[보고서]형질전환 기법을 이용한 자연발증적 돌연변이 생쥐(Circling mouse) 원인유 전자(cir)의 표현형 회복

류재웅

보고서 정보

주관연구기관

경북대학교 산학협력단

연구책임자

류재웅

보고서유형

최종보고서

발행국가

대한민국

언어

한국어

발행년월

2010-04

과제시작연도

2007

주관부처

과학기술부

사업 관리 기관

한국과학재단
Korea Science and Engineering Foundtion

등록번호

TRKO201000014533

과제고유번호

1355050246

사업명

특정기초연구지원사업

DB 구축일자

2013-04-18

키워드

자연발증적 돌연변이.돌연변이 생쥐.형질전환 기법.원인유전자.표현형 회복.귀머거리 생쥐.spontaneous mutant.mutant mouse.transgenesis.causative gene.phenotypic rescue.deaf mouse.

표 circling 마우스의 모습과 가계도. circling 마우스는 생후 7일경부터 회전운동을 보이며, 가계도 분석결과 autosomal recessive mode (상염색체 열성)로 유전됨을 확인함.
표 정상마우스와 변이마우스의 뇌간 유발반응. 변이마우스의 경우 (d) 정상마우스 (a-c) 와는 달리 100dB의 자극에도 뇌간유발반응이 없음.
표 전자현미경으로 본 정상마우스 (A, C, E, G)와 circling 마우스(B, D, F, H)의 유모세포 형태. 정상마우스의 외유모세포는 U자 모양의 입체섬모의 배열이 일정하지만 circling 마우스에서는 이러한 조직이 퇴화되어 비정상적인 모습을 보임. Ultrastructure of sensory hair cells of circling and norrmal mice. (A) Outer hair cell of normal mouse exhibited well-organized, (B) OHCs of cir/cir mouse exhibited abnormal "u" shaped stereocillia, (C) Larger scale of OHCs of +/+ and (D) cir/cir, (E) Stereocilla from IHC (Inner hair cell) showed typical bundle characteristics, still have kinocillium which is developmentally normal at this age in +/+ and (F) cir/cir, (G) Stereocilla from IHC postnatal day 18 of +/+ and (H) cir/cir. The white arrows indicate kinocillium, bidirectional white arrow indi cated width of outer hair-cell Scale bars = 20 ㎛ (A and B), 2 ㎛ (C~H).
표 생후 18일(A-D)과 36일(E-H)의 각 유전형의 organ of Corti의 면역염색으로 본 형태. 정상마우스(A, E)에 비해 sr/sr, cir/sr, cir/cir 의 마우스가 시간이 지남에 따라 hair cell이 점차적으로 퇴화하고 있음을 보여줌.
표 circling 마우스의 원인 유전자의 위치를 찾기 위한 haplotyping. cir gene 주위에 존재하는 마커들과의 연관분석을 통해 cir gene이 D9MIT116과 38사이에 존재함을 확인함. Segregation of cir and the flanking markers D9Mit182, D9Mit51, D9Mit79, D9Mit310, D9Mit212, D9Mit184, D9Mit116, D9Mit38, D9Mit20, D9Mit245, D9Mit16, D9Mit55, D9Mit125, and D9Mit281 in the progeny of an intraspecific backcross; (cir ×C57BL/6J)F1 ×cir. Each column represents the chromosome identified in the backcross progeny. The filled boxes represent cir alleles, and open boxes represent the C57BL/6J alleles.
표 Various polymorphic markers existed near D9Mit182 on chromosome 9. Each marker was used ICR and C57BL/6J for detecting polymorphism in ICR and C57BL/6J (I: ICR; C:C67BL/6J).
표 마우스 9번 염색체의 proximal region의 연관지도.
표 circling mouse의 염색체상의 결손 부위 확인. circling mouse는 tmie와 mRn49018을 포함한 40 kb의 결손을 가지며 breakpoint의 서열은 GGGCC로 이뤄져있음. Confirmation of the genomic deletion and identification of deletion breakpoints. (A) Deletion analysis by genomic PCR around the tmie gene (Mm87012). (B) Diagram of the deleted region in the circling and spinner mice. The positions of the primers used in (C) were indicated (arrow head). (C) Confirmation of deleted part using primer pairs designed from sequence flanking the breakpoint. (Forward; 5'-GAT TCC TGT GAG CCC CAG CAC CA-3', Reverse; 5'-CAA CAT GGT AGA GAC CTG GAA G-3') Only the homozygote and heterozygote of the circling mouse have the deletion breakpoint template. (D) Sequence of deletion breakpoint part in cir/cir mice. (gray box).
표 Construction of tmie transgene. (A) Diagram of the deleted region in the circling mouse. (B) The exon structure of tmie is indicated, with 459 bp open reading frame denoted by gray box. (C) Transgenic construct for overexpression of tmie gene.
