초록 ▼

본 연구는 식중독 원인규명 시 신속키트를 활용하여 원인 추정 식품 및 식재료 또는 환경 시료 등에서 그 원인을 신속하게 찾아 우선 제거함으로써 식중독의 추가 발생을 제어하고자 진행되었다. 국 내.외에서 상업적으로 유통되고 있는 신속검출 Kit를 검출원리에 따라 생화학 방법, Latex 응집방법, 항원-항체 반응 방법, Multiplex PCR방법으로 구분하여 실험을 진행하였다. 실험을 총 10가지에서 11가지 균으로 진행하였다. 생화학적 방법은 총3가지의 Kit로 수행했다. Check Three II Kit(환경시료 측정용)는 대장

본 연구는 식중독 원인규명 시 신속키트를 활용하여 원인 추정 식품 및 식재료 또는 환경 시료 등에서 그 원인을 신속하게 찾아 우선 제거함으로써 식중독의 추가 발생을 제어하고자 진행되었다. 국 내.외에서 상업적으로 유통되고 있는 신속검출 Kit를 검출원리에 따라 생화학 방법, Latex 응집방법, 항원-항체 반응 방법, Multiplex PCR방법으로 구분하여 실험을 진행하였다. 실험을 총 10가지에서 11가지 균으로 진행하였다. 생화학적 방법은 총3가지의 Kit로 수행했다. Check Three II Kit(환경시료 측정용)는 대장균군, 황색포도상구균, 살모넬라. 장염비브리오 검출용으로서 일부 균주에서 위양성반응이 나타나 식중독 세균에 대한 선택성과 민감성이 떨어지는 것으로 나타났다. Path check Kit (환경시료 측정용)는 E.coli Kit, Listeria Kit, Salmonella Kit가 있었고, 일부 균주에서 위양성 반응이 관찰되었으며 3가지 Kit 중 Listeria Kit의 민감성이 다소 낮았다. Food-system Kit는 S.typhimurium, L.monocytogens, E.coli O157에 대한 선택성과 민감성은 우수한 편이나, S.aureus와 Proteus의 선택성과 민감성이 떨어지는 것으로 나타났다. 생화학적 방법은 위양성 반응이 있어 세균을 선택적으로 검출하는데 어려움이 있었다. Latex 응집 반응법은 선택성은 우수하나 민감성이 떨어지고 순수 분리 후 반응해야하므로 신속성이 떨어지는 단점이 있었다. 항원-항체방법은 감도가 높은 항체가 well에 부착되어 있어 선택성과 정확도가 우수하나 민감성이 현저히 떨어지므로 전배양을 통해 민감성을 높여 검출 할 수 있었고 Kit에 명시되어있는 배양 방법을 사용하여도 무방하나, 방법이 번거롭고 시간이 오래 소요되는 단점이 있었다. Mutiplex PCR 방법은 앞서 행한 방법들에 비해 신속하게 세균을 검출할 수 있으나, DNA를 추출하는 방법이 다소 전문성을 필요로 하므로 생화학적 방법, Latex 방법보다 편이성이 떨어지는 단점이 있다. Mutiplex PCR 방법은 E-gene $check^{TM}$, Bacteria screening kit, Gram Nega(Posi) Mutiplex PCR Kit로 실험을 진행하였는데, Bacteria screening kit가 선택성과 민감성이 우수한 것으로 나타났다. DNA의 추출에 있어서 Gram positive인 S.aureus은 cell이 쉽게 파괴되지 않아 DNA를 추출 시 별도의 추출 Kit를 이용하여야 확인 할 수 있었다. Kit 별 장단점이 있으나 신속하게 세균을 검출하는데 있어 생화학적 방법은 위양성 반응이 나타나는 단점이 있었고, Latex 응집반응은 선택성은 있으나 민감성이 다소 떨어지고 순수분리 단계를 거쳐야하므로 신속 검출에는 어려움이 있다고 판단되며, 항원-항체를 이용한 방법에서도 선택성은 우수하지만 민감성이 떨어지는 단점이 있었다. Mutiplex PCR방법은DNA를 추출하는 방법에 있어 다소 까다로움 있으나, 신속 검출에 있어 민감성과 선택성이 다른 방법의 Kit보다 우수하므로 신속 검출에 있어 적합한 Kit로 사료되었다.

