초록 ▼

병든 표고에서 분리한 새로운 바이러스 2종, 막대형 (Lentinula edodes Helical Virus; LeHV) 및 구형(Lentinula edodes Helical Virus;LeSV 및 LeSV의 유전체를 cDNA를 합성하여 유전체 sequening을 수행하였으며 이를 이용하여 바이러스 진단용 특이 primer를 합성하였음. 시중의 각기 다른 재배사에서 111종의 표고를 수집하여 PCR로 이들 두 바이러스를 진단한 결과 71종의 시료에서는 LeSV 및 LeHV 두 종류가 이병되어 있었고, 33종은 LeSV만, 1종은 L

병든 표고에서 분리한 새로운 바이러스 2종, 막대형 (Lentinula edodes Helical Virus; LeHV) 및 구형(Lentinula edodes Helical Virus;LeSV 및 LeSV의 유전체를 cDNA를 합성하여 유전체 sequening을 수행하였으며 이를 이용하여 바이러스 진단용 특이 primer를 합성하였음. 시중의 각기 다른 재배사에서 111종의 표고를 수집하여 PCR로 이들 두 바이러스를 진단한 결과 71종의 시료에서는 LeSV 및 LeHV 두 종류가 이병되어 있었고, 33종은 LeSV만, 1종은 LeHV만 이병되어 있었으며 바이러스에 이병되지 않은 버섯은 6종에 불과했음. 이들 재배버섯의 종균은 그 유래가 중국 등 6개국이었으므로 이 2종의 바이러스는 전 세계적으로 분포되어 있다고 생각할 수 있음. LeHV 및 LeSV가 모두 이병되지않은 버섯에서 담자포자를 수거하여 바이러스 이병율을 조사한 결과 LeHV 및 LeSV가 모두 이병되지않은 버섯에서 담자포자를 수거하여 바이러스 이병율을 조사한 결과 LeSV는 100%, LeHV는 82%가 이병되어 있었음. 이는 이들 바이러스가 이병된 포자가 비산하여 바이러스를 전파할 가능성이 있음을 보여준다고 하겠음.

Abstract ▼

Two novel mycoviruses were isolated from Lentinula edodes with severe epidemic. A helical form virus, named Lentinula edodes helical virus (LeHV), of 500 nm in length, 12nm in diameter and a spherical virus, named Lentinula edodes spherical virus (LeSV), of 55 nm in diameter were found under transmi

