초록 ▼

제 1 세부과제에서는 지모와 황백을 이용한 물질 추출방법을 표준화하고, 지표물질을 설정. HPLC를 이용한 품질관리 방안과 HPLC로 분리를 위한 최적조건 확립. 또한 추출물의 분획에서의 지표물질의 함량 조사.
- 추출물의 분획 중 chloroform층이 phenylephrine 및 전장자극에 의한 평활근 수축에 가장 효과적이었음. Chloroform층에 포함된 berberine과 palmatine이 phenylephrine에 의한 전립선 평활근 수축을 이완에 주로 기여하는 것을 확인.
- 본 물질에 대한 급성독성시

제 1 세부과제에서는 지모와 황백을 이용한 물질 추출방법을 표준화하고, 지표물질을 설정. HPLC를 이용한 품질관리 방안과 HPLC로 분리를 위한 최적조건 확립. 또한 추출물의 분획에서의 지표물질의 함량 조사.
- 추출물의 분획 중 chloroform층이 phenylephrine 및 전장자극에 의한 평활근 수축에 가장 효과적이었음. Chloroform층에 포함된 berberine과 palmatine이 phenylephrine에 의한 전립선 평활근 수축을 이완에 주로 기여하는 것을 확인.
- 본 물질에 대한 급성독성시험과 일반약리시험 결과 1,500 mg/kg에서 약간의 위산분비 감소가 관찰되었을 뿐 다른 이상이 나타나지 않아 대단히 안전한 물질임이 밝혀짐.
- 본 물질의 작용은 전립선과 요도의 평활근 이완작용이 주된 작용이고 소염, 진통작용도 함께 나타냄을 확인하여 전립선비대증에 대한 제 증상에 대해 효과적으로 대처할 수 있음을 입증.
- 본 물질의 대량생산 공정이 확립되어 시제품이 제작되었음.
제 2 세부과제에서는 전립선, 방광, 요도, 위장관 등 각종 평활근에 대한 phenylephrine 유발 수축, 전장자극 유발 수축, charbachol 유발 수축 등에 대한 기초연구를 하였음.
- 제1세부과제에서 분리한 물질에 대해서 흰쥐의 각종 평활근, 즉 전립선, 방광, 위장관, 요도 등을 대상으로 조직에 대한 이완효과 확인.
- 유효성분에 대하여 토끼의 전립선, 요도 평활근을 이용한 생체외 실험을 진행해서 약물농도-반응곡선을 얻어 약물의 작용기전을 연구하였고, 그 결과를 2002년 국제요실금학회에서 발표.
- 생체내 실험은 토끼를 이용하여 실험하였고, phenylephrine 투여에 의한 요도압력이 기저치에서 평균 23 mmHg가 상승하는 것을 관찰함. Palmatine을 농도별로 전처치한 후 phenylephrine을 투여한 결과, 전립선 요도의 수축이 평균 36%에서 73%까지 농도의존적으로 억제됨. 이때 평균 혈압은 37.3% 감소에 그침.
- 개발대상약제를 토끼에게 경구투여하여 phenylephrine에 의한 요도압의 상승억제 정도를 측정. ADP 800 mg/kg를 투여한 결과 3시간 후에 요도압 이완효과가 평균 55.3%로 나타났고, 평균 혈압은 단지 7.2%만 감소함.
- 개의 전립선 비대증 모델 확립: 고환적출술 1개월 후 남성호르몬(androstanediol)과 여성호르몬(estradiol)을 3개월간 투여하여 전립선 비대증 유발.
제 3 세부과제에서는 전립선 구성세포들을 단일세포수준으로 분리, 동정하는 기법 확립. 외분비성 상피세포에 존재하는 Ca2+-activated K+ channel current와 Ca2+-activated Cl-channel current를 기록하여 Electrogenic Cl-secretion model의 가능성 제시.
- 전립선 신경내분비세포의 형태적, 기능적 특징 규명: 형태적 특징은 chormogranin-A positive immunoreactivity임을 확인, 기능적 특징은 action potential (활동전압), 막전압의존성 칼슘통로, 소디움 통로, 일과성 포타슘 통로 등임을 확인, 분석.
- 아드레날린성 수용체에 의한 신호전달기전 규명. alpha1 receptor를 통한 세포내 저장칼슘 유리작용(stored Ca2+ release by InsP3 production)과 alpha2 receptor를 통한 N-type Ca2+ channel 억제 효과를 규명하여 뇌하수체 세포 등 다른 신경내분비세포들과의 유사성 확인.
- 전립선액을 배출시키는 전립선 평활근세포를 분리하여 세포막 이온전류를 기록하였다. 막전압의존성 L-type 칼슘통로를 확인하고 일과성 외향전류 (transient outward K+ current)기록.

