초록 ▼

1. 연구개발의 목적
DNA 손상시 종양억제자 VHL에 의한 세포주기 조절 기전 규명
1) DNA손상시 어떻게 VHL 이 p53 전사 활성 복합체의 기능에 관여할 것인가에 대한 이해
2) p53 의 기능과는 무관한 VHL의 세포주기 조절 기능 가능성: VHL 에 의한 p27 안정화기전에서 어떤 식으로 VHL이 Skp2 의 기능을 조절할 것인가에 대한 이해
2. 연구내용
1) VHL에 의 한 Skp2-p27 안정화기전 조절
세포사멸 자극을 통한 p27/kip1의 유도는 pVHL에 의한 유비퀴틴화의 감소

1. 연구개발의 목적
DNA 손상시 종양억제자 VHL에 의한 세포주기 조절 기전 규명
1) DNA손상시 어떻게 VHL 이 p53 전사 활성 복합체의 기능에 관여할 것인가에 대한 이해
2) p53 의 기능과는 무관한 VHL의 세포주기 조절 기능 가능성: VHL 에 의한 p27 안정화기전에서 어떤 식으로 VHL이 Skp2 의 기능을 조절할 것인가에 대한 이해
2. 연구내용
1) VHL에 의 한 Skp2-p27 안정화기전 조절
세포사멸 자극을 통한 p27/kip1의 유도는 pVHL에 의한 유비퀴틴화의 감소와 연관이 있음
pVHL과 Skp2의 직접 결합 확인
pVHL은 E3계열 유비퀴틴 접착활성과는 무관하게 Skp2의 폴리유비퀴틴화를 증가시킴
pVHL은 세포사멸신호에 빠르게 자극하는 Skp2 불활성화 경로에 관여함
pVHL에 의한 Skp2조절은 Akt에 의한 인산화 저해를 경유
RCC4 세포주에서 S-phase 진행조절이 제대로 이루어지지 않는 것이 pVHL의 복원에 의해 정상으로 회복되어짐
2) DNA손상시 어떻게 VHL이 p53 전사 활성 복합체의 기능에 관여할 것인가에 대한 이해
Chk2 인산화 효소와 pVHL의 결합 확인
Chk2에 의한 pVHL 인산화 여부 확인
Beta 영역내 Chk2의 인산화 적중 잔기가 존재함
Chk2의 인산화가 일어나는 Serine 잔기 조사
pVHL의 111번 Serine은 Chk2의 적중부위임을 확인
pVHL의 돌연변이가 HIF1 기능에 미치는 영향 탐구
pVHL 복원세포주들의 p53 의존적인 에너지 대사활성 비교
세포독성시 p53 의존적인 전사활성을 pVHL 돌연변이와 관련하여 비교
pVHL 툴연변이 형태에 따라 세포독성에 반응하는 p53의 크로마틴 결합력 변화
pVHL은 p53 의 보조활성인자인 p300과 결합
pVHL은 p53의 보조활성인자인 Tip60와 결합
pVHL 돌연변이체와 p300 및 Tip60의 결합정도 차이 탐구
pVHL의 돌연변이가 세포독성시 세포주기 조절에 미치는 영향조사
3. 기대효과
1) 과학기술적 기대성과
종양 억제자 VHL의 세포주기 조절 기능에 대한 새로운 고찰 : 세포주기 조절 기전과 관련된 VHL의 새로운 종양억제 기능을 규명할 수 있을 것으로 기대
VHL 종양 원인의 새로운 타켓 단백질 발굴 :
VHL에 의해 조절 받는 oncogenic한 세포주기 조절 단백질을 찾는다면 VHL 관련성 암의 치료제의 훌륭한 타켓 단백질이 될 것으로 기대
2) 기술개발 토대 완성 : VHL에 의해 특이적으로 조절받는 세포주기 조절 단백질을 발굴하고 이를 항암제 개발의 적중 단백질로 개발하고자 함
3) 성과 발표 및 인력 배출 :3년간 본 연구를 통하여 국내외 학술대회 및 top journal에 논문 발표 및 다수의 석박사 배출기대

Abstract ▼

I.Purpose
Defining roles tumor suppressor pVHL mediated cell-cycle regulation upon DNA damage
● Understanding how pVHL regulates transcriptional activity of p53 complex during DNA -damaging condition
● Possibility for p53-independent function of cell-cycle regulation by pVHL : How pVHL cont

I.Purpose
Defining roles tumor suppressor pVHL mediated cell-cycle regulation upon DNA damage
● Understanding how pVHL regulates transcriptional activity of p53 complex during DNA -damaging condition
● Possibility for p53-independent function of cell-cycle regulation by pVHL : How pVHL controls function of Skp2 in terms of p27 stabilization
2. Experiment
A. pVHL mediatied regulation for Skp2-p27 axis
● Induction of p27/kipl resulted from apoptotic stimuli is related with pVHL mediated inhibition of poly-ubiquitination.
● pVHL directly binds to Skp2
● Increasing poly-ubiquitination of Skp2 by pVHL is unrelated to E3 ubiquitin ligase activity of pVHL
● Upon apoptotic stimuli, rapid destabilization of Skp2 is occurred which is concerned with pVHL
● pVHL mediated Skp2 destabilization occur via inhibition of Aktl-mediated phosphorylation
● Restoration of dysregulated cell-cycle progression in VHL null RCC4 cell lines is resulted from pVHL recovery.
B. pVHL dependent regulation of p53 transcriptional activator complex in DNA damage
● pVHL specifically interacts with Chk2 kinase
● Chk2-mediated pVHL phosphorylation exists
? Candidate Chk2 phosphorylation site exists in beta domain of pVHL
● Investigation of putative Chk2 substrate serine residue in pVHL
● Chk2 phosphorylates pVHL at Ser111
● Effect of pVHL Serl11 mutation on HIF-1 function
● Type of VHL mutation determines p53 dependent cellular energy metabolism
● DNA -damage induced chromatin bound p53 depend on pVHL types of mutation
● pVHL binds with co-activators for p53, p300
● pVHL binds with co-activators for p53, TIP60
● Comparison for difference in binding activity of pVHL for 0300 and Tip60
● DNA-damage elicits dysfunctional cell-cycle profiling in RCC4 mutant cells
3. Expected effect
A. In terms of Scientific technique
● Consideration of novel function for tumor suppressor pVHL, regulation of cell-cycle
: Novel molecular mechanism which contributes to tumor suppressive function of pVHL
● Identifying unknown target protein which brings about renal tumorigenesis
: Oncogenic cell-cycle regulatory target protein controlled by pVHL is excellent target for pVHL-dependent cancer therapy
B. Completion for basis on technical development
● Evaluates target protein concerned by pVHL specific regulation then develop for anti-cancer drug
C. Result announcement and manpower production
● With three years of studying we expected further things :
presentation of results in domestic/foreign academy, article submission into top-grade journal and graduation of several MS/PhD student

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 4
• 목차 ... 6
• I. 연구개발결과 요약문 ... 8
• 한글요약문 ... 8
• 영문요약문 ... 10
• II. 연구개발과제 연구결과 ... 12
• 1. 연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 12
• 2. 연구개발과제의 연구대상 및 방법 ... 16
• 3. 연구개발과제의 연구개발결과 ... 18
• 4. 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 40
• 5. 연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도 ... 42
• 6. 연구개발과제의 활용계획 ... 51
• 7. 참고문헌 ... 52
• 8. 첨부서류 ... 55
• 끝페이지 ... 62