초록 ▼

[1] 13주 반복독성시험
스테비오사이드에 대한 독성을 평가하고자, B6C3F1 mice 암·수 각각 10수에 0, 1.25, 2.5, 5%의 혼합비로 13주간 사료에 혼합하여 투여하였다.
5% 혼합사료를 7일간 반복투여 시험을 실시한 결과, 스테비오사이드에 의한 사망례, 일반증상, 체중변화 및 부검시 육안소견이 관찰되지 않았다. 7일간 반복투여 독성시험결과를 토대로 0.31, 0.62, 1.25, 2.5 및 5% 혼합비로 제조된 시험물질 혼합사료로 14일 반복투여 용량결정시험을 실시한 결과, 암·수 시험물질투여군에서 체

[1] 13주 반복독성시험
스테비오사이드에 대한 독성을 평가하고자, B6C3F1 mice 암·수 각각 10수에 0, 1.25, 2.5, 5%의 혼합비로 13주간 사료에 혼합하여 투여하였다.
5% 혼합사료를 7일간 반복투여 시험을 실시한 결과, 스테비오사이드에 의한 사망례, 일반증상, 체중변화 및 부검시 육안소견이 관찰되지 않았다. 7일간 반복투여 독성시험결과를 토대로 0.31, 0.62, 1.25, 2.5 및 5% 혼합비로 제조된 시험물질 혼합사료로 14일 반복투여 용량결정시험을 실시한 결과, 암·수 시험물질투여군에서 체중변화는 관찰되지 않았으며 시험물질투여에 의한 독성 증상이 관찰되지 않았다, 그리고, 소핵시험결과 모든 시험물질 투여군은 소핵유발 빈도에 있어서 음성대조군과 비교시 유의성 있는 차이는 보이지 않았다. 세포독성의 지표인 PCE/(PCE+NCE)의 비율은 모든 시험물질 투여군에서 음성대조군과 비교시 시험물질에 의한 유의성이 관찰되지 않았다. 13주간 반복투여 독성시험의 최고 혼합비는 5%로하고 공비 0.5를 적용하여 2.5, 1.25%의 혼합비를 설정하였다.
13주간 반복투여 독성시험의 투여기간동안 일반증상, 체중, 사료섭취량, 뇨검사, 혈액학적 및 혈액 생화학적 검사를 수행하였다. 부검시 체내외 장기 조직에 대하여 육안적 관찰 및 장기무게를 측정하였고, 주요장기에 대해 조직병리학적 검사를 수행하였다.
관찰기간동안 스테비오사이드에 의한 사망례와 일반증상은 관찰되지 않았다.
관찰기간동안 수컷 전 투여군에서 시험물질투여에 기인한 것으로 사료되는 체중증가억제가 관찰되었다. 암컷 고용량군(5%)에서 시험물질투여에 기인한 것으로 사료되는 체중증가 억제가 관찰되었다.
뇨 화학적 검사 결과 시험물질에 의한 영향은 관찰되지 않았다.
장기중량 측정 결과, 수컷에서 간과 신장 중량의 감소가 관찰되었는데 이는 체중감소에 의한 것으로 조직병리학적 검사 결과 특이 소견이 관찰되지 않았다.

부검결과, 암수 시험물질투여군에서 시험물질투여에 기인한 영향은 관찰되지 않았다.
조직병리학적 검사 결과, 시험물질 투여군에서 시험물질에 기인하였다고 사료되는 특이한 소견은 관찰되지 않았다.
이상과 같이, 스테비오사이드에 대한 13주 사료혼이 투여 독성시험을 실시한 결과, 수컷의 경우 전 투여군에서 체중증가 억제에 대한 스테비오사이드의 영향이 인정된다. 암컷의 경우 5% 투여군에서 체중증가 억제에 대한 스테비오사이드의 영향이 인정된다.
따라서, 스테비오사이드의 마우스를 이용한 13주 사료혼이 투여 독성시험의 NOEL(무영 향량)은 암컷의 경우 2.5%로 사료된다.
[2] 독성동태시험
스테비오사이드에 대한 독성동태파라메타를 구하고자, B6C3F1 mice 암·수에 0, 1.25, 2.5, 5%의 혼합비로 13주간 사료에 혼합하여 투여하였다.
13주간 경구 반복투여 독성동태시험에서 분석대상이 될 생체검체 및 물질을 결정하고자 시험물질 투여 후 혈장에서의 스테비오사이드와 스테비오사이드의 대사과정에서 발생하는 스테비올의 농도를 확인하는 시험을 실시했다. 그 결과 마우스의 혈장에서 스테비오사이드가 소량 검출되었고 스테비올은 거의 검출되지 않았다. 따라서 13주 반복투여 독성동태시험에서 스테비오사이드 섭취 후 혈장내의 스테비오사이드농도변화를 관찰하는 것으로 스테비오사이드의 생체내 동태를 확인하는데 충분하다고 사료되었다.
13주간 반복투여 독성동태시험의 투여기간동안 투여 개시 후 1, 4, 13주째 얻은 혈장에 포함된 스테비오사이드의 농도를 측정한 후 동태학적 파라미터를 구하여 생체내 약물동태를 평가하고자 하였다.
스테비오사이드 200 mg/10mL/kg를 마우스의 미정맥에 투여한 경우 약 287.32 hr*㎍/mL의 $AUC_{0-24h}$ 의 값을 얻을 수 있었다. 이 때 Cmax(최고 농도)는 468.94 ㎍/mL이고, Tmax(최고 농도 시간)는 1 min, t1/2(반감기)는 180.61 min로 측정되었다. 투여 후 1440분(24시간) 째에는 혈장에서 스테비오사이드가 검출되지 않았다.
스테비오사이드 200 mg/10mL/kg를 투여 후 120분 째까지의 분변에서 낮은 농도로 검출되었다가 240분 째에서 그 농도가 증가하였다(8.962, 4643.862, 11424.090 ㎍/mL). 투여 후 1440분(24시간) 째에는 분변에서 스테비오사이드가 검출되지 않았다.
13주 반복투여 시 각 채혈시점에서 Cmax를 살펴보면 Day 0, 수컷 저용량(1.25%)투여군을 제외한 모든 투여군에서 투여 용량과 대비하여 용량의존적으로 비례하여 증가하였다. 또한, 수컷과 암컷의 Cmax가 비슷하게 나타났다(Week 13 제외).
이 결과로 보아 스테비오사이드는 투여용량에 비례하여 증가하였으며, 반복투여에 의한 혈중 축적현상은 보이지 않는 것으로 판단된다. 수컷과 암컷의 비교에서는 혈중 스테비오사이드의 농도 경향이 비슷하게 나타나, 수컷과 암컷은 시험물질의 흡수의 차이가 없는 것으로 사료된다.

