포사멸기작을 연구하였다.
첫째로 생식세포, 난포 및 초기배아의 세포사멸 유전자의 발현을 연구하였다. MTT test, TUNEL, ISEL apoptotic assay, elisa assay, DNA fragmentation, flowcytometry, immunohistochemistry (IHC), electron microscopy (EM), PLD activity 측정법의 정립을 통하여 난자, 난포, 황체의 퇴행 분화과정을 연구하였다. 또 생식호르몬의 측정은 RIA, NIA로; preapoptotic and postapoptotic genes의 transcript는 RT-PCR로, 형질 단백질의 발현은 IHC, Western blot analysis등의 방법으로 세포사멸기작을 연구하였다. Interferon이 난포 및 난자 정자의 사멸에 미치는 영향은 추가연구로 Reproduction에 투고하였다. 연구의 국제적 경쟁력을 증대시키기 위하여 내분비계장애물질(EDC)이 생식조직의 세포사멸에 미치는 영향을 연구를 추가하였다. 이 결과를 Dev. Reprod (국내), SSR 학회에 매년 발표하여 3명의 박사학위와 NIH에 Post-Doc으로 진출시켰다.
둘째로 난포액, 난관액 및 조직, 난소 및 자궁조직 재구성에서 MMP의 발현양상을 연구하였다. 난포액 및 난관에서 MT-MMPs의 mRNA와 단백질의 발현양상을 각각 조사하여, GA110 가 신 단백질로 MMP-2의 활성을 억제, 조절하는 것으로 밝혀저 이를 Biol Reprod (2001), RFD (2003)에 발표하였다. 또한난포액 및 난관액내 이들의 존재와 역할을 조사하여 투고 준비하고 있다.
세째로 생식주기 동안 자궁 재구성에 관여하는 특이 유전자군들을 탐색하고 발현 pattern을 연구하였다. 특히 착상 전.후의 자궁 및 태반에서, mel1a 및 PLII유전자의 발현 기작을 밝혀, Mol Cell endo에 발표하였다. 발현되는 특이 유전자군과 자궁 및 태반, 생식조직의 remodeling 에 관여하는 유전자군의 변화를 cDNA expression array를 이용하여 유전자군(gene family)의 발현 형상을 분석하여 논문준비하고 있다. 그리고 EDC가 태반의 prolactin 유전자군에 미치는 영향을 밝혀 Mol Cells에 발표하였다.
Abstract
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The mammalian reproductive organs undergo extensive and rapid changes by tissue remodelling (TR) and apoptotic cell death (APT, or programmed cell death, PCD) in tissue mass and function rhythmically. The reproductive organs shows the dramatic and biologically rhythmic alterations throughtout the li
The mammalian reproductive organs undergo extensive and rapid changes by tissue remodelling (TR) and apoptotic cell death (APT, or programmed cell death, PCD) in tissue mass and function rhythmically. The reproductive organs shows the dramatic and biologically rhythmic alterations throughtout the life. The mechanisms to control this biological clock is to be investigated by the molecular techniques.
We focussed on the expression mechanisms of MMP family genes and pro-/anti-apoptotic genes during the biologically rhythmic remodeling of reproductive tissues; uterus, oviduct, and ovary, In addition, we had studied the apoptotic process and balance mechanisms of germ cell formation, gametogenesis, and reproductive cycles. The expressions of MMPs and apoptotic signals was detected by Western blot and Northern blot analyses, RT-PCR, immunohistochemistry (IHC), cDNA expression array, and also by ELISA, In addition we analyzed the expression patterns of apoptotic signals by histochemical preparations (HC), TUNEL, RIA, Elisa, in situ hybridizations (ISH) techniques, flow cytometry, as well as molecular techniques.
The five results on the expression patterns of APT genes, APT signals, pre and post-apoptotic genes during the remodelling such as oocyte maturation, follicular atresia, luteolysis, embryo development, uterine cycle had been presented in the SSR annual meetings and submitted to international (5) and local journal (Dev Reprod 4 papers). We published our results on the expressions of MT-MMP in follicular fluids, oviductal fluids, ovaries, and uterine tissues and on the new findings about GA110 protein ( MMP activity modulator) in Biol Reprod (2001, 65:1726) or Reprod Fertil Develop (2003, 15:141)etc. We found the new expression patterns during uterine remodelling of mel1a and PL-II gene families (Mol Cell Endo 2003, 200:57). We investigated the effects of endocrine disrupting chemicals (EDC) on the tissue remodelling, demise, and proliferation and also expressions of prolactin or APT gene families (Mol Cells. 2003, 15:114). We opened the new laboratory for toxicogenomics and "omics world" , hormonomics, on EDC effects using microarrays, DNA chips, protein chips to study the effects of environmental factors on tissue remodelling and apoptosis.
목차 Contents
- 1. 서론 ...7
- 2. 연구방법 및 이론 ...12
- 3. 결과 및 고찰 ...15
- 4. 결론 ...58
- 5. 인용문헌 ...60
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