표 Microinjection of constructed tmie gene into the pronuclei of embryo.
표 Efficiency of transgenic mice production.
표 Tmie transgenic founder mice were identified by genomic PCR. PCR was performed for tail genomic DNA. The primers were indicated in Figure 1C(c-c'). The lanes were as follows: P, positive control (amplified from the injection DNA); N, negative control (normal mouse genomic DNA); 1-44, numbers of individual mouse. Positive control corresponds to 527 bp. Two founder mice were identified (#11 and #15).
표 Genotyping of the mice. (A) Cir allele was amplified with primers flanking deletion region (Figure 2A; a-a'). The PCR product is 406 bp. (B) Inside exon 1 of tmie was amplified for existence of wild type allele (+) (Figure 2B; b-b'). Amplified products corresponds to 564 bp.
표 Breeding strategy.
표 Genotyping of N2 mice and all the mice were transgenic.
표 Myo7a promoter-directed tmie transgenesis construct.
표 Myo7a promoter in pGEM-T easy vector in both directions.
표 Construction of tmie transgene, breeding strategy and genotyping of the N2 mice. (A) Diagram of the deleted region in the circling mouse. (B) The exon structure of tmie is indicated, with 459 bp open reading frame denoted by gray box. (C) Transgenic construct for overexpression of tmie gene. (D) Breeding strategy. (E) cir allele was amplified with primers flanking deletion region (a-a'). The PCR product is 406 bp. (F) Inside exon 1 of tmie was amplified for existence of wild type allele (+) (b-b'). Amplified products corresponds to 564 bp. (G) tmie transgenic mice were identified by genomic PCR (c-c'). The lanes were as follows: P, positive control (amplified from the injection DNA); N, negative control (normal mouse genomic DNA); tg, transgenic mouse; Ntg, non-transgenic mouse. Positive control corresponds to 527 bp.
표 Clinical observation and weight gains of the male wild type, cir/cir, cir/cir-tgA, and cir/cir-tgB (N=6). Circling (A) and rearing behavior (B) were counted for 5 min. Wild type and rescued cir/cir-tgA groups showed higher body weight at different time intervals as compared to cir/cir and imcompletely rescued cir/cir-tgB (C). WT, wild type; cir/cir-tgA, cir/cir-transgenic mice with almost the same phenotypes; cir/cir-tgB, cir/cir-transgenic mice with no ameliorations in the phenotypes.
표 Different behavior and hearing recovery levels in the circling mouse carrying transgene.
표 ABR responses in +/cir, cir/cir, and cir/cir-transgenic mice group I, II and V. (A) Average ABR thresholds in decibels referenced to sound pressure level (dB SPL) are plotted against frequency. Frequencies tested were 4, 8, 16, and 32 kHz. Hearing threshold with no response to at given stimuli was referred to 100 dB SPL. Standard errors of the mean ranges are plotted for each data point. Group differences that were statistically significant are indicated by asterisks (P < 0.05). (B) Representative recordings from 8 kHz stimuli at multiple intensities are shown. The thresholds of wild type and group I mice were 20 and 30 dB SPL, respectively; no waveforms were obtained at any given stimuli.
