초록 ▼

P. chlororaphis O6균주의 병 저항성 유도 인자 유전자 및 발현에 관련된 신호전달 체계 규명, O6 균주에 의해 유도되는 오이의 병 저항성 유도 유전자의 분석과 형질전환에 의한 병 저항성 유도 검정, 오이 뿌리 분비액의 조성 분석과 뿌리 분비액 이용에 관련된 유전자의 분석에 따라 O6균주의 제제화를 통한 포장 실증 효과 검정을 연구한 본 과제의 세부 내용 및 범위를 요약하면 다음과 같다.
1. 병 저항성 유도 능력이 상실된 rhizobacteria 돌연변이주의 선발 및 특성분석 Tn5를 이용하여 병 저항성을 유도하

P. chlororaphis O6균주의 병 저항성 유도 인자 유전자 및 발현에 관련된 신호전달 체계 규명, O6 균주에 의해 유도되는 오이의 병 저항성 유도 유전자의 분석과 형질전환에 의한 병 저항성 유도 검정, 오이 뿌리 분비액의 조성 분석과 뿌리 분비액 이용에 관련된 유전자의 분석에 따라 O6균주의 제제화를 통한 포장 실증 효과 검정을 연구한 본 과제의 세부 내용 및 범위를 요약하면 다음과 같다.
1. 병 저항성 유도 능력이 상실된 rhizobacteria 돌연변이주의 선발 및 특성분석 Tn5를 이용하여 병 저항성을 유도하지 못하는 P. chlororaphis O6 돌연변이주들을 선발하고 각 돌연변이주들의 Tn5 flanking sequence를 확인하였다. 이들은 크게 3가지 그룹으로 구분이 가능하였다. 첫째로 GacS (global sensor kinase), Lon (Lon protease), 그리고 PPX (exopolyphosphatase) 유전자등 주로 세균에서 여러 유전자를 조절하는 global regulator로 작용하는 유전자가 분리되었다. 두 번째 그룹으로는 여러 transporter (ABC-type transporters, Leucine transportere)와 secretion (translocase and HylD secretion protein) 유전자들이 관련되어 있었고, 3번째로는 주로 기본 대사에 관련된 유전자 (Fumarate hydratase and AIR synthase)들이 속했다. 그러나 어떤 물질을 합성하는 구조 유전자는 선발이 되지 않아, O6 균주의 병 저항성 유도 인자는 한 가지 인자가 관여하지 않고, 여러 인자가 관여하는 것으로 추정되었고, 분리된 유전자들은 앞으로 O6균주의 병 저항성 유도 인자를 연구하는 중요한 근거가 될 것이다.
2. P. chlororaphis O6균주의 phenazine 생합성 유전자의 클로닝 및 기능 분석 O6균이 생산하는 Phenazine 생합성 유전자를 클로닝하고 돌연변이를 시켜 phenazine이 식물병 방제에 직접적으로 관련이 된다는 것을 밝혔으며, phenazine은 세균의 농도가 일정 이상이 되는 late log phase에서 발현되는 것을 밝혔다. 또한 phenazine 생합성 유전자의 발현은 homoserine lactone을 생합성하는 phzI 유전자에 의해 조절되고, phzI는 gacS에 의해 조절되는 것을 확인하였다. PhzI 돌연변이주에서 식물 병저항성 유도 능력이 감소하여 아마도 O6균의 병 저항성 유도 능력은 phzI 산물은 homoserine lactone에 의해서도 조절될 것으로 추정되었다.
3. P. chlororaphis O6의 내병성 유도에 있어서 GacS의 역할과 O6에 의해 유도되는 식물신호전달체계. O6균의 sensor kinase인 GacS가 병 저항성 유도 능력에 관련되어 있는 지를 담배의 무름병과 들불병에 대해 조사해 본 결과, 무름병에 대해서는 병 저항성을 유도하는데 GacS가 필수적이지만, 들불병에 대해서는 GacS에 이 외에 다른 신호전달 체계에 의해 조절되는 것 같다. 또한 O6에 의해 유도되는 식물의 병 저항성 관련 신호전달 체계를 알아본 결과, ethylene에 관련된 신호 전달 체계가 O6에 의해 유도되는 병 저항성 발현에 중요한 신호 전달 쳬계로 작용함을 시사하고 있다.