Abstract ▼

The rapid detection kits based on biochemical method, Latex cohesion method, enzyme-linked immunosorbent assay method, and multiplx PCR methods were collected and their efficacy was analyzed. Total 11 pathogens were tested. The cultivation time was identical as 20 hours and initial strain was counte

The rapid detection kits based on biochemical method, Latex cohesion method, enzyme-linked immunosorbent assay method, and multiplx PCR methods were collected and their efficacy was analyzed. Total 11 pathogens were tested. The cultivation time was identical as 20 hours and initial strain was counted by tryptic soy agar. Biochemical method was tested by three kits. First, Ejen Science Check Three II Kit was detection for coliform, S.aureus, Salmonella and V.parahaemolyticus. For Coliform, S.aureus, Salmonella and V.parahaemolyticus kit were false positive reaction. Thus, selectivity and sensitivity of the pathogenic were rather low. Second, Microgen Path check kit were detection for E.coli, Listeria, and Salmonella. For E.coli and Salmonella kit, were false positive reaction. Selectivity and sensitivity of Listeria kit were rather low. Third, selectivity and sensitivity of Liofilchem Food-system Kit were superior for S.typhimurium, L.monocytogens and E.coli O157. However, selectivity and sensitivity of S.aureus and Proteus are low. Selectivity of Latex cohesion method was superior, but sensitivity were low. Thus, before performing Latex Kit, enrichment of selection badge showed better sensitivity. Particularly, the selective media needed enrichment step because selectivity and sensitivity of S.aureus were low. Enzyme-linked Immunosorbent Assay(ELISA) performed in a "snadwich" configuration and high affinity "capture" antibodies specific for pathogens have been adsorbed on the surface of the wells. So selectivity and sensitivity were superior for pathogens(S.aureus, E.coli O157, Salmonella). Multiplex PCR method could rapidly detect pathogens compared to is prior method, but it was not simply than biochemical method, Latex cohesion method, because DNA extraction method was so fastidious and delicated. Multiplex PCR method was performed by three kinds of kit. We considered that TaKaRa bacteria screening kit showed best excellent selectivity and sensitivity. Various methods were applied for DNA extraction of S.aureus, because Gram positive S.aureus cell wall was not easily decomposed. With the result that we could know, DNA extraction kit was most pertinent to the extraction. Biochemical method was not suitable as rapidly detection method because it showed high false positive results. Latex cohesion method was limited detection of pathogen because it needed enrichment of selection badge for better sensitivity. ELISA method was limited detection of pathogen because it needed enrichment of selection a badge for better sensitivity. Multiplex PCR method was suitable as rapidly detection method because DNA extraction kit supplied improvement of selectively and sensitivity. Multiplex PCR method showed good detection of pathogens at least twenty-four hours.

목차 Contents

• 제출문 ...1
• 목차 ...2
• I. 연구개발결과 요약문 ...3
• 최종보고서 요약문 ...3
• Summary ...5
• II. 총괄연구개발과제 연구결과 ...7
• 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...7
• 1.1 총괄연구개발과제의 목표 ...7
• 1.2 총괄연구개발과제의 목표달성도 ...13
• 1.3 국내.외 연구 동향 ...14
• 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법 ...19
• 2.1 연구개발 내용 ...19
• 2.2 연구방법 내용 ...19
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ...31
• 3.1연구개발결과 ...31
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...112
• 제5장 총괄연구개발과제의 연구성과 ...113
• 5.1 활용성과 ...113
• 5.2 활용계획 ...114
• 제6장 연구결과 종합평가 ...115
• 1. 연구결과 요약 ...115
• 제7장 식 중독균 신속검출지침 (안) ...122
• 가. 검출 Kit별 신속검출 지침(안)...122
• 나. 검출 Kit 대상 균주별 신속검출 지침(안)...123
• 제8장 참고문헌 ...125
• 제9장 기타 주요변경사항 ...126