초록 ▼

○ 데이터 마이닝에 의한 위암 후보자 위암 후보자유전자 발굴
- 본 연구팀에서 생산한 연구결과 및 NCBI GEO public database에서 위암 후보자유전자 리스트를 확보한 후, 생물정보 분석법을 사용하여 위암 후보유전자를 선별함
- "21C 인간유전자 은행"에서의 검색을 통해 후보유전자에 대한 전장유전자를 (in vitro transcription을 위해 T7/SP6 프로모터 보유 확인) 확보함
○ 후보유전자의 과발현에 의한 제브라피쉬에서의 표현형 분석
- 확보한 전장 클론에서 플라스

○ 데이터 마이닝에 의한 위암 후보자 위암 후보자유전자 발굴
- 본 연구팀에서 생산한 연구결과 및 NCBI GEO public database에서 위암 후보자유전자 리스트를 확보한 후, 생물정보 분석법을 사용하여 위암 후보유전자를 선별함
- "21C 인간유전자 은행"에서의 검색을 통해 후보유전자에 대한 전장유전자를 (in vitro transcription을 위해 T7/SP6 프로모터 보유 확인) 확보함
○ 후보유전자의 과발현에 의한 제브라피쉬에서의 표현형 분석
- 확보한 전장 클론에서 플라스미드 DNA를 분리한 후, in vitro transcription법에 의해 위암 후보유전자에 대한 mRNA를 합성함
- 합성한 mRNA를 제브라피쉬 발생배에 주입 한 후 제브라피쉬 표현형을 변화를 확인함.
○ 후보유전자의 위암 임상조직에서 RNA level 분석
- 제브라피쉬에서 표현형의 변화를 나타낸 타겟유전자의 발현량을 real time RT-PCR법을 사용하여 위암 임상조직에서 분석함
○ 후보유전자의 knock-down에 의한 위암 치료용 후보타겟 발굴
- 위암 조직에서 고발현되는 유전자를 siRNA로 knock-down 시킨 후, cell proliferation, cell cyhcle, metastasis 활성을 조사함
- 제브라피쉬에서 표현형의 변화를 나타내는 유전자 + 위암 임상시료에서 고발현되는 유전자(>30%) + knock-down시 활성의 차이를 나타내는 유전자를 위암 치료용 타겟으로 최종 선별함
○ 1종 위암 신규 타겟 (N-498: ZNF312b)의 기능연구
- real time RT-PCR법/northern blot 분석법을 사용하여 N-498 신규 위암 타겟을 발현량을 위암 임상 조직 및 세포주에서 분석함
- N-498의 knock-down/ 과발혈에 의한 in vitro 활성 (세포 증식능, 클로니 형성능) 및 in vivo 활성 (누드 마우스에서의 종양 형성능)을 조사함
○ 위암 신규 타겟 (N-498: ZNF312b)의 기전연구
- 핵분획법과 면역세포 염색법 (IHC법)에 의한 위암 세포주에서의 N-498의 존재 위치를 확인함
- 구축한 N-498 deletion mutant 및 luciferase report 벡터를 이용하여 K-ras 프로모터에의 N-498 결합 확인 및 결합부위를 확인함
- western blot법을 이용하여 ZNF312b 과별한 또는 siRNA knock-down에 의한 ERK/JNK p38 등의 경로 관련성을 조사함
○ 위암 신규 타겟 (N-498: ZNF312b)의 후성유전학적 조절 기전 연구
- MS-PCR법, Bisulfite Sequencing법, Pyrosequencing에 의해 위암 세포주 및 위암 임상조직에서의 ZNF312b 프로모터 부위의 DNA methylation양을 분석함
- Pearson correlation coefficient를 이용하여 ZNF312b 프로모터 부위의 methylation양과 ZNF312b 발현량과의 상관관계를 분석함
- Chromation immunoprecipitation (ChIP)법을 이용하여 ZNF312b 프로모터 부위의 histone modification (histone acetylation/ methylation) 양상을 분석하고 ZNF312b 발현량과의 상관관계를 분석함
○ 위암 신규 타겟 (N-498: ZNF312b) 표적화 siRNA 도출
- 각종 프로그램 분석에 의해 최적 ZNF312b siRNA 서영을 선정한 후, in vitro 및 in vivo 동물모델에서 siRNA의 효능을 검증하여 ZNF312b 표적화 siRNA을 도출함
○ 위암 신규 타겟 (N-498: ZNF312b) 표적화 hit 도출
- ZNF312b 전사 저해 탐색 시스템을 구축한 후, 확보한 저분자 대표화합물로부터 ZNF312b 전사 저해 화합물을 탐색함. 선별된 화합물의 ID50, ZNF312b 전사 저해량 측정, cyto-toxicity 을 조사하여 ZNF312b 전사를 특이적으로 저해하는 hit을 도출함
- ZNF312b에 의한 K-ras 전사 저해 탐색 시스템을 구축하여 확보한 저분자 화합물로부터 ZNF312b에 의한 K-ras 전사 저해 저분자 화합물을 탐색하여 ZNF312b에 의해 K-ras 전사를 특이적으로 저해하는 hit을 도출함

Abstract ▼

To identify a valuable target genes from candidate genes related to gastric and to discovery a drug for the tailored therapy of gastric cancer, we performed that 1) selection of candidate genes related to gastric cancer from various data, 2) selection of four gastric target genes by analysis via ov

To identify a valuable target genes from candidate genes related to gastric and to discovery a drug for the tailored therapy of gastric cancer, we performed that 1) selection of candidate genes related to gastric cancer from various data, 2) selection of four gastric target genes by analysis via over-expression in zebrafish embryos, examination of expression level in human gastric cancer tissues, and siRNA knock-down of candidate genes, 3) among the three target genes, function and mechanism studies of the one gene, human ZNF312b, 4) regulation mechanism study of the human ZNF312b through epigenetic mechanism, 5) discovery of siRNA or low molecular hit targeting human ZNF312b.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 3
• 보고서 요약서 ... 4
• 요약문 ... 5
• SUMMARY ... 11
• 목 차 ... 16
• 제 1 장 연구개발과제의 개요 ... 17
• 제1절 연구개발의 목적 ... 17
• 제2절 연구개발의 필요성 ... 17
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황 ... 19
• 제1절 국외 기술개발 현황 ... 19
• 제2절 국내 기술개발 현황 ... 19
• 제 3 장 연구개발 수행 내용 및 결과 ... 22
• 제1절 연구개발 수행 내용 및 방법 ... 22
• 제2절 연구개발 수행 결과 ... 26
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 55
• 제1절 연도별 연구목표 및 달성도 ... 55
• 제2절 연구개발 목표의 기여도 ... 57
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획 ... 61
• 제1절 추가연구의 필요성 ... 61
• 제2절 타 연구에의 응용 ... 62
• 제3절 기업화 추진방안을 기술 ... 62
• 제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 63
• 제 7 장 참고문헌 ... 65
• 끝페이지 ... 70