4. P. chlororaphis O6의 gacS 유전자의 stationary-phase sigma factor인 rpoS조절기작 및 기능 O균의 모든 유용한 형질들 (phenazine을 비롯한 2차 대사산물, 병 저항성 유도 능력)은 항상 O6균의 농도가 일정 이상이 되는 late log phase나 stationary-phase이 되었을 때 발현된다. 본 연구에서 O6균주의 병 저항성 유도에 필수적인 GacS의 발현 또한 stationary-phase에서 가장 높았다. Stationary-phase에서 유도되는 유전자들은 주로 RNA polymerase의 sigma factor인 RpoS에 의해 조절된다. GacS가 RpoS를 조절하여 병 저항성 유도 능력을 조절하는 가능성을 타진하였다. GacS 돌연변이주에서 rpoS 유전자의 발현이 현저히 감소하였고 그 결과로 oxidative stress에 대한 내성이 현저히 감소하였으나, RpoS 돌연변이주는 병 저항성 유도 능력이 wild-type과 비슷하여 rpoS 유전자는 GacS에 의해 조절되지만 O6균주의 병 저항성 유도 능력과는 관련이 없음을 시사하고 있다.
5. O6균주의 생물적 방제 능력을 조절한는 global regulator로서의 GacS와 Lon protease의 역활 P. chlororaphis O6균주에서 late log phase와 stationary phase에서 발현되는 sensor kinase인 GacS와 Lon protease가 O6 균주가 지니고 있는 여러 유용형질들(phenazine 생성, 병 저항성 유도)을 조절하는 그 조절자임을 밝히기 위해 각각의 돌연변이주를 조제하였다. GacS와 Lon protease는 식물병저항성 유도 능력이 상실되었고, 여러 2차 대산 산물의 생산하지 못하여 GacS와 Lon protease병 저항성 유도 능력과 이차대사 산물의 생산을 조절하는 global regulator임을 시사하고 있다.
6. 오이 뿌리 분비액 조성 및 뿌리 분비액 이용에 관련된 O6균주의 유전자 분리 O6균주의 뿌리 정착 능력에 중요한 영양분으로 작용하는 뿌리 분비액 중 탄소원으로 당의 성분보다 유기산의 농도가 10배 이상 높게 나타났다. 또한 오이 뿌리 분비액 이용에 이상이 생긴 돌연변이주들을 분리하여 분석하여 mce (mycobacterial cell entry)유전자와 aminoimidazole ribonucleotide synthase (AIR synthae)가 오이 뿌리 분비액 이용에 관련되었다. 따라서 O6균주가 오이 뿌리 정착을 위해서는 유기산이 이용 능력이 중요한 요인이고, 또한 purine 생합성 능력 등이 중요한 선결 요건임을 시사하고 있다.
7. O6 균주의 유기산 흡수 관련 유전자 dctA의 발현조절 및 기능 분석 오이 뿌리 분비액 중 유기산의 농도가 당의 농도보다 약 10배 이상 높게 나타나, O6균주에서 유기산 흡수에 관련된 dctA 유전자의 발현 양상과 병저항성 유도 능력과의 관련성을 조사하였다. DctA는 여러 유기산의 첨가에 의해 발현이 유도되고, 당의 첨가에 의해서는 발현이 감소되는 유기산 transporter로서 여러 유기산의 흡수에 관련이 있었고, DctA 돌연변이주는 유기산만을 탄소원으로 생육하지 못하였다. DctA 돌연변이주는 phenazine 생성등 식물 병원균 억제 능력은 wild-type과 차이가 없었으나, 병 저항성 유도 능력이 wild-type에 비해 감소하였다. 이러한 결과는 오이 뿌리 분비액 중 유기산이 O6균주의 병 저항성 유도 능력에 직 간접적으로 영향을 주고 있고, O6균주에서 유기산의 이용 능력이 유용 형질 발현에 중요한 요인을 시사하고 있다.
