보고서 정보
주관연구기관 |
충남대학교 Chungnam National University |
연구책임자 |
배기환
|
참여연구자 |
김홍진
,
진전성
,
이익수
,
잔민넉
,
도티하
,
임남희
,
박경래
,
김영호
,
강종성
,
딩얀
,
오은기
,
박상혁
,
윈후퉁
,
박순혜
,
뉘에수언뉘
,
이규선
,
정명수
,
진윤서
|
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
|
발행년월 | 2008-11 |
과제시작연도 |
2008 |
주관부처 |
식품의약품안전청 |
과제관리전문기관 |
식품의약품안전청 |
등록번호 |
TRKO201000014882 |
과제고유번호 |
1475003899 |
사업명 |
의약품등안전관리 |
DB 구축일자 |
2013-04-18
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키워드 |
계지.목단피.생리활성 성분 분리.밸리데이션.패턴인식.Ramulus Cinnamomi.Moutan Cortex Radicis.Isolation of bioactive components.Validation.Pattern Analysis.
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초록
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계지와 목단피의 에탄올 추출물을 통상적인 방법으로 용매분획하고 각각의 분획들에 대해 각종 chromatography를 반복 실시하여 계지로부터 5종의 신물질을 포함한 27종의 화합물, 목단피로부터 2종의 신물질을 포함한 27종의 화합물을 분리하였다. 계지로부터는 5종의 신물질인 cassiferaldehyde, cinnacassine, icariside, dihydrocinnacasside, cinnacasside와 22종의 알려진 화합물 cinnamaldehyde, eugenol, 2-methoxycinnamaldehyde, cou
계지와 목단피의 에탄올 추출물을 통상적인 방법으로 용매분획하고 각각의 분획들에 대해 각종 chromatography를 반복 실시하여 계지로부터 5종의 신물질을 포함한 27종의 화합물, 목단피로부터 2종의 신물질을 포함한 27종의 화합물을 분리하였다. 계지로부터는 5종의 신물질인 cassiferaldehyde, cinnacassine, icariside, dihydrocinnacasside, cinnacasside와 22종의 알려진 화합물 cinnamaldehyde, eugenol, 2-methoxycinnamaldehyde, coumarin, $\beta$-sitosterol, 2-hydroxy cinnamaldehyde, cinnamic acid, coniferaldehyde, cinnamic alcohol, 4-hydroxy benzoic acid, syringaldehyde, daucosterol, amygdalactone, eugenol glucopyranoside, o-coumaric acid, rosavin, (+)-lyoniresinol-3a-O-$\beta$-D-glucopyroanosied, (?)-lyoniresinol-3a-O-$\beta$-D-glucopyroanosied, dihydromelilotoside, (+)-lyoniresinol, (?)-lyoniresinol, methyl dihydromelilotoside을 분리하였다. 목단피로부터는 2종의 신물질인 4-O-n-butylpaeniflorin, 5-hydroxy-3-hydroxymethylene-6-methyl-2,3-dihydrobenzofuran와 25종의 알려진 화합물인 paeonol, $\beta$-sitosterol, ursolic acid, betulinic acid, daucosterol, benzoic acid, oleanolic acid, Palbinone, apiopaeonoside, paeonoside, 6-methoxypaeoniflotrigenone, benzoylpaoniflorin, methylgallate, kaempferol, paeoniflorin, $\alpha$?benzoyloxypaeoniflorin, $\beta$?benzoyloxypaeoniflorin, galloylpaeoniflorin, (+)-catechin, gallic acid, peaonolide, paeoniflorigenone, 30-norhederagenin, oxypaenifloria, and mudanpinoside H을 분리하였다. 분리한 화합물들의 구조는 각종 분광학적 방법과 문헌과의 비교를 통하여 결정하였다.
