초록 ▼

1. 식물병원성 그람음성 세균의 분비체계를 저해하는 저해제의 활성 검정 및 도출
2. 식물 병원성 그람음성 세균에 대한 최소생육저지 농도(MICs)의 결정
3. 식물 병원성 세균에 대한 화합물의 생육 억제 시험
4. Western blotting에 의한 GUS 융합 단백질의 분비체계 저해 여부 검정
5. 2차원 전기영동(2-dimensional electrophoresis)에 의한 단백질의 분비체계 저해여부 검정
6. 동진 벼를 이용한 in vitro 생리활성 검정
7. 동진 벼를 이용한 in viv

1. 식물병원성 그람음성 세균의 분비체계를 저해하는 저해제의 활성 검정 및 도출
2. 식물 병원성 그람음성 세균에 대한 최소생육저지 농도(MICs)의 결정
3. 식물 병원성 세균에 대한 화합물의 생육 억제 시험
4. Western blotting에 의한 GUS 융합 단백질의 분비체계 저해 여부 검정
5. 2차원 전기영동(2-dimensional electrophoresis)에 의한 단백질의 분비체계 저해여부 검정
6. 동진 벼를 이용한 in vitro 생리활성 검정
7. 동진 벼를 이용한 in vivo 실험
8. 운주 벼를 이용한 소규모 포장시험
9. 물벼룩 (Daphma magna)을 이용한 분비체계 저해제의 독성시험
10. Hemolysis assay를 이용한 분비체계 저해제의 발굴
11. RNA 추출과 cDNA 합성 및 RT-PCR
12. SDS-PAGE에 의한 단백질 밴드의 확인

Abstract ▼

The type III secretion system (TTSS) has been well studied as a common virulence factor in both animal and plant pathogenic gram -negative bacteria. It has been reported that TTSSs facilitate the translocation of the bacterial proteins, called effectors, to the cytosol or organelles of host cells, a

The type III secretion system (TTSS) has been well studied as a common virulence factor in both animal and plant pathogenic gram -negative bacteria. It has been reported that TTSSs facilitate the translocation of the bacterial proteins, called effectors, to the cytosol or organelles of host cells, and allows the pathogen to infect host cells by the evation and/or the suppression of the host defense mechanism. By the taking advantage of the characteristics of TTSS and the nature of effector, the screening systems have been developed to the identification of TTSS inhibitors. In this research project, the screening system for the identification of TTSS inhibitors of Xanthomonas axonopodjs had been constructed by making the simple fusion of a known effector, hpaG, and gus as a reporter.
The system identified three hit compounds from natural resources, such as plant extracts. These compound showed potent inhibitory activities against the TTSS of Xanthomonas axonopodjs without antibacterial activities against vanous phytopathogenic bacteria, indicating that the inhibition of TTSS-mediated protein secretion by the compounds was not due to inhibition of bacterial growth.

목차 Contents

• 표지...1
• 제출문...3
• 요약문...5
• SUMMARY...9
• CONTENTS...11
• 목차...14
• 제 1 장 서론...17
• 제 1 절 연구개발의 필요성...17
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황...21
• 제 1 절 외국의 경우...21
• 제 2 절 국내의 경우...26
• 제 3 장 연구개발 수행 내용 및 결과...27
• 제 1 절 연구 수행 방법...27
• 제 2 절 연구내용...27
• 1. 식물 병원성 그람음성 세균의 분비체계를 저해하는 저해제의 활성 검정 및 도출...27
• 2. 식물 병원성 그람음성 세균에 대한 최소생육저지 농도(MICs)의 결정...28
• 3. 식물 병원성 세균에 대한 화합물에 의한 생육 억제 시험...29
• 4. Western blotting에 의한 GUS 융합 단백질의 분비체계를 저해 여부 검정...29
• 5. 2-Dimensional eleetrophoresis(2-DE)에 의한 단백질의 분비체계 저해 여부...30
• 6. 동진 벼를 이용한 in vitro 생리활성 검정...30
• 7. 동진 벼를 이용한 in vivo 실험...30
• 8. 운주 벼 포장 실험...31
• 9. 물벼룩 (Dapnia magna)을 이용한 분비 체계 저해제의 독성시험...31
• 10. Hemolysis assay를 이용한 분비체계 저해제의 발굴...32
• 11. RNA 추출...32
• 12. eDNA 합성 및 RT-PCR...33
• 13. SDS-PAGE에 의한 단백질 밴드의 확인...34
• 제 3 절 연구결과...34
• 1. 제3 유형 분비체계(type III secretion system, TTSS)에 대한 assay 조건의 최적화...34
• 2. 제3 유형 분비체계를 저해하는 활성물질의 탐색...35
• 3. Chemical library로부터 발굴한 TTSS 저해제의 활성검정과 화합물의 구조...35
• 가. TTSS 저해제의 도출...35
• 나. 최소생육저지농도(MICs)의 결정...37
• 다. Carboplatin 화합물에 의한 X axonopodjs pv. glydnes 재조합균의 생육 억제 가능성 조사...38
• 라. Western blotting을 통해 carboplatin 화합물이 GUS 융합 단백질의 분비체계 저해 여부 검정...38
• 마. Carboplatin 화합물이 동진 벼의 생육에 미치는 영향 조사...41
• 바. 식물 병원성 세균의 분비 체계 저해제인 carboplatin의 in vivo 활성검정...42
• 사. 식물 병원성 세균의 분비 체계를 저해하는 carboplatin을 이용한 소규모 포장시험...43
• 4. 식물 추출물 library로부터 도출한 TTSS 저해제의 활성검정과 화합물의 구조...46
• 가. 식물 추출물로 부터 그람음성 세균의 분비체계 저해제의 추가 도출...46
• 나. 최소생육저지농도(MICs)의 결정...46
• 다. Escin과 quillaja saponin 화합물에 의한 X axonopodjs pv. glydnes 재조합균의 생육 억제 가능성 조사...46
• 라. Western blotting을 통해 escin과 quillaja saponin 화합물이 GUS 융합 단백질의 분비 체계 저해 여부 검정...50
• 마. 식물 병원성 세균의 분비체계 저해제인 escin과 qillaja saponin의 in vivo 활성 검정...51
• 바. 식물 병원성 세균의 분비 체계 저해제의 독성시험...52
• 5. 미생물 자원으로부터 세균의 분비체계 저해제의 추가 도출...54
• 가. 분비체계 저해제의 추가 도출과 분리 정제...54
• 나. 분비체계 저해제의 구조결정...55
• 다. Actinomycin D의 활성검정...55
• 라. Minimum inhibitory concentrations (MICs)의 측정...58
• 마. 화합물에 의한 피검균의 생육 억제 시험...59
• 바. 식물 병원성 세균의 분비체계를 저해하는 actinomycin D의 소규모 In vivo 활성검정...60
• 6. Hemolysis assay를 이용한 새로운 분비체계 저해제의 추가 도출 및 기작 연구...61
• 제 4 장 연구개발 목표 달성도 및 대외 기여도...64
• 제 1 절 목표대비 대외달성도...64
• 제 2 절 정량적 성과 (논문게재, 특허출원, 기타)...65
• 제 5 장 연구개발 결과의 활용계획...68
• 제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보...69
• 제 7 장 기타 중요 변동사항...70
• 제 8 장 국가과학기술종합정보시스템에 등록한 연구장비 현황...71
• 제 9 장 참고문헌...72