8. 오이에서 O6균주 의해 유도발현되는 유전자의 클로닝 및 특성분석 Pseudomonas chlororaphis O6 균주의 접종에 의해 유도 발현되는 오이 유전자들을 얻고자 하였다. Subtractive hybridization 이로부터 O6균의 처리에 의해 대조구보다 빠르게 증폭 발현되는 많은 유전자들을 클로닝하였으며 이들의 발현양상을 비교 분석하였다. Northern hybridization에 의해 확인해 본 결과, O6균을 처리한 다음 갈반병균을 처리한 식물체에서는 O6균을 처리하지 않고 병원균만을 처리한 구에 비해 이들 유전자들이 약 12시간에서 24시간 정도 더 빠르게 증폭 발현되는 양상 (priming 효과)을 보였다. 한편, 흥미롭게도 유도 발현된 cDNA들의 기능을 보면 defense signal transduction에 관련될 것으로 추정되는 protein kinase, leucine rich repeat protein kinase, hypersensitive-induced reaction protein, signal recognition particle receptor, receptor-like kinase Xa21-binding protein 등을 포함한 다양한 cellular function을 갖는 유전자들을 얻을 수 있었다.
9. O6 유래 및 식물 유래 병 저항성 유도 유전자의 실용화 및 담배 형질전환 O6균주에서 병 저항성 유도에 관련될 것으로 추정되는 homoserine lactone을 합성하는 phzI 유전자와 ethylene의 전구 물질을 분해하는 ACC deaminse 들을 담배에 형질 전환하였다. 또한 subtractive hybridization에 의해 선발된 오이 유전자 pool에서 O6균주에 의해 가장 빠르고 강하게 증폭발현이 이루어졌던 CsGolS2 유전자를 담배에 형질전환하여 병 저항성을 제고하는 기능이 있는지의 여부를 확인하였다.
10. P. chlororaphis O6균주의 제제화 및 포장 실증 O6균주의 유기산 이용 능력이 병 저항성 유도 능력에 중요한 요인임이 밝혀져 유기산이 첨가된 배지에서 P. chlororaphis을 생육시켜 오팜-가드라는 상표 명으로 제제화하였다. 제품화된 오팜-가드를 실제 농가에서 실증 실험을 실시하여 고추 청고병, 멜론의 병 방제 효과와 딸기, 오이, 호박 모잘록병 등의 식물병 예방 효과가 뛰어남을 확인하여 앞으로 지속적으로 많은 작물과 병해에 대한 식물병 저항성 및 예방제로서 가능성을 검토할 것이다.

Abstract ▼

RESULTS AND DISCUSSION
1. Biological and induced systemic resistance activity of Pseudomonas chloraphis O6 Pseudomonas chlororaphis O6 was capable to induce systemic resistance against Cucumber mosaic virus, tobacco soft rot and wild fire disease in tobacco, and against target leaf spot disease i

RESULTS AND DISCUSSION
1. Biological and induced systemic resistance activity of Pseudomonas chloraphis O6 Pseudomonas chlororaphis O6 was capable to induce systemic resistance against Cucumber mosaic virus, tobacco soft rot and wild fire disease in tobacco, and against target leaf spot disease in cucumber. O6 strain also produced several secondary metabolites including phenazines involved in inhibition of phytopathogenic fungal growth.
2. Isolation of P. chlororaphis O6 mutants lacking induced systemic resistance. To investigate the genes involved in induced systemic resistance of P. chlororaphis O6, Tn5 mutants lacked ISR activity were isolated and Tn5 flanking sequences of the mutants were analyzed. The global regulators, including a sensor kinase GacS, Lon protease, and exopolyphosphatase were mutated in ISR-deficient mutants. Several secretory genes, including HylD secretion protein and translocase SecB, were also mutated in ISR-deficient mutants. The genes involved in metabolism, such as fumarate hydratase and AIR synthase, were isolated during analysis of ISR-deficient mutants. These results indicated that microbial determinats involving in induced systemic resistance of P. chlororaphis O6 may be very complicated, regulated by GacS and Lon protease, and may be involved more than one compounds.