Two novel mycoviruses were isolated from Lentinula edodes with severe epidemic. A helical form virus, named Lentinula edodes helical virus (LeHV), of 500 nm in length, 12nm in diameter and a spherical virus, named Lentinula edodes spherical virus (LeSV), of 55 nm in diameter were found under transmission electron microscope. The particle of LeHV encapsidated 3 fragmented single-stranded RNAs (ssRNAs) of 17, 4, and 3 kilo bases as its genome by coat proteins of 50 and 25kDa, while LeSV encapsidated an ssRNA of 17 kb by coat protein of 120 kDa. Fungal viruses (mycoviruses) apparently spread exclusively by cell-to-cell fusion. No natural extracellular infectious cycle of mycovirus has been demonstrated despite numerous attempts. This mode of mycovirus transmission, only by cell fusion, suggest us the way of control mycoviruses in mushrooms. If the spawn harbored mycovirus, the product mushroom has the viruses. If the spawn freeds from mycoviruses, the mushroom should be virus-free. Using virus-free spawn is crucial factor to have healthy mushrooms for farmers. In order to select the virus-free spawn, we were constructed virus diagnosis system, triple antibody snadwich ELISA (TAS-ELISA), using purified LeHV and LeSV coat proteins. The TAS-ELISA system could even detect less than 0.5 llg/ml of the purified viruses, this level of sensitivity was sufficient to detect LeHVand LeSV-infcsted fungal cells collected from commercial farms. Another detection system for these two viruses, using reverse-transcriptase PCR, was made. Specific primers targeting RNA -dependent RNA polymerase (RdRp) gene of each virus were designed on the basis of partial sequence of the viral genomes . RT-PCR analysis on the 111 dikaryotic commercial cultivars( spawns) revealed that 71 of them carried both LeSV and LeHV, 33 carried LeSV alone, one cultivar carried LeHV alone, and only 6 cultivars were virus free. This results revealed that the mycoviruses were infested in L. edodes in high freguency and it could be necessary to diagnose the viruses in spawn before planting on culture medium.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 3
• 보고서 요약서 ... 4
• 요약문 ... 5
• Summary ... 8
• 목차 ... 10
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 12
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 14
• 1. 국내외 연구동향 ... 14
• 가. 양송이의 바이러스병 ... 14
• 1) 라프랑스병 (La France Disease) ... 14
• 원인 바이러스 ... 14
• 라프랑스병의 감염경로 ... 15
• 방제대책 ... 15
• 국내의 발생 사례 ... 15
• 2) 바이러스 X ... 16
• 원인 바이러스 ... 16
• 바이러스 X의 전염경로 ... 17
• 방제대책 ... 17
• 국내의 발생사례 ... 18
• 나. 느타리속 버섯의 바이러스병 ... 18
• 원인 바이러스 ... 18
• 전염경로 ... 19
• 방제대책 ... 20
• 외국의 발생사례 ... 20
• 다. 팽이 및 기타버섯의 바이러스병 ... 20
• 라. 표고버섯의 바이러스병 ... 20
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 22
• 제1 세부과제 : 바이러스 진단용 ELISA 키트 개발 ... 22
• 1. 표고버섯으로부터의 LeSV의 분리 및 동정 ... 22
• 1) 바이러스 입자의 분리 ... 22
• 2) 바이러스 입자의 전자 현미경 관찰 ... 22
• 3) 바이러스 핵산 분리 및 동정 ... 22
• 4) 바이러스 외피 단백질의 분석 ... 23
• 5) 복클론 항체(polyclonal antibody)의 생산 ... 23
• 6) 단클론 항체 제작 ... 23
• 7) Western blot analysis ... 24
• 8) Triple Antibody Sandwich Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay(TAS-ELISA) ... 25
• 2. 표고버섯으로부터의 LeHV의 분리 및 동정 ... 28
• 1) 바이러스 입자의 분리 ... 28
• 2) 바이러스 입자의 전자 현미경 관찰 ... 28
• 3) 바이러스 핵산 분리 및 동정 ... 28
• 4) 바이러스 외피 단백질의 분석 ... 29
• 5) 복클론 항체(polyclonal antibody)의 생산 ... 29
• 6) 단클론 항체 제작 ... 29
• 7) Western blot analysis ... 30
• 8) Triple Antibody Sandwich Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay(TAS-ELISA) ... 30
• 제2 세부과제 : 바이러스 genome organization 구명 및 특이 primer 개발 ... 34
• 1. LeSV 유전체 분석 ... 34
• 1) cDNA 합성 ... 34
• 2) cDNA cloning과 sequencing ... 34
• 3) 염기서열 분석 ... 34
• 2. LeHV 유전체 분석 ... 37
• 1) cDNA 합성 ... 37
• 2) cDNA cloning과 sequencing ... 37
• 3) 염기서열 분석 ... 37
• 제3 세부과제 : 표고버섯 바이러스 전이경로 구명 및 무바이러스 종균개발 ... 40
• 1) 표고버섯 바이러스 LeSV, LeHV의 RdRp 유전자를 이용한 특이 primer 제작 ... 40
• 2) 사용 버섯 및 배지 ... 40
• 3) 단 포자 분리 ... 40
• 4) 균사에서 total RNA 추출 ... 40
• 5) 역전사 PCR(Reverse Transcription polymerase chain reaction) ... 40
• 6) 역전사 PCR 산물 클로닝과 염기서열 결정 ... 41
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 47
• 1. 목표달성도 ... 47
• 2. 관련분야에의 기여도 ... 48
• 기술적 측면 ... 48
• 경제.산업적 측면 ... 48
• 사회.문화적 측면 ... 48
• 제5장 연구개발결과의 활용계획 ... 49
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 50
• 제7장 참고문헌 ... 51
• 끝페이지 ... 55