보고서 정보
주관연구기관 |
순천대학교 SunChon Natinal University |
연구책임자 |
박기영
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참여연구자 |
김경현
,
임경환
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보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2004-10 |
과제시작연도 |
2003 |
주관부처 |
과학기술부 |
사업 관리 기관 |
한국과학재단 Korea Science and Engineering Foundtion |
등록번호 |
TRKO200900070912 |
과제고유번호 |
1350020372 |
사업명 |
기초연구지원 |
DB 구축일자 |
2013-04-18
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키워드 |
세포분열.돌연변이체.환경스트레스.단백질 분해.생물정보학.Cell division.DNA replication.T-DNA mutants.Environmental stresses.Protein degradation.Bioinformatics.
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초록
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본 연구는 유전자의 기능을 밝히는 역유전학적 접근 방법을 이용하여 세포주기의 조절 인자와 SAMDC의 관게를 연구하고, SAMDC의 구조를 분석함으로써 식물생 장 기간을 단축하거나 조절할 수 있는 작물을 개발할 수 있는 기초적인 분자정보 를 축적하고자 하였다.
제 1세부과제는 세포주기에 관여하는 유전자 (cyclin A,B,D,CDK,CKI, MAPK,그리고 MAPKK) 들의 정확한 세포주기 단게별 발현을 파악하였다. 아울러 유전자 의 발현 및 세포주기와 스트레스간의 관게를 분석하였다. 그리고 상기 유전자들의 발현 양상과 po
본 연구는 유전자의 기능을 밝히는 역유전학적 접근 방법을 이용하여 세포주기의 조절 인자와 SAMDC의 관게를 연구하고, SAMDC의 구조를 분석함으로써 식물생 장 기간을 단축하거나 조절할 수 있는 작물을 개발할 수 있는 기초적인 분자정보 를 축적하고자 하였다.
제 1세부과제는 세포주기에 관여하는 유전자 (cyclin A,B,D,CDK,CKI, MAPK,그리고 MAPKK) 들의 정확한 세포주기 단게별 발현을 파악하였다. 아울러 유전자 의 발현 및 세포주기와 스트레스간의 관게를 분석하였다. 그리고 상기 유전자들의 발현 양상과 polyamine의 관게를 분석하였고, SAMDC 과다발현 형질전환쳬를 제 조하였다. 제 2세부과제는 DNA 복제에 관련된 유전자들의 조직 및 식물 발달 단 게 에 서 발현 양상을 파악하고 그 기 능을 규명 하기 위 하여 Ackl, AckZ 등의 knock- out 呱tant를 확보하여 이들의 세포주기 및 병증에 대한 연구를 수행하였 다. 또한 activation tagging mutant의 표현형 및 유전분석을 하고 그 표현형에 연 관된 cDNA를 cloning하고자 하였다. 제 3세부과제에서 는 SAMDC와 SAMDC/ uORF' 단백질들이 세포주기와 밀접하게 관련되 어 있는바 uORF의 native 단백 질의 hexagonal 형 대의 결정을 얻었지 만, 재 생산이 안되 어, MBP- uORF단백질로 발현, 정제하여 결정화를 시도하였고, NMR 구조분석을 위 하여 HSQC spectrum 자료를 수집하여 구조 분석을 시도하고 있다. uORF의 세포 내 다른 단백질과의 상호작용 연구를 위하여 pull- down assay를 진행하여 상호작 용하는 가능성 단백질의 동정연구를 추진하고 있다.
본 연구 결과 다음의 성과를 얻었으며, 이러한 성과물은 앞으로 새로운 작물개발 에 유용하게 활용될 것으로 판단된다. Cyclin A,B,D,CDK,CKI,MAPK, 그리고 MAPKK 유전자 cloning 세포주기조절에 있어서 상기 유전자의 역할 및 상기유전자와 스트레스와의 관게 폴리아민에 세포주기에 미치는 영항 및 역할 SAMDC 과량 발현쳬, Ackl, AckZ 등의 knock- out mutant Activation tagging mutant $\sharp$ 124 uORF 의 native 백질의 hexagonal 형 대 의 결 정 MBP-uORF/ GST-uORF clone
Abstract
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The purpose of this study is to estab1ish the basic molecular regulation of cell cycle in tobacco suspension cells and Arabitopsis, and to clarify the struCture of SAMDC and uORF' of SAMDC
The expressions of cyclin A,B,D,CDK,CKI,MAPK, and MAPKK, which are tightiy involved in the cell cycle, were
The purpose of this study is to estab1ish the basic molecular regulation of cell cycle in tobacco suspension cells and Arabitopsis, and to clarify the struCture of SAMDC and uORF' of SAMDC
The expressions of cyclin A,B,D,CDK,CKI,MAPK, and MAPKK, which are tightiy involved in the cell cycle, were delayed by cold, heat, salt and HZO, The changes in polyamine fevel and in the activities of ADC, ODC and SAMDC in tobacco highly depend on the cell cycle. The transgenic BY- 2 cell overexpressing SAMDC were generated and analyzed. The knockout mutants of Ack1 and Ack2 were also charactehzed and they showed the resistance against bactehal infections. SAMDC and its uORF proteins were overexpressed using sublconing techniques. Crystalhzation of the puhfied uORF' protein resulted in a hexagonal crystals, which could not be reproducible. For struCtural studies, a fusion protein, MBP- uORF' , were atte1Tlpted for crystalhzation. The HSQC spectra data for Nx 【R were also collected. MOreover, a pull- down assay for a possible protein- protein interaction with uORF' gave a possible candidate protein whose identification study 15 under zay.
Outputs from this research project are the fonowings, which wlll be beneficial to develop the useful culti, 7ars for the commerciahzation in future. Cloning of Cyclin A,B,D,CDK,CKI,MAPK, and MAPKK genes in BY- 2 Cell The role of the above genes to cO11trO1 cell cycle and the relationship betWeen abiotic stresses and them in BY- 2 cell The effect of polyamines on cell cycle and their role tO cO11trO1 it The transgenic BY- Z cell oVerexpression SAMDC Knock- out mutant of Ackl, AckZ Activation tagging mutant $\sharp$ 124 The crystal of uORF' from carnation SAMDC MBP- uORF/ GST- uORF clones
목차 Contents
- Ⅰ. 연구계획 요약문...12
- 1. 국문요약문...12
- Ⅱ . 연구결과 요약문...13
- 1. 국문요약문...13
- 2. 영문요약문...14
- Ⅲ . 연구내용 및 결과...15
- 1. 서론...15
- 가.연구배경...15
- 2. 연구방법...22
- 가.연구체계 및 방법...22
- 나.연구 및 방법...23
- 3. 결과 및 고찰...35
- 가.제 1세부과제...35
- 나.제 2세부과제...61
- 다.제 3세부과제...67
- 4. 결론...86
- 5. 인용문헌...88
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