계지로부터는 coumarin, 2-hydroxycinnamaldehyde, cinnamyl alcohol, cinnamic acid, cinnamaldehyde, 2-methoxy cinnamaldehyde, eugenol 등의 7개의 화합물과 목단피로부터는 paeonol, paeoniflorin, benzoyl paeoniflorin 등의 3종의 화합물을 지표물질로 설정하고 이들 화합물의 동시분석을 HPLC 방법을 이용하여 수행하였다. 계지의 최적추출조건은 70% MeOH로 결정하였고, 추출방법은 sonication 방법, 추출시간은 60분으로 하였다. 목단피의 최적추출조건은 70% EtOH로 결정하였고, 추출방법은 sonication 방법, 추출시간은 60분으로 하였다. 계지 및 목단피 성분의 동시분석을 위하여 최적 HPLC 조건을 설정하였으며, HPLC 조건은 정확성, 정밀도, 회수율, 검출한계, 완건성 등을 조사하여 validation 을 수행하여 설정하였다. 또한 설정된 지표성분은 실온과 냉장보관으로 안정성을 검토하였으며, 계지와 목단피의 지표성분은 15일 이상 동안 유의성 있는 함량변화를 나타내지 않았다. 설정된 HPLC 조건으로 시중에 유통되고 있는 각각의 생약 20여종 이상을 수집하여 생리활성 성분의 분석을 실시하여 주요 생리활성 성분의 함량을 조사하였으며, HPLC로 얻어진 함량 등은 패턴인식법에 의하여 기원별 산지별 분석을 실시하였다. 계지의 기원별 산지별 분석에서는 계지, 계피 시료 7개의 성분에 대해서 지역별 차이보다는 품목별 차이가 더 컸으며, 계지, 계피에 있어 산지의 차이가 거의 없다는 것이 파악되었고, 목단피의 경우는 사업단에서 제공한 표준품 7개(S10-S16)에 대해 다변량기각검정법, 유사도비교, 군집분석 등의 다양한 기법을 이용하여 평가한 결과 목단피의 국산, 중국산의 분류는 통계적으로 큰 의미가 없는 것으로 판단되었다. 패턴인식법에 의한 계지와 계피의 성분 평가 결과 coumarin, 2-hydroxyl cinnamaldehyde, cinnamyl alcohol, cinnamic acid, cinnamaldehyde, 2-methoxy cinnamaldehyde 및 eugenol의 함량은 상당히 넓은 범위에 퍼져 있는 것을 확인할 수 있었는데, 계지에서는 cinnamic acid, 2-methoxy cinnamaldehyde, eugenol의 함량이, 계피에서는 coumarin, 2-hydroxyl cinnamaldehyde, cinnamyl alcohol, cinnamaldehyde의 함량이 높은 것으로 나타났다. 작약, 목단피의 평가에서는 작약의 경우는 paeoniflorin의 함량이 가장 높고, paeonol의 경우는 목단피에 비하여 상대적으로 낮은 것을 알 수 있었다. 시료의 DNA 감별결과에 따른 패턴분석에서는 제공된 22개의 계지시료의 감별결과 C. cassia가 2개, C, sieboldii가 20로 나타났고, 목단피의 경우는 제공된 20개의 시료 중 16개 시료는 모두 기원이 확인된 목단과 100% 일치하여 목단의 약재로 확인되었으며, 4개 시료는 2-8bp 차이를 나타내어 98-99%의 유사성을 보였다.
