초록 ▼

$\bullet$ MMTV/c-Neu 형질 전환 생쥐 모델을 이용한 항암제 스크리닝 활용 적합성 연구
MMTV/c-Neu 형질 전환 생쥐에 신규 항암제 후보물질인 IN2001과 SAHA (히스톤 탈아세틸화 저해제)를 투여한 뒤, 항암 효과를 살펴본 결과 IN2001 15 mg/kg 투여군과 SAHA 120 mg/kg 투여군에서 현저하게 암 무게가 감소하는 결과를 보였다. 이와 더불어 병리 조직 검사 결과, IN2001 투여군과 SAHA 투여군의 암 조직에서 apoptosis가 유의적으로 증가하는 경향을 보였

$\bullet$ MMTV/c-Neu 형질 전환 생쥐 모델을 이용한 항암제 스크리닝 활용 적합성 연구
MMTV/c-Neu 형질 전환 생쥐에 신규 항암제 후보물질인 IN2001과 SAHA (히스톤 탈아세틸화 저해제)를 투여한 뒤, 항암 효과를 살펴본 결과 IN2001 15 mg/kg 투여군과 SAHA 120 mg/kg 투여군에서 현저하게 암 무게가 감소하는 결과를 보였다. 이와 더불어 병리 조직 검사 결과, IN2001 투여군과 SAHA 투여군의 암 조직에서 apoptosis가 유의적으로 증가하는 경향을 보였다.
신규 항암 후보 물질인 히스톤 탈아세틸화 효소 저해제의 작용 메카니즘을 알아보기 위해서 암이 발생된 MMTV/c-Neu 형질전환 생쥐에 IN2001을 30 mg/kg 농도로 6, 24, 48 시간 처치하였다. 기존 연구에서 히스톤 탈아세틸화 효소 저해제가 에스트로겐 수용체 음성 유방암 세포에서 에스트로겐 수용체 발현을 유도한다는 보고가 있어서, 암 조직과 자궁 조직에서 에스트로겐 수용체의 발현을 western blot으로 확인하였다. 그 결과, 암 조직 및 자궁 조직에서 IN2001 투여에 의해서 에스트로겐 수용체의 발현이 시간 의존적으로 증가하는 것으로 나타났다.
$\bullet$ MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK 형질 전환 생쥐의 생산 및 유효성 연구
CYP1B1 유전자가 화학물질에 의한 유방암 발생과 밀접한 관계가 있을 것으로 생각되어지고 있어 본 연구에서는 CYP1B1과 관련하여 화학 물질의 발암 관련 민감성을 검사할 수 있는 발암 독성평가모델을 개발하고 그 유효성을 평가하고자 하였다. 선행 연구에서 사람 CYP1B1 유전자를 갖고 있는 CYP1B1/TAK 형질 전환 동물 모델에서 DMBA가 유방암을 유발하는 것을 관찰한 바 있다. 따라서, 사람 CYP1B1 유전자를 갖고 있는 CYP1B1/TAK 형질 전환 생쥐 수컷과 유방암 발암 독성 평가를 위한 동물모델로 사용된 MMTV/c-Neu 형질 전환 생쥐 암컷을 교배하여 MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK 형질 전환 생쥐를 생산?확인한 뒤, 발암 의심 화학물질인 DMBA를 처치하였다. 현재 계속하여 발암여부를 관찰하는 중이다. 또한 MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK 형질 전환 모델을 이용하여 신규 항암 후보 물질인 IN2001 (히스톤 탈아세틸화 저해제)의 효과를 살펴본 결과, MMTV/c-Neu 형질 전환 생쥐 모델에서와 유사하게, 에스트로겐 수용체의 발현이 시간 의존적으로 증가하는 것으로 나타났다.
결론적으로 본 연구를 통해 개발된 사람 유방암 형질 전환 실험동물 모델은 기존의 2년 설치류 시험법을 대체할 수 있는 적절한 발암 독성평가모델로 사료된다.