3. Role of phenazine in Pseudomonas chlororaphis O6 on biocontrol and induced systemic resistance activity. The genes encoding phenazine biosynthetic genes of P. chlororaphis O6 were cloned and mutated to exploit the role of phenzine in biocontrol and ISR activity. The phenazine operon consisted of phzABCDEFG genes and a phzI/phzR two component system which showed high homology luxI/luxR family of quorum sensing regulators. Expression of phzI and phzA was observed only in late-log phase and stationary phase. Expression of phzI and phzA in the gacS mutant were reduced through out growth phases compared to the wild-type. The phzI and phzA mutant were found to be deficient in the production of phenazines. Induced systemic resistance activity of phzI mutant was decreased compared to that of wild-type. These results indicated that phzI gene of P. chlororaphis O6 is responsible for the production of a HSL required for phenazine antibiotic production and may be involved in induced systemic resistance.
4. Induced defence in tobacco by Pseudomonas chlororaphis strain O6 involves at least the ethylene pathway The antifungal phenazines produced by certain root colonizing pseudomonads are credited with contributing to the biocontrol activity of these isolates. However, the phenazine producer Pseudomonas chlororaphis O6 also induces systemic resistance in tobacco. Protection against two foliar bacterial pathogens, the wild fire pathogen, Pseudomonas syringae pv. tabaci, and Erwinia carotovora subsp. carotovora that causes a soft rot, was observed. A mutation in the bacterial global regulator gacS gene eliminated certain secondary traits, including phenazine production, but did not prevent induction of resistance in tobacco to P. syringae pv. tabaci. However, induction of resistance to E. carotovora subsp. carotovora was impaired in plants colonized by the GacS mutant compared to the level of protection in plants colonized by wild-type P. chlororaphis O6. Colonization by both the wild-type and the GacS mutant caused increased accumulation for transcripts of plant defense genes regulated by ethylene. Tobacco transformed with a mutant etr1 gene to reduce ethylene sensitivity did not display induced resistance to E. carotovora when colonized by P. chlororaphis O6. We conclude that inducers other than phenazines appear to initiate the pathways for systemic resistance induced by P. chlororaphis O6.
5. The global regulator GacS of a biocontrol bacterium Pseudomonas chlororaphis O6 regulates transcription from the rpoS gene encoding a stationary-phase sigma factor and affects survival in oxidative stress The global regulator, GacS (global activator for antibiotics and cyanide sensor kinase), of the rhizosphere bacterium Pseudomonas chlororaphis O6 was required for increased resistance to hydrogen peroxide as cultures mature. Specific bands of peroxidase and catalase activity were absent in the stationary-phase cells of the O6 gacS mutant, whereas a manganese superoxide dismutase (MnSOD) isozyme was expressed earlier and to a greater extent than in the wild-type. In the wild-type cell, transcript accumulation of rpoS was higher in late logarithmic (log)-phase cells than cells from mid log-phase or stationary-phase. Transcript abundance from rpoS was reduced in the gacS mutant throughout the growth phase compared to the wild-type expression. The sequence of a small RNA, rsmZ, found downstream of rpoS in other pseudomonads was lacking in O6. This RNA is implicated in the control of genes activated by the GacS system. Thus, the mechanism by which GacS mediates the activation of genes under its control requires further investigation in O6.
6. The global regulator GacS of Pseudomonas chlororaphis O6, positively regulated phenazine production, negatively regulated IAA biosynthetic gene. A root-associating bacterium, Pseudomonas chlororaphis O6, sensor kinase (GacS) senses a still-unknown signal and activates, via a phosphorelay mechanism, the GacA transcription regulator, which in turn triggers the expression of target genes. The GacS deficient O6 did not produce the phenzaine, protease, and homoserin lactone. The ability to inhibit fungal pathogens of O6 was abolished in GacS mutant. However, in the GacS mutant, production of siderophore was much more than that of wild-type. To investigate the GacS-mediated signal transduction pathway involved in production of phenazine, we cloned the phz operon. Transcripts from phzI encoding acylhomoserine lactone (AHL) synthase, and phz structural genes in the wild- type were analyzed by RT-PCR. The phzI/A transcribed levels of wild-type in mid and late log-phase cells were much the same, but the phzI/A in stationary-phase were increased about five and three times respectively. Many plant-associated bacteria synthesize the phytohormones, such as auxins. Production of the auxin indole acetic acid (IAA) not synthesize in the wilde-type, while the GacS mutant increased the level of IAA in tryptophan-supplemented medium. However, sensor kinase gacS gene in Pc O6 is not essential for plant root colonization. These results indicate that the GacS global regulatory system positively controls phenazine production at multiple levels, but on the other hand it negatively regulates IAA biosynthetic gene.
