초록 ▼

가. 축산물내 Ionophore 항생제 잔류분석법 확립 및 검증
◦ LC-MS/MS 분석조건
- 컬럼 : XBridge $C_8$ (2.1x100 mm, 3.5 μm)
- 이동상 용매 : 0.3 % formic acid가 포함된 증류수와 acetonitrile의 시간대 비율 조절
- 유속 : 0.25 mL/min, 시료 용액 주입량 : 10 μL
- 최종 확인 • 정량: 각 물질별 parent ion과 2개의 daughter ion 간의 ion ratio 확인
◦ Ionophore

가. 축산물내 Ionophore 항생제 잔류분석법 확립 및 검증
◦ LC-MS/MS 분석조건
- 컬럼 : XBridge $C_8$ (2.1x100 mm, 3.5 μm)
- 이동상 용매 : 0.3 % formic acid가 포함된 증류수와 acetonitrile의 시간대 비율 조절
- 유속 : 0.25 mL/min, 시료 용액 주입량 : 10 μL
- 최종 확인 • 정량: 각 물질별 parent ion과 2개의 daughter ion 간의 ion ratio 확인
◦ Ionophore 항생제 혼합표준용액 10～100 ng $mL^-^1$ 농도에서 7종 모두 $\nu^2$ 0.999 이상의 직선성을 나타내었음
◦ 시료전처리는 미리 균질화한 시료를 acetonitrile로 액상추출한 후 SPE 정제과정 없이 바로 질소농축하였으며, 각각의 음성대조시료에 7종의 표준용액 혼합액을 25, 50, 100 ng $g^-^1$ 농도로 첨가하여 정확도(평균 회수율) 및 정밀도(변이계수)를 조사한 결과 50.9 ～ 61.2 % 회수율을 나타낸 avilamycin을 제외한 6종의 정확도는 70.2 ～ 104.5 %였으며, 정밀도는 전시료 모두 10 % 이내로 국제기준의 권장수준에 적합하였음
나. 개발 잔류분석법의 실험실간 비교시험
◦ 닭고기, 돼지간장에 50, 100, 200 ng $g^-^1$의 농도로 첨가한 시료에 대하여 검역원, 광주광역시 보건환경연구원, 경상남도 축산진흥연구소 3개 기관이 Ionophore 항생제 6종 (lasalocid, maduramicin, monensin, narasin, salinomycin, semduramicin)에 대한 잔류 분석법의 실험실간 재현성을 확인한 결과,
- 실험실간 정밀도(CV)는 50 ng $g^-^1$에서 21 %, 100 ng $g^-^1$에서 19 %, 200 ng $g^-^1$에서 17 %로서 Codex 국제권장 기준의 허용범위(10～100 ng $g^-^1$: ≤ 32 %, 100～1000 ng $g^-^1$: ≤ 23 %)를 충족하였음.
다. Ionophore 항생제에 대한 잔류소실 양상 조사
◦ Avilamycin 투여군
- 권장용량 및 권장용량 2배 투여군 모두 닭근육, 닭신장 및 닭간 전 시료에서 avilamycin이 검출되지 않았음
◦ Salinomycin 투여군
- 돼지 : 권장용량 2배 투여군에서 근육은 휴약후 1일부터, 신장은 휴약후 3일부터 LOQ (0.03 ng $g^-^1$)이하로 소실되었으며, 간은 휴약후 3일에 0.47 ng $g^-^1$ 수준이었음
- 닭 : 권장용량 2배 투여군에서 근육 및 신장에서는 휴약 1일째부터 LOQ 이하로 소실되었으며, 간에서는 휴약후 1일부터 0.5 ng $g^-^1$ 이하로 소실되었음
◦ Monensin 투여군
- 권장용량 2배 투여군에서 닭근육은 휴약후 1일부터, 닭신장은 휴약후 3일부터 LOQ이하(0.05 ng $g^-^1$)로 소실되었으며, 닭간은 휴약후 3일에 0.42 ng $g^-^1$ 수준이었음
◦ Lasalocid 투여군
- 닭 권장용량 2배 투여군에서 투여 7일째 근육 334 ng $g^-^1$, 신장 427 ng $g^-^1$, 간장 638 ng $g^-^1$로 권장용량 투여군에 비해 용량의존적으로 높게 잔류하였으며, 근육 및 신장의 경우 휴약 1일째부터, 간의 경우 휴약 3일째부터 잔류허용기준(20 ng $g^-^1$) 이하 수준으로 급격히 감소하였음
◦ 따라서, ionophore 항생제의 가식부위별 잔류소실양상은 간장, 신장, 근육순으로 오래 잔류하는 경향을 보여 향후 검사대상 시료는 간장이 보다 적절할 것으로 판단되었음