표 tmie expression analysis in the cochlea by Western blotting. (A) Western blot analysis is the +/cir, cir/cir, and some of the cir/cir-tg mice. Lane 1-4: mice in group I; lane 5-6: mice in group II; lane 7-9: mice in group V. The antibody demonstrates a single immunoreactive band of 17 kDa. β-actin was used as the internal control. (B) Densitometry data presented in band intensity relative to wild type control following normalization to actin. The intensity of the bands for tmie westernblot was quantitated using Image J program.
표 Endogenous or transgenic tmie expression in the inner ears of the adult wild type (A), cir/cir (B), cir/cir-tgA (C), and cir/cir-tgB (D). The surroundings of organ of Corti were immunostained with anti-tmie antibodies (green). Nuclei are visualized with DAPI (blue). Right images are the merged images from the left (DAPI) and center (anti-tmie). tmie protein in the wild type and cir/cir-tgA cochlea was detected in spiral limbus, basilar membrane and spiral ligament (A and C). tmie protein was not observed in cir/cir mouse inner ear (B). The organ of Corti of cir/cir-tgB was also slightly immunostained in the spiral ligament but the intensity was very low compared with wild type and cir/cir-tgA (D).
표 Analysis of cellularity in the spiral ganglion neurons (SGNs) in the cochleas of the adult wild type (A), cir/cir (B), cir/cir-tgA (C) and cir/cir-tgB (D). The SGNs were immunostained with anti-neurofilament 200 (NF200) antibodies (green). Nuclei are visualized with DAPI (blue). Right images are merged images from the left (DAPI) and center (anti-NF200). Reduced SGN cellularity and the neurite formation were shown in the homozygous cir/cir mouse compared with the wild type. The cir/cir-tgA mice showed the recovery in the SGN cellularity and the formation of neurites (C) whereas cir/cir-tgB mice did not exhibit the recovered morphology in the cochlea (D).
표 Surface preparation of the wild-type (WT) (A), cir/cir (B), cir/cir-tgA (C), and cir/cir-tgB (D) organs of Corti. Tissue was obtained from the basal turn of the cochlea, stained with TRITC-Phalloidin (red) to label F-actin in the stereocilia. Note that the cir/cir and cir/cir-tgB mice hair cells were missing (B and D) and cir/cir-tgA mice show recovery in the hair cells in the cochlea (C).
표 Hair cells from the vestibular systems in the +/cir and cir/cir mouse. Tissues in three parts of vestibular systems were stained with TRITC-Phalloidin (red) to label F-actin in the stereocilia. Am, ampula; Sa, saccule; Ut, utricle.
표 Neurons in vestibular systems of +/cir and cir/cir mouse. Neurons in three parts of vestibular systems were immunostained with anti-neurofilament 200 (NF200) antibodies (green). Nuclei are visualized with DAPI (blue). Right images are the merged images from the left (DAPI) and center (anti-NF200). Reduced neuron cellularity and the neurite formation were shown in the homozygous cir/cir mouse compared with the wild type. Am, ampula; Sa, saccule; Ut, utricle.
표 CV염색 시상단면.
표 CV 소뇌 lobule 관상단면 (I, VI 및 X번 소엽).
표 CV염색 뇌줄기 Vestibular nucleus 관상단면(LVe: lat. vestibular nucleus, MVe: med. vestibular nucleus, MVeMC: med. vestibular magnocellular nucleus, MVePC: Med. vestibular parvocellular nucleus, SpVe: spinal vestibular nucleus, SuVe: sup. vestivular nucleus).
표 H-E염색 시상단면.
표 H-E 염색, 소뇌 lobule 관상단면 (I, VI 및 X번 소엽).
표 Calbindin D-28k 면역염색 시상단면.
표 소뇌 lobule 관상단면 (I, VI 및 X번 소엽) Calbindin D-28k 면역염색사진.
표 Parvalbumin 면역염색 시상단면.
표 소뇌 lobule 관상단면 (I, VI 및 X번 소엽) Parvalbumin 면역염색사진.
표 Zebrin II 면역염색 시상단면.
표 소뇌 lobule 관상단면 (I, VI 및 X번 소엽) Zebrin II 면역염색사진.