7. Lon protease gene of Pseudomonas chlororaphis O6 involved in production of secondary metabolites and regulated IAA biosynthetic gene. The flanking sequence of the N7 mutant showed high homology with lon, which encodes an ATP-dependent protease found in diverse organisms, including bacteria, plants, and, animals. The deduced amino acid sequences of the Tn5-flanking region are 90% identical to the ATP-dependent protease of P. aeruginosa PAO1. To investigate the role of Lon protease on biological properties of O6, we isolated Lon mutants by marker exchange mutagenesis. The Lon mutants did not produce phenazines, protease, and siderophore. They lost their ability to inhibit the fungal pathogens and did not produce homoserin lacton (HSL) which is known as a signal molecule for induction of secondary metabolites. Production of the auxin indole acetic acid (IAA) not synthesize in the wild-type, while the Lon mutant increased the level of IAA in tryptophan-supplemented medium. Our results showed that Lon protease of P. chlororaphis O6 may be one of the global regulators in production of secondary metabolites and homoserin-lactone as well as indole acetic acid.
8. Isolation of Pseudomonas chlororaphis 06 mutants altered in growth on cucumber root exudates Root colonization can be crucial for the action of microbial inoculants used as biocontrol agents. Root exudates are major carbon and energy source for colonizing microorganism for expression of biological activity. We determined the sugar and organic acids compositions of cucumber root exudates and isolated Tn5 mutants altered in growth on the cucumber root exudates. The major organic acids were fumaric acid, malic acid, benzoic acid and succinic acid, and glucose and fructose were major monosaccharides in cucumber root exudates. The total amount of organic acids was ten times higher than that of sugars. To determine the genes involved in utilization of cucumber root exudates, we selected three Tn5 mutants showing altered growth on cucumber exudates. The growth of one mutant, H10 was faster, but one mutants, D1 was slower than growth of wild type. However, C2 mutant did not grow on cucumber root exudates. The Tn5 flanking sequence analysis showed that a AIR synthase gene in C2 mutant and a gene containing a mce (mycobacterial cell entry) domain in D1 mutant were mutated. Our works will open opportunities for identification of bacterial traits that are involved in utilization of root
exudates and that may be important in expression of biocontrol activity.
9. Transcriptional regulation and mutational analysis of a dctA gene encoding an organic acid transporter protein from Pseudomonas chlororaphis O6 A dctA gene encoding a protein with identity to a C4-dicarboxylic acid/H+ symporter was cloned from a beneficial root colonizer, P. chlororaphis O6 . Expression of the dctA gene was induced in minimal medium by several organic acids and was repressed by glucose. Highest expression was observed in early-logarithmic (log) cells grown on fumarate, acetate, or succinate with decline as cells approached late-log growth phase. The dctA transcript accumulated weakly when cells were grown on malate but strong expression was observed with benzoate. Expression of the dctA transcript was repressed in early-log cells upon addition of glucoseto fumarate, but was detected as the cell culture aged.
10. Mutational analysis of dctA gene of Pseudomonas chlororaphis O6. To investigate the role of dctA gene in biocontrol activity and induced systemic resistance of P. chlororaphis O6, a dctA-deficient mutant, constructed by marker exchange mutagenesis, did not grow on minimal medium containing succinate, benzoate, acetate or fumarate, and growth on malate was delayed. The dctA mutant and wild-type grew equally on citrate, glucose, fructose, sucrose or inositol. We conclude that the transporter protein encoded by dctA is essential for utilization of certain organic acids and its expression is controlled by the availability of sugars. The colonization ability of dctA mutant on cucumber roots was decreased compared to wild-type and ISR activity of dctA mutant against target leaf spot disease greatly decreased, but production of phenazine and inhibition of phytopathogenic fungi were same level as wild-type. These results indicated utilization of organic acid and dctA gene in P. hlororaphis O6 is an important factor on root colonization and expression of induced systemic resistance, but not in expression of secondary metabolites involved in biocontrol activity.
