초록 ▼

o제 1 세부과제: 생명공학을 통한 호접란으로의 유용 유전자 형질전환
- 2003년 19 계통, 2004년 31계통, 2005년 40계통의 특성조사 및 DB화
- Agrobacterium을 이용한 형질전환 시 효율이 높은 최적 조건 구명
- PCR, RT PCR, Southem blot을 통해 1 copy씩 transgen이 삽입된 형질전환 식물체 6개 확보
o 제 1 협동과제: 내바이러스 및 내병성 유전자 클로닝
- CyMV와 ORSV의 게놈 염기 서열을 분석 및 기존에 보고된 바이러스와의 차이 분석으로

o제 1 세부과제: 생명공학을 통한 호접란으로의 유용 유전자 형질전환
- 2003년 19 계통, 2004년 31계통, 2005년 40계통의 특성조사 및 DB화
- Agrobacterium을 이용한 형질전환 시 효율이 높은 최적 조건 구명
- PCR, RT PCR, Southem blot을 통해 1 copy씩 transgen이 삽입된 형질전환 식물체 6개 확보
o 제 1 협동과제: 내바이러스 및 내병성 유전자 클로닝
- CyMV와 ORSV의 게놈 염기 서열을 분석 및 기존에 보고된 바이러스와의 차이 분석으로 서양란의 바이러스 분포를 파악
- 클로닝 된 두 바이러스의 외피단백질을 발현하는 식물체 벡터를 제작하여 형질전환체 제작에 이용
- 복제효소에 관한 단백질， 내병성 유전자를 클로닝하여 형질전환용 벡터 제작
- 두 바이러스를 검정하기 위한 바이러스 분리 방법 및 RT-PCR, immunobloting을 통한 검정기술 개발
- 검정법을 이용하여 조직배양된 난의 조기 바이러스 검정 실시로 바이러스 free 난 검정
- 형질전환체 바이러스의 저항성 조기 스크리닝 개발
o 제 2 협동과제: 산업화를 위한 효율적인 대량생산 체계 확립
소독물 태고 (Tego)로 0.05%농도에서 효과가 양호하며 4% 락스로 진공 15분 전처리한 후 0.04% 락스로 15분 shaking하였을 때 화경 소독효과가 가장 우수함
- 고형물에 대한 PLB 증식효과를 실험한 결과 agar와 gelrite를 혼용 시 PLB 증식율이 높으며 4.7g/L agar+ 1.9g/L gelrite에서 PLB증식율이 가장 높음
- 배지내 천연물 첨가에 따른 효과에 있어 pH 6.1 의 사과쥬스 1.8%와 감자 2%가 첨가된 유리병에서 PLB 증식율이 가장 좋은 것으로 나타남
- PLB의 발달단계에 따른 PLB 재분화 양상의 경우 잎이 유도되기 전의 단계(1단계)에서 PLB 의 재분화율이 가장 좋았음
- PLB 증식을 위한 cutting 방법의 경우 PLB크기가 작은 경우 상단의 재분화된 조직만을 잘라주거나 크기가 큰 경우 이등분 해주는 것이 증식효율이 높은 것으로 나타남
- 증식된 PLB가 식물체로 재분화 될 때 뿌리오름은 hyponex 배지의 charcoal 농도를 높여주거나, pH를 높여주거나, 감자만 넣었을 때 효과적으로 제어됨

Abstract ▼

The subject of this research is Gene cloning and transformation for development of disease resistant cultivar in Phalaenopsis. It has three components; 1) Transfer of useful genes into Phalaenopsis by biotechnology, 2) gene cloning of virus and disease resistant genes, 3) establishment of mass propa

The subject of this research is Gene cloning and transformation for development of disease resistant cultivar in Phalaenopsis. It has three components; 1) Transfer of useful genes into Phalaenopsis by biotechnology, 2) gene cloning of virus and disease resistant genes, 3) establishment of mass propagation system. Domestic and foreign genetic resources were collected and characterized. Superior lines were used for the hybridization and mass propagation. Transformation system of Phalaenopsis by Agrobacterium and gene gun. Transfonnation of ORSV and CyMV genes was confinued with GUS, PCR, RT-PCR, and Southern blot. Orchid virus was isolated and characerized. Virus free Phalaenopsis plants were identified. Vector with virus resistant genes were constructed. Transgenic plants with virus resistant genes were tested for the early diagnosis. The most efficient mass propagation system for the transgenic plants was established by the experiments with various factors

목차 Contents

• 표지 ...1
• 제출문 ...3
• 최종보고서 초록 ...5
• 요약문 ...7
• SUMMARY ...10
• CONTENTS ...13
• 목차 ...15
• 제 1 장 서론 ...17
• 제 1 절 연구개발의 필요성 ...17
• 제 1 항 기술적 측면 ...17
• 제 2 항 경제.산업적 측면 ...18
• 제 2 절 연구개발 목적과 범위 ...18
• 제 1 항 연구개발 목적 ...18
• 제 2 항 연구 결과 ...24
• 제 2 장 국내외 기술개발현황 ...20
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ...21
• 제 1 절 세부과제 I : 생명공학을 통한 호접란으로의 유용 유전자 형질전환 ...21
• 제 1 항 연구 내용 및 방법 ...21
• 제 2 항 연구 결과 ...24
• 가. 원종 및 우수 유전자원의 수집과 선발 ...24
• 나. 유용 유전자의 Agrobacterium에 의한 형질전환 ...31
• 다. 유용 유전자의 Gene gun에 의한 형질전환 ...38
• 라. 선발 및 증식된 형질전환 조직배양묘 온실테스트 ...42
• 마. 도입유전자 발현검정 및 안정성 연구 ...43
• 제 2 절 세부과제 II : 내바이러스 및 내병성 유전자 클로닝 ...44
• 제 1 항 연구 내용 및 방법 ...44
• 제 2 항 연구 결과 ...54
• 1. 난바이러스 유전자 분리와 cDNA 합성 ...54
• 2. 바이러스 저항성 유전자의 식물체발현벡터 제작 ...56
• 3. 호접란의 내병성 유전자 스크리닝 ...57
• 4. 호접란 바이러스 검정 기술 개발 ...61
• 5. 형질전환 식물체 바이러스 저항성 스크리닝 기술개발 ...62
• 제 3 절 세부과제 III : 산업화를 위한 효율적인 대량생산 체계 확립 ...69
• 제 1 항 연구 내용 및 방법 ...69
• 제 2 항 연구 결과 ...75
• 가. 호접란의 대량생산 효율증가 ...75
• 나. 호접란 조직배양묘 온실 테스트 ...92
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ...93
• 제 1 절 연구개발목표의 달성도 ...93
• 제 2 절 관련분야의 기술발전에의 기여도 ...94
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획 ...95
• 제 1 절 추가연구의 필요성 ...95
• 제 2 절 타 연구에의 응용 ...96
• 제 3 절 기업화 추진 방안 ...96
• 제 6 장 기타 중요 변동사항 ...97
• 제 7 장 참고문헌 ...98