초록 ▼

bHLH 전사인자를 이용하여 줄기세포로부터 신경세포를 체외에서 만들어 내는 기술과 퇴행성뇌질환의 치료를 취한 사람의 신경세포를 다량으로 얻는 기술을 개발하고자, 본 연구에서는 1) 신경세포의 분화단계 측정용 리포터 시스템으로 nestin, neuroD, SUR, TH, NSE 리포터를 제작하여 신경세포 분화단계 및 신경조직 특이적인 리포터의 활성을 조사하였고, 2) 리포터벡터 및 neurogenin, neuroD, Id1, 2, 3가 도입된 생쥐 EC세포주를 제작하여, EC세포의 분화와 리포터벡터의 상관관계를 증명하였고, 3) 형광

bHLH 전사인자를 이용하여 줄기세포로부터 신경세포를 체외에서 만들어 내는 기술과 퇴행성뇌질환의 치료를 취한 사람의 신경세포를 다량으로 얻는 기술을 개발하고자, 본 연구에서는 1) 신경세포의 분화단계 측정용 리포터 시스템으로 nestin, neuroD, SUR, TH, NSE 리포터를 제작하여 신경세포 분화단계 및 신경조직 특이적인 리포터의 활성을 조사하였고, 2) 리포터벡터 및 neurogenin, neuroD, Id1, 2, 3가 도입된 생쥐 EC세포주를 제작하여, EC세포의 분화와 리포터벡터의 상관관계를 증명하였고, 3) 형광리포터를 이용한 신경세포 분리 및 4) neurogenic 전사인자와 리포터시스템을 동시에 이용하여 in vitro에서의 분화스펙트럼을 조사하였고, 5) 순수분리한 신경세포를 뇌조직에 이식 기술개발을 위해, 이식한 세포의 확인, 뇌이식 부위 및 세포 수에 따른 생착률 조사를 통해 최적의 뇌이식 조건을 설정하였다.
본 연구의 결과는 1) 줄기세포에 neurogenin유전자를 도입하여 신경세포로 형질전환시켜 뇌질환의 세포치료제로 개발하거나, 2) Nestin-GFP(+), (-) 세포의 순수분리를 통해 세포표면의 항원을 발굴하는데 활용하며, 3) 뇌의 내재성 신경줄기세포의 활성과 그 생존률을 증대시키는 세포외부인자의 발굴 및 4) Nestin-GFP유전자를 사용하여 신경줄기세포를 in vitro에서 다량 배양할 수 기술의 확립에 이용 가능하다.

Abstract ▼

[Goals of the research]
The final goal of this study is to develop a method to in vitro differentiate neuronal cells using bHLH transcription factors which will be used for the treatment of neurological diseases. Specifically, this study was designed to generate reporter genes which might provide

[Goals of the research]
The final goal of this study is to develop a method to in vitro differentiate neuronal cells using bHLH transcription factors which will be used for the treatment of neurological diseases. Specifically, this study was designed to generate reporter genes which might provide tools to determine the differentiation stages of neural development; 2) to develop an in vitro method to regulate neuronal differentiation; 3) to develop a reporter system to recognize and isolate neural cells before the transplantation.
[Results]
1) We generated reporter genes of using regulatory regions of the nestin, neuroD, SUR, TH, NSE genes and prove their efficacy by showing that the reporter activities were proportional to the expression of the endogenous corresponding genes. 2)We generated expression vectors of neurogenin, neuroD, Id1, Id2, and Id3 into mouse embryonal carcinoma cells, We found that neurogenin and neuroD stimulated neuronal differentiation whereas Id proteins inhibited neuronal differentiation. 3) We generated the nestin reporter genes using GFP as a reporter and carried out FAGS analyses. As a result we were able to purify neural stem cells derived from the mouse embryonal carcinoma cells. 4) We also determined the parameters for transplantation method into the rat brain for the in vivo studies.

목차 Contents

• 표지...1
• 제출문...2
• 보고서 초록...3
• 요약문...4
• SUMMARY...7
• CONTENTS...8
• 목차...9
• 제1장 연구개발과제의 개요...10
• 1.1 연구개발의 목적...10
• 1.2 연구개발의 필요성...10
• 1.3 연구개발의 범위...16
• 제2장 국내외 기술개발 현황...18
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과...19
• 3.1 신경세포의 분화단계를 측정하는 시스템의 개발...19
• 1) Nestin 리포터벡터에 관한 연구...19
• 2) NeuroD 리포터벡터에 관한 연구...21
• 3) NSE 리포터벡터에 관한 연구...23
• 4) TH 리포터벡터에 관한 연구...24
• 5) SURI 리포터벡터에 관한 연구...25
• 3.2 bHLH전사인자를 이용한 EC세포의 신경세포 분화유도...26
• 3.3. 리포터를 이용한 순수분리기술의 개발...29
• 3.4. 뇌이식 조건 확립 및 신경줄기세포의 in vivo 거동 조사...31
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도...33
• 본 연구의 관련분야 기술 발전에의 기여도...33
• 향후 연구의 필요성...33
• 4.1 연차별 연구개발 목표 및 내용...34
• 4.2 계획대비 달성도...35
• 제5장 연구개발결과의 활용계획...38
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보...39
• 제7장 참고문헌...40