11. Gene expression analysis in cucumber leaves primed by root colonization with Pseudomonas chlororaphis O6 upon challenge-inoculation with Corynespora cassiicola. Root colonization of Pseudomonas chlororaphis O6, a nonpathogenic rhizobacterium, induced systemic resistance in cucumber plants against target leaf spot caused by Corynespora cassiicola. A cDNA library was constructed using mRNA extracted from cucumber leaves 12 h after inoculation with C. cassiicola, using plants colonized by O6. To identify the genes involved in the O6-mediated induced systemic resistance (ISR), we employed a subtractive hybridization method using mRNA extracted from pathogen-challenged cucumber leaves of plants lacking colonization.
Differential screening of the cDNA library led to the isolation of six distinct genes encoding a GTP-binding protein, a 60S ribosomal protein, a hypersensitive-induced reaction protein, an ubiquitin extension protein, a pyridine nucleotide-disulfide oxidoreductase and a signal recognition particle receptor. Expression of these genes was not induced by O6-colonization alone. Rather transcript accumulation of these genes increased significantly faster and stronger in the O6-colonized than in non-colonized plants after challenge infection. Therefore, O6-mediated ISR may be associated with an enhanced capacity for the rapid and effective activation of cellular defense responses after challenge inoculation.
12. Characterization and construction of transgenic tobacco plants over-expressed CsGols that is induced by P. chlororaphis O6. A CsGolS cucumber gene is induced faster and stronger in the O6-colonized than in non-colonized cucumber. To further investigate role of the CsGols in disease resistance, the expression of CsGols was examined after treatment of a bacterial pathogen or chemicals that are involved in disease resistance in plants. The CsGols transcript were greatly induced upon treatment on pathogen treatment and chemical treatments. This result implicates that CsGolS could be a excellent candidate gene for enhancement or induce disease resistance. Therefore, the CsGols was over-expressed in tobacco, and the transgenic lines of the CsGols were enhanced disease resistance against soft-rot disease. These results indicate that the cucumber genes induced by P. chlororaphis O6 could be very useful resource to develope new disease resistance approach in plant.
13. Construction of trangenic tobacco plants over-expressed microbial genes of P. chloraphis O6. Homoserine lactone regulate diverse biological functions including the induction of virulence gene of plant pathogenic bacteria. It is possible that plant bacterial disease could be control by manipulating expression of homoserine lactone or degrading homoserine lactone. P. chlororaphis O6 produces ACC deaminase that is hydrolyzed ACC, a precursor of plant hormone ethylene. A phzI, encoding HSL synthase involved in regulating of phz genes, and a acd, encoding ACC deaminase involved in hydrolysis of ACC, were transformed into tobacco to investigate the role of these genes in induction of disease resistance by microbial genes. We are currently under investigation of disease resistance of transgenic tobacco plants with E. carotovora subsp. carotovora
14. Formulation of P. chlororaphis O6 and field test against various plant diseases. Based on composition of cucumber root exudates and mutant analysis, we were added key nutrients to help root colonization on plant roots and named Ofam-guardTM. This formulated product showed great
disease control activity against various plant diseases and showed primed effect on various crop. The efficacy of this product will be extended in
varous plant species and plant disease, and will be enhanced by modification with mixture of other beneficial microbes or chemicals.