Abstract
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Twenty seven bioactive compounds were isolated from the ethanol extract of twig of C.cassia, including one new cinnamaldehyde: cassiferaldehyde, one new amino phenol, cinnacassine and two new phenyl ethyl glycosides: icariside DC and dihydrocinnacasside, and one diterpene glycoside: cinnacasside A,
Twenty seven bioactive compounds were isolated from the ethanol extract of twig of C.cassia, including one new cinnamaldehyde: cassiferaldehyde, one new amino phenol, cinnacassine and two new phenyl ethyl glycosides: icariside DC and dihydrocinnacasside, and one diterpene glycoside: cinnacasside A, together with twenty two known compounds such as cinnamaldehyde, eugenol, 2-methoxycinnamaldehyde, coumarin, $\beta$-sitosterol, 2-hydroxy cinnamaldehyde, cinnamic acid, coniferaldehyde, cinnamic alcohol, 4-hydroxy benzoic acid, syringaldehyde, daucosterol, amygdalactone, eugenol glucopyranoside, o-coumaric acid, rosavin, (+)-lyoniresinol-3a-O-$\beta$-D-glucopyroanosied, (?)-lyoniresinol-3a-O-$\beta$-D-glucopyroanosied, dihydromelilotoside, (+)-lyoniresinol, (?)-lyoniresinol, and methyl dihydromelilotoside. Twenty seven compounds were isolated from the ethanol extract of root bark of P. suffruticosa comprise two new ones: 4-O-n-butylpaeniflorin, 5-hydroxy-3-hydroxymethylene-6-methyl-2,3-dihydrobenzofuran, together with twenty five known compounds such as paeonol, $\beta$-sitosterol, ursolic acid, betulinic acid, daucosterol, benzoic acid, oleanolic acid, Palbinone, apiopaeonoside, paeonoside, 6-methoxypaeoniflotrigenone, benzoylpaoniflorin, methylgallate, kaempferol, paeoniflorin, $\alpha$?benzoyloxypaeoniflorin, $\beta$?benzoyloxypaeoniflorin, galloylpaeoniflorin, (+)-catechin, gallic acid, peaonolide, paeoniflorigenone, 30-norhederagenin, oxypaenifloria, and mudanpinoside H. Their structures were elucidated from physicochemical data and in comparison with those of literatures.
A HPLC method was developed for quality assessment of Ramulus Cinnamomi and Moutan Cortex Radicis through determination of key pharmacological compounds. Key pharmacological compounds of Ramulus Cinnamomi were determined 7 compounds such as coumarin, 2-hydroxycinnamaldehyde, cinnamyl alcohol, cinnamic acid, cinnamaldehyde, 2-methoxy cinnamaldehyde, eugenol, and key pharmacological compounds of Moutan Cortex Radicis were determined 3 compounds such as paeonol, paeoniflorin, benzoyl paeoniflorin. The chromatographic fingerprints were developed and validated by analyzing several samples of Moutan Cortex Radicis and Ramulus Cinnamomi from different markets in Korea China and Vietnam. The key pharmacological compounds were determined by their characteristic UV profile and the information of molecular structure provided by LC/MS method. The linearity, precisions of intra-day and inter-day, recoveries, were measured using validation method. HPLC fingerprint analysis, principle component analysis (PCA), and cluster analysis were analyzed for quality assessment. Thin layer chromatography (TLC) comparisons were made using reversed-phase plate and normal-phase plate.
목차 Contents
- 연구과제제안서(RFP) ...1
- 제출문 ...3
- 목차 ...4
- I. 연구개발결과 요약문 ...6
- 최종보고서 요약문 ...6
- Summary ...8
- II. 총괄연구개발과제 연구결과 ...10
- 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...10
- 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법 ...14
- 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ...17
- 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...22
- 제5장 총괄연구개발과제의 연구성과 ...24
- 제6장 기타 주요변경사항 ...26
- 제7장 참고문헌 ...27
- 제8장 첨부서류 ...32
- III. 제1 세부연구개발과제 연구결과 ...33
- 제1장 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...34
- 제2장 세부연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법 ...37
- 제3장 세부연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ...110
- 제4장 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...112
- 제5장 제1 세부연구개발과제의 연구성과 ...113
- 제6장 기타 주요변경사항 ...114
- 제7장 참고문헌 ...115
- 제8장 첨부서류 ...119
- IV. 제2 세부연구개발과제 연구결과 ...120
- 제1장 2세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...121
- 제2장 세부연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법 ...123
- 제3장 세부연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ...129
- 제4장 세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...214
- 제5장 제2 세부연구개발과제의 연구성과 ...219
- 제6장 기타 주요변경사항 ...221
- 제7장 참고문헌 ...222
- 제8장 첨부서류 ...223
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