Abstract ▼

[1] 13 weeks oral repeated dose toxicity study of Stevioside in mice
In this GLP study, 4 main study groups of B6C3F1 mice 10 /sex were given 0, 1.25, 2.5 and 5% stevioside for 13 weeks.
In the 7-day dose toxicity study, all animals in 5% feeding group survived to the scheduled termination. Co

[1] 13 weeks oral repeated dose toxicity study of Stevioside in mice
In this GLP study, 4 main study groups of B6C3F1 mice 10 /sex were given 0, 1.25, 2.5 and 5% stevioside for 13 weeks.
In the 7-day dose toxicity study, all animals in 5% feeding group survived to the scheduled termination. Consequently, in the 14-day dose range finding study, 0, 0.31, 0.63, 1.25, 2.5 and 5% of the test substance was administered to male and female mice for 2 weeks. As for micronucleated test, there was no significant difference in appearance rate of micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCEs) in polychromatic erythrocytes (PCEs) between treatment and control groups. In addition, PCE/(PCE+NCE) ratio did not show any sign of cytotoxicity. According to the results, the highest dose of 13 weeks repeated dose toxicity was established as 5% mixing ratio and low and intermediate dose levels were established by common ratio 2 as 1.25 and 2.5 %, respectively.

목차 Contents

• 용역연구사업 연구결과보고서 ...1
• 제출문 ...2
• 연구사업 최종보고서 요약문...3
• Project Summary...5
• 제목 ...7
• 목차 ...7
• 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ...8
• 1.1 총괄연구개발과제의 목표 ...8
• 1.2 총괄연구개발과제의 목표달성도 ...10
• 1.3 국내.외 기술개발 현황 ...11
• 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법 ...13
• 1절 연구방법 ...13
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ...37
• 가. 시험물질 혼합사료의 반복투여 예비시험 - 기호도 확인 (예비시험 1) ...37
• 나. 14일 반복투여 용량결정시험 (예비시험 2) ...37
• 다. 13주간 반복투여 독성시험 (본시험) ...38
• 라. 독성동태시험의 예비시험 (예비시험 3) ...40
• 마. 독성동태시험의 예비시험 ...41
• 바. 스테비오사이드의 독성동태시험(본시험군) ...42
• 사. 단회투여 독성시험의 Figure, Table 및 Appendix ...44
• 아. 14일 반복투여 용량결정시험의 Figure, Table 및 Appendix ...51
• 자. 13주 반복투여 독성시험 Figure, Table 및 Appendix ...82
• 차. 독성동태시험의 예비시험 1.의 Figure, Table ...156
• 카. 독성동태시험의 예비시험 2.의 Figure, Table ...184
• 타. 독성동태시험의 Figure, Table 및 Appendix ...201
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ...217
• 가. 반복 투여 예비 시험기호도 - 확인 ...217
• 나. 14일 반복투여 용량결정시험 ...217
• 다. 13주 경구 반복투여 독성시험 ...218
• 라. 독성동태시험의 예비시험(예비시험3) ...219
• 마. 독성동태시험의 예비시험(예비시험4) ...220
• 바. 13주 경구 반복투여 독성동태시험 ...220
• 제5장 총괄연구개발과제의 연구성과 ...221
• 5.1 활용성과 ...221
• 5.2 활용계획 ...222
• 제6장 기타 중요변경사항 ...223
• 제7장 참고문헌 ...224
• 제8장 첨부서류 ...226
• 최종보고서 ...258
• 총괄 연구과제 요약...279