목차 Contents

• 제출문 ...1
• 요약문 ...2
• Summary ...9
• CONTENTS ...19
• 목차 ...22
• 제 1 장 연구개발의 개요 ...25
• 제 1 절 연구개발의 목적 및 필요성 ...26
• 1. 연구개발의 목적 ...26
• 2. 연구개발의 필요성 ...27
• 제 2 절 연구개발의 목표 및 내용 ...29
• 1. 연구개발 목표와 내용 ...29
• 2. 연구개발 방법 및 설계 ...31
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황 ...43
• 제 1 절 국외 관련 기술의 현황 ...44
• 제 2 절 국내 관련 기술의 현황 ...47
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ...49
• 제 1 절 토양서식균 Pseudomonas chlororaphis O6의 식물병원균 억제 능력 및 식물병 전신저항성 유도능력 ...50
• 제 2 절 Tn5 돌연변이에 의한 P. chlororaphis O6균주의 Induced systemic resistance (ISR) 유도 능력 상실 돌연변이주 선발 및 특성 분석 ...61
• 제 3 절 Pseudomonas chlororaphis O6균주의 phenazien 생합성 유전자의 클로닝 및 돌연변이 분석 ...75
• 제 4 절 Pseudomonas chlororaphis O6의 내병성 유도 능력 생산에 있어서 GacS의 역할과 O6에 의해 유도되는 식물신호전달체계 ...93
• 제 5 절 The global regulator GacS of a biocontrol bacterium Pseudomonas chlororaphis O6 regulates transcription from the rpoS gene encoding a stationary-phase sigma factor and affects survival in oxidative stress...112
• 제 6 절 Pseudomonas chlororaphis O6 균주의 sensor kinase인 GacS가 생물적 방제에 관련된 유전자들을 조절하는 global regulator ...126
• 제 7 절 Pseudomonas chlororaphis O6균주의 Lon protease가 생물적 방제에 관련된 유전자들의 발현을 조절하는 global regulator ...137
• 제 8 절 Tn5돌연변이에 의한 오이 뿌리 분비액 이용 돌연변이주 선발 ...152
• 제 9 절 Transcriptional regulation and mutational analysis of a dctA gene encoding an organic acid transporter protein from Pseudomonas chlororaphis O6...178
• 제 10 절 Pseudomonas chlororaphis O6의 유기산 흡수에 관련된 dctA 유전자의 돌연변이주 분석 ...192
• 제 11 절 Gene Expression Analysis in Cucumber Leaves Primed by Root Colonization with Pseudomonas chlororaphis O6 upon Challenge-inoculation with Corynespora cassiicola...201
• 제 12 절 Pseudomonas chlororaphis O6에 의해 유도되는 glalactinol synthase (CsGolS) 유전자의 발현 특성 규명 ...209
• 제 13 절 Pseudomonas chlororaphis O6균주에 의해 유도되는 병 저항성 유도 유전자 CsGolS의 형질전환 및 병 저항성 유도 능력 ...217
• 제 14 절 Pseudomonas chlororaphis O6의 식물병 저항성 유도에 관련된 microbial determinants 유전자들의 담배 형질전환 및 병 저항성 유도 능력 ...224
• 제 15 절 Pseudomonas chlororaphis O6균주의 제제화 및 실용화 실증 실험 ...230
• 제 4 장 목표 달성 및 관련분야에의 기여도 ...235
• 제 1 절 목표 달성도 ...236
• 1. 제 1 차년도의 연구개발 목표와 평가의 착안점 및 달성도 ...236
• 2. 제 2 차년도의 연구개발 목표와 평가의 착안점 및 달성도 ...237
• 3. 제 3 차년도의 연구개발 목표와 평가의 착안점 및 달성도 ...238
• 4. 최종평가의 착안점 및 달성도 ...238
• 제 2 절 관련분야에의 기여도 ...239
• 1. 기술적 측면에서의 기여도 ...240
• 2. 학문발전에의 기여도 ...240
• 3. 경제, 산업화 측면에서의 기여도 ...243
• 제 5 장 연구개발의 활용계획 ...245
• 제 1 절 추가 연구의 필요성 ...246
• 1. 육종학자와 연계된 추가 연구의 필요성 ...246
• 2. 포장실험으로 확대의 필요성 ...246
• 제 2 절 타 연구에의 응용 ...247
• 1. O6에 관련된 내병성 유도 미생물 유도 물질 및 식물병 저항성 유도 유전자의 응용 ...247
• 2. O6균주의 식물생장조절물질의 응용 ...247
• 제 3 절 기업화 추진 방안 ...247
• 제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정도 ...248
• 제 1 절 Induced systemic resistance에 대한 기술정보 ...249
• 제 2 절 병저항성 작물 생산을 위한 기술정보 ...249
• 제 3 절 병저항성 유도 미생물 관련 기술정보 ...250
• 제 7 장 참고 문헌 ...251