Abstract ▼

A. Development of the method for the quality control of the extract
1) Standardization of the extraction method and preparation of the extract
2) Determination of the standard materials for the quality control of the extract
3) Establishment of the analytical method using HPLC
B. Isolat

A. Development of the method for the quality control of the extract
1) Standardization of the extraction method and preparation of the extract
2) Determination of the standard materials for the quality control of the extract
3) Establishment of the analytical method using HPLC
B. Isolation and purification of the active compound
1) Bioassay guided fractionation of the extract
2) Isolation and purification of the active compound using chromatography
C. Study on the manufacturing-related processes
1) Safety : A single dose toxicity of the extract
General pharmacology of the extract
2) Establishment manufacturing processes
D. Study on the bio-functions of the preparation
1) Relaxation activity on the prostate or urethral smooth muscles in vitro system
2) Relaxation activity on the prostate or urethral smooth muscles in animal model
3) Induction of BPH in animal model (dog)
4) Anti-inflammatory activity in cell system
E. Study of the mechanism of the extract
The prostate gland produces main volume of seminal fluid, and is the most commonly occurring site of male urinary symptoms including benign prostate hyperplasia, chronic prostitis, and prostatic cancer. Due to the anatomical position and its structure surrounding urethral tract, the hyperplastic enlargement of prostate commonly leads to the obstruction of urinary flow.
In spite of the clinical significance, the normal cellular physiology of prostate gland is largely ignored, and the previous electrophysiological studies have been confined to the cell lines originating from prostate cancers. Therefore, in the present study, we investigated the characteristics of membrane channels, intracellular Ca2+ regulation and membrane receptors for neurotransmitters, which would provide valuable knowledge for the precise interpretation of the action mechanism of novel therapeutic agents.
The prostate gland consists of a complex ductal system lined with exocrine epithelial cells, basal cells and neuroendocrine cells embedded in a stromal matrix. The secretion of prostatic fluid is under neuronal control; adrenergic stimulation triggers smooth muscle contraction and expels the fluid, whereas cholinergic stimulation appears to increase the formation of fluid in the gland without contracting the smooth muscle.
1) Basic research for the mode of action by electrophysiological methods
2) Isolation of the neuroendocrine single cells
3) Investigation of the conc. of calcium in single cells
4) Examination to the mode of action of the extract

목차 Contents

• 표지 ...1
• 제출문 ...2
• 보고서 초록 ...3
• 요약문 ...4
• SUMMARY ...8
• CONTENTS ...14
• 목차 ...16
• 제1장 연구개발과제의 개요 ...17
• 제1절 연구개발의 목적 ...17
• 제2절 연구개발의 필요성 ...18
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ...22
• 제1절 전립선 질환 및 치료제의 시장규모 ...22
• 제2절 기술개발 현황 ...23
• 제3절 본 기술의 우수성 ...24
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ...26
• 제1절 추출물의 품질관리 및 성분분석 ...26
• 제2절 추출물의 유효성분 선별검사와 전립선 및 요도 평활근 수축의 생리학적 특성 연구 ...31
• 제3절 개발대상 약제 (ADP)의 항염증 작용 ...38
• 제4절 전립선세포의 전기생리학적 특성 및 약제의 작용기전연구 ...40
• 제5절 추출물의 안전성 확인 및 대량생산 공정 확립 ...48
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ...52
• 제1절 연도별 연구개발목표의 달성도 ...52
• 제2절 관련분야에의 기여도 ...55
• 제5장 연구개발결과의 활용계획 ...56
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ...60
• 제7장 참고문헌 ...62