초록 ▼

SELEX 이용하여 S. Enteritidis 및 E. coli O157:H7과 S. aureus enterotoxin A 특이 RNA 앱타머를 선별하였다. 10 round를 시행한 후의 RNA aptamer library의 서열을 분석하여 각 S. Enteritidis 및 E. coli O157:H7과 S. aureus enterotoxin A에 결합하는 앱타머의 공통 서열특징을 분석하고 형광을 이용한 binding assay를 통하여 결합력이 가장 뛰어난 앱타머 선발하였다. 이 때 S. Enteritidis와 E. coli O1

SELEX 이용하여 S. Enteritidis 및 E. coli O157:H7과 S. aureus enterotoxin A 특이 RNA 앱타머를 선별하였다. 10 round를 시행한 후의 RNA aptamer library의 서열을 분석하여 각 S. Enteritidis 및 E. coli O157:H7과 S. aureus enterotoxin A에 결합하는 앱타머의 공통 서열특징을 분석하고 형광을 이용한 binding assay를 통하여 결합력이 가장 뛰어난 앱타머 선발하였다. 이 때 S. Enteritidis와 E. coli O157:H7에 결합하는 앱타머는 fluorescence microplate reader를 이용하여 형광값을 비교 하였으며 S. aureus enterotoxin A에 결합하는 앱타머는 EMSA assay를 통하여 선별되었다. 최종적으로 선발된 S. Enteritidis 특이 앱타머의 특이성을 분석한 결과 S. Enteritidis외 다른 serovar의 살모넬라에 대한 특이성을 확인하였으며 뿐만 아니라 살모넬라 외 식품에 정상적으로 존재하는 비병원성균에 대한 특이성을 확인하였다.

Abstract ▼

Aptamers which are single stranded oligonucleotides with the capability of antibody-like binding specifically to biosurface have been shown to be useful for diagnostic tools as alternative antibody. In this study, aptamers bind to Salmonella Enteritidis (S. Enteritidis) were developed as a new diagn

Aptamers which are single stranded oligonucleotides with the capability of antibody-like binding specifically to biosurface have been shown to be useful for diagnostic tools as alternative antibody. In this study, aptamers bind to Salmonella Enteritidis (S. Enteritidis) were developed as a new diagnostic tool and the sensitivity and specificity of the selected aptamers were evaluated. In addition, aptamers bind to Escherichia coli O157:H7 (E. coli O157:H7) or Staphylococcus aureus (S. aureus) enterotoxin A were also developed.
A total 10 rounds of systematic evolution of ligands by exponential enrichment (SELEX) using magnetic beads was applied to select RNA aptamers binding to S. Enteritidis, E. coli O157:H7, or S. aureus enterotoxin A from RNA aptamer library including random (N40) sequences. The selected aptamer pool at the end of 10 rounds of SELEX were then sequenced and labelled with fluorescein maleimide to 5’ of oligonucleotide. The fluoro-labeled aptamer binding assays using fluorescence microplate reader and flow cytometry were performed to determine the affinity, inclusivity and exclusivity of the aptamer candidates for specific detection of S. Enteritidis. Strains of S. Enteritidis, non-S. Enteritidis Salmonella spp., and non-Salmonella were used for the tests.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 요약문 ... 3
• SUMMARY ... 5
• 제1장 서 론 ... 6
• 제1절 연구개발의 필요성 ... 6
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 8
• 제1절 세계적 수준 ... 8
• 제2절 국내 수준 ... 9
• 제3절 국내외 연구현황 ... 9
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 11
• 제1절 연구내용 및 결과 ... 11
• 제4장 연구개발목표 달성도 및 대외기여 ... 26
• 제1절 목표대비 달성도 ... 26
• 제2절 정량적 성과 ... 27
• 제5장 연구개발결과의 활용계획 ... 29
• 제1절 앱타머를 이용한 식중독균 진단(검출)법 응용기술개발 ... 29
• 제6장 중요 변동사항 ... 31
• 제7장 참고문헌 ... 32
• [참고 1] 연차평가 지적사항 및 조치결과 ... 33
• [참고 2] 주요연구 성과 ... 34