초록 ▼

1. 국내의 닭 Pneumovirus의 분리
가. 바이러스의 분리 및 동정
(1) 시료 채취
2006 년 5 월부터 2008 년 4 월까지 경기도, 충청남북도, 전라남북도, 강원도에 위치하는 30 개의 양계 농장에서 산란계 65 수, 육계 23 수의 기관 채취 및 기관지 swab 를 실시하였다.
(2) 계태아의 요막강내 접종을 통한 바이러스 분리
-70℃ 에 보관된 조직 상층액과 기관 swab 을 9 ~ 11 일령 계태아의 요막강내에 0.2㎖ 씩 접종하였고, 접종된 계태아는 37℃ 부란기에서 4 일간 배양

1. 국내의 닭 Pneumovirus의 분리
가. 바이러스의 분리 및 동정
(1) 시료 채취
2006 년 5 월부터 2008 년 4 월까지 경기도, 충청남북도, 전라남북도, 강원도에 위치하는 30 개의 양계 농장에서 산란계 65 수, 육계 23 수의 기관 채취 및 기관지 swab 를 실시하였다.
(2) 계태아의 요막강내 접종을 통한 바이러스 분리
-70℃ 에 보관된 조직 상층액과 기관 swab 을 9 ~ 11 일령 계태아의 요막강내에 0.2㎖ 씩 접종하였고, 접종된 계태아는 37℃ 부란기에서 4 일간 배양한 후 요막강액을 채취하였다. 채취된 요막강액을 3000 rpm 에서 20 분간 원심분리 한 후 상층액만을 회수하였고, RT-PCR 를 통한 바이러스 증식 유무를 이용하여 바이러스 입자를 재 부유 시킨 후 RNA 를 추출하여 RT-PCR 를 실시하였다.
(3) 세포 배양을 통한 바이러스 분리
0.25% Trypsin/EDTA 를 이용하여 8 ~ 9 일령 계태아로부터 획득 한 계태아 섬유모세포 (3$10^{5}$)와 Vero cell (2×$10^{4}$) 를 5% FBS, 100 U/㎖ penicillin, 100 ㎍/㎖ streptomycin, 0.25 ㎍/㎖ amphotericin B, 2.2 ㎎/㎖ $NaHCO_{3}$, 15 mM HEPES buffer, 1% MEM-nonessential amino acid, 2 mM L-glutamine, 0.1 mM sodium pyruvate 가 들어 있는 MEM (minimum essential medium, Gibco BRL, USA) 배지를 이용하여 6 well (Nunk, Roskilde, Denmark) 에 분주 한 후 5% $CO_{2}$, 37℃ 배양기에서 monolayer 가 형성될 때까지 배양 증식하였다. 5% $CO_{2}$, 37℃ 배양기에서 72 시간동안 배양하면서 세포변성효과 (cytopathic effect) 여부를 관찰하였다. 72 시간 후 3회의 해동 동결 과정을 거치고, 3000 rpm 으로 20 분 동안 원심분리 후 상층액을 회수 한 후 5 번의 blind passage 를 거쳐 RT-PCR 를 통해 바이러스 증식 유무를 확인하였다.
(4) Avian metapneumovirus 의 확인
30 개의 양계 농장에서 채취 된 기관 및 기관 swab 을 계태아의 요막강내에 접종한후 subtype 별로 제작된 primer 를 이용한 RT-PCR 을 실시한 결과, Fig. 1. 과 같이 AMPV subtype C 에 해당하는 증폭산물 (280 bp) 을 확인하였다. 또한, 품종별 분리양상은 산란계 65 수 중 1 수, 육계 23 수 중 4 수에서 양성 반응을 확인하였다
5) 세포 배양을 통한 AMPV 증식 확인
RT-PCR 양성 반응을 보인 시료의 계태아 요막강액을 Vero cell 및 계태아 섬유모세포에 접종 한 결과 cell rounding 및 합포체와 같은 세포변성 효과는 나타나지 않았으나, Fig. 3. 과 같이 RT-PCR 결과 AMPV 의 증식이 이루어지고 있음을 확인하였다.

Abstract ▼

Avian metapneumovirus (AMPV) causes an acute respiratory disease in the turkeys and is associated with "swollen head syndrome" in the chickens. In layer, AMPV infetction results in poor egg quality and low productivity, contributing to significant economic losses for the poultry industry.
The pur

Avian metapneumovirus (AMPV) causes an acute respiratory disease in the turkeys and is associated with "swollen head syndrome" in the chickens. In layer, AMPV infetction results in poor egg quality and low productivity, contributing to significant economic losses for the poultry industry.
The purpose of this study was to isolate of AMPV and define the subtypes of AMPV isolates in Korea by ELISA, subtype specific RT-PCRs, and cell culture.

목차 Contents

• 표지 ...1
• 제출문 ...2
• 요약문 ...3
• SUMMARY ...21
• CONTENTS ...23
• 목차 ...24
• 제1장 연구개발과제의 개요 ...25
• 1. 연구개발의 목적 및 필요성 ...25
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ...29
• 1. 연구의 세계적 수준 ...29
• 2. 연구의 국내수준 ...30
• 3. 국내.외의 연구현황 ...30
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ...33
• 1. 국내의 닭 Pneumovirus의 분리 ...33
• 2. 닭 Pneumovirus의 국내 역학 조사 ...38
• 3. 국내 APV 분리주의 분자생물학적 특성 ...45
• 4. 국내 분리주를 이용한 백신개발 ...47
• 5. 국내 야외주 유래 APV 백신의 면역원성 평가 ...49
• 6. 국내 APV 백신의 방어능력 평가 ...57
• 7. 결론 ...60
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ...61
• 제5장 연구개발 성과 및 성과활용 계획 ...62
• * 실용화.산업화 계획(기술실시 등) ...62
• * 교육.지도.홍보 등 기술확산 계획 등 ...62
• * 특허, 품종, 논문 등 지식재산권 확보계획 등 ...62
• * 추가연구, 타연구에 활용 계획 등 ...62
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ...63
• 1. 최근의 APV의 임상 증상 동향...63
• 2. APV의 백신개발 동향...63
• 3. 최근의 혈청검사...63
• 제7장 참고문헌 ...64