내보내기 메뉴

내보내기 구분

파일저장
인쇄
메일전송

구성항목

기본정보
상세정보

관리번호, 제목(한글), 저자명(한글), 발행일자, 전자원문, 초록(한글), 초록(영문)

저장형식

Text(ASCII format)
Excel format

메일정보

받는사람 (필수): @
보내는사람 (선택): @
제목
내용: KISTI 검색결과 이메일 서비스

안내

총 건의 자료가 검색되었습니다.

다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000)

검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다.

데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요)

다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다.
파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오.

Text(ASCII format)
Excel format

AI-Helper ※ AI-Helper는 을 사용합니다.

AI-Helper

안녕하세요, AI-Helper입니다. 좌측 "선택된 텍스트"에서 텍스트를 선택하여 요약, 번역, 용어설명을 실행하세요.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.

과제명(ProjectTitle) :	-
연구책임자(Manager) :	-
과제기간(DetailSeriesProject) :	-
총연구비 (DetailSeriesProject) :	-
키워드(keyword) :	-
과제수행기간(LeadAgency) :	-
연구목표(Goal) :	-
연구내용(Abstract) :	-
기대효과(Effect) :	-

연합인증

형질전환 기법을 이용한 자연발증적 돌연변이 생쥐(Circling mouse) 원인유 전자(cir)의 표현형 회복
Phenotypic rescue against cir gene of spontaneous mutation circling mouse using transgenic method 원문보기

초록

Abstract ▼

목차 Contents

표/그림 (38)

표/그림 (38)

참고문헌 (25)

연구과제 타임라인

관련 콘텐츠

원문 보기

AI-Helper ※ AI-Helper는 오픈소스 모델을 사용합니다.

선택된 텍스트

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 제목(한글), 저자명(한글), 발행일자, 전자원문, 초록(한글), 초록(영문) 관리번호, 제목(한글), 제목(영문), 저자명(한글), 저자명(영문), 주관연구기관(한글), 주관연구기관(영문), 발행일자, 총페이지수, 주관부처명, 과제시작일, 보고서번호, 과제종료일, 주제분류, 키워드(한글), 전자원문, 키워드(영문), 입수제어번호, 초록(한글), 초록(영문), 목차
저장형식	Text(ASCII format) Excel format
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증

형질전환 기법을 이용한 자연발증적 돌연변이 생쥐(Circling mouse) 원인유 전자(cir)의 표현형 회복 Phenotypic rescue against cir gene of spontaneous mutation circling mouse using transgenic method 원문보기

초록

Abstract ▼

목차 Contents

표/그림 (38) 모든 표/그림 보기

표/그림 (38) 슬라이드로 보기

참고문헌 (25)

연구과제 타임라인

전체(0) 논문(0) 특허(0) 보고서(0)

전체(0) 논문(0) 특허(0) 보고서(0)

관련 콘텐츠

원문 보기

AI-Helper ※ AI-Helper는 오픈소스 모델을 사용합니다.

선택된 텍스트

형질전환 기법을 이용한 자연발증적 돌연변이 생쥐(Circling mouse) 원인유 전자(cir)의 표현형 회복
Phenotypic rescue against cir gene of spontaneous mutation circling mouse using transgenic method 원문보기

표/그림 (38)

표/그림 (38)