Abstract ▼

$\bullet$ Application of MMTV/c-Neu transgenic mice
In order to test if MMTV/c-Neu mice could be useful for screening anticancer activity of breast cancer, we tested newly developed anticancer agents, IN2001 and SAHA that are inhibitors of hisone deacetylase. Treatment of IN2001 (15 mg

$\bullet$ Application of MMTV/c-Neu transgenic mice
In order to test if MMTV/c-Neu mice could be useful for screening anticancer activity of breast cancer, we tested newly developed anticancer agents, IN2001 and SAHA that are inhibitors of hisone deacetylase. Treatment of IN2001 (15 mg/kg) and SAHA (120 mg/kg) showed the apparent inhibition of tumor growth and also histoathologic analysis showed an increase in apoptosis of tumor cells. Further, we investigated the effects of IN2001 on the expression of estrogen receptor gene in vivo. 30 mg/kg IN2001 treatment showed increase in gene expression of estrogen receptor in a time dependent manner based on our western blot study.
$\bullet$ Production and Application of MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK triple transgenic mice
Since CYP1B1 is thought to be related to chemical carcinogenesis of breast cancer, we have tried to establish animal model to test sensitivity of chemical carcinogenesis of human breast cancer. In the previous study, we had developed CYP1B1 transgenic mice and found out DMBA cause breast tumor in this animal. Using this CYP1B1 transgenic mice, we made MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK transgenic mice and treated this transgenic mice with DMBA. Now we are making observation over these mice. We also tested the effect of newly synthesized anticancer agent, HDAC inhibitor, IN2001. Like MMTV/c-Neu transgenic mice, estrogen receptor gene expression was increased in a time dependent manner in MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK transgenic mice treated with 30 mg/kg IN2001.
In summary, we have established experimental transgenic animal model to study human breast cancer.

목차 Contents

• 제출문 ...1
• 연구결과보고서 요약문...2
• Project Summary...3
• 목차 ...4
• 제1장 서론 ...6
• 1. 연구 목적 및 필요성 ...6
• 가. 화학물질의 급증 추세와 발암 위해성의 증가 ...6
• 나. 발암 물질의 확인을 위한 설치류 Bioassay 기법의 한계점 ...6
• 다. 유전자 형질전환 생쥐를 이용한 발암물질 평가 기법의 장점 ...6
• 라. 유방암 원인 물질 및 치료제 검색을 위한 형질전환 생쥐 모델 개발 필요성 ...6
• 제2장 국내.외 기술개발 현황 ...8
• 1. 형질 전환된 실험동물 모델을 이용한 발암 독성 평가 ...8
• 2. 유방암 독성평가를 위한 실험동물 모델의 필요성 ...9
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ...11
• 1. 연구내용 및 방법 ...11
• 가. 연구내용 ...11
• (1)MMTV/c-Neu 형질전환 생쥐를 이용한 항암제 스크리닝 활용 적합성 연구 ...11
• (2) MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK Triple Transgenic mouse 생산 및 유효성 연구 ...11
• 나. 연구방법 ...12
• (1) 시험 동물 및 사육환경 ...12
• (2) 시험군의 구성 및 투여량 ...12
• (3) 관찰 및 검사 항목 ...12
• (4) 병리조직학적 검사 ...14
• 2. 연구 결과 ...15
• 가. 사람 유방암 동물 모델로 개발된 MMTV/c-Neu 형질 전환 생쥐의 활용 ...15
• (1) 유방암 억제 작용 ...15
• (2) 작용기전 연구 ...18
• (3) 유방암 유효성 검증을 위한 병리 검사 ...20
• 가. MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK 형질 전환 생쥐 생산 및 활용 ...22
• 나. MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK 형질 전환 생쥐에서 발암 의심 화학물질 투여에 의한 유방암 발생 검색 ...26
• 다. MMTV/c-Neu/CYP1B1/TAK 형질 전환 생쥐 모델의 활용 ...29
• 제4장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도 ...30
• 1. 연구개발 목표 달성도 ...30
• 2. 대외 기여도 ...30
• 가. 기대효과 ...30
• 나. 활용방안 ...31
• 제5장 연구개발결과의 활용성과 및 계획 ...33
• 1. 계량적 성과 ...33
• 2. 성과내용기술 ...33
• 3. 활용계획 ...33
• 제6장 기타 중요변경사항 ...35
• 제7장 참고문헌 ...36
• 별첨 ...38
• 총괄 연구과제 요약...41