Abstract ▼

The ionophoric antibiotics are used in the poultry industry to prevent and control coccidiosis. In korea they are added to feeds as their sodium salt are at concentration levels of 10～100 mg $kg^-^1$. The anticoccidial drugs are also used in other farm animals to improve feed efficiency i

The ionophoric antibiotics are used in the poultry industry to prevent and control coccidiosis. In korea they are added to feeds as their sodium salt are at concentration levels of 10～100 mg $kg^-^1$. The anticoccidial drugs are also used in other farm animals to improve feed efficiency in order to increase the rate of growth.
The current methods used to determine coccidiostats in animal tissues are based on high performance liquid chromatography(HPLC) with fluorescence detection. Recently, Liquid chromatography mass spectrometry(LC-MS) detection has been applied for routine residue control, providing greater sensitivity and specificity for the quantification and confirmation of coccidiostats.
A method has been developed for the simultaneous determination of seven antibiotics (avilamycin, lasalocid, maduramicin, monensin, narasin, salinomycin, semduramicin) in animal tissues by liquid chromatography/electrospray ionization tandem mass spectrometry(LC-MS/MS) that has a limit of quantification of aprroximately 1 ng $g^-^1$.
Samples were extracted from all tissues with acetonitrile , via liquid-liquid extaction and concentrated by evaporation under nitrogen. The final dissolved extracts were analyzed by using a reversed-phase $C_8$ column and analyzed by electrospray positive mode tandem mass spectrometry. Multiple reaction monitoring(MRM) of 7 ionophores has two diagnostic transition reactions.
The results show good repeatability, with the concentration of 25, 50, 100 ng $g^-^1$ for ionophores in chicken muscle, pig muscle, pig liver, milk and egg, in the average range of 70.2～104.5 % and the coefficient variations(CV, %) was less than 10 % over the range of all concentrations.
Four drugs (avilamycin, lasalocid, monensin, salinomycin) were given to pigs or chickens at the recommended level and twice as much for consecutive 7 days. On days 0, 1, 3 and 7 after withdrawal, samples of kidney, liver and muscle were taken. Monensin and salinomycin residues were present at low concentration on 7th dosing day and fell below the limit of quantification within 3 days of withdrawal. In pig liver, salinomycin residue was 25.8 ng $g^-^1$ at twice as the recommended level. Lasalocid concentration was the highest at 638 ng $g^-^1$ in liver and lowest at 334 ng $g^-^1$ in muscle on 7th dosing day, however, declined less rapidly and were still detectable in excess of the limit of quantification on 3 days of withdrawal. Avilamycin wasn' t detected in all samples at the recommended level and twice as much.

목차 Contents

• 연구과제 최종결과보고서 ... 1
• Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 3
• 1. 연구배경 ... 3
• 2. 연구최종목표 ... 4
• 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 4
• Ⅱ. 연구방법 및 수행전략 ... 5
• 1. 재 료 ... 5
• 2. 연구전략 및 방법 ... 5
• Ⅲ. 연구결과 ... 5
• 1. LC-MS/MS 분석조건 확립 ... 5
• 2. 시료전처리법 확립 ... 8
• 3. 시료내 상대 이온강도 (Relative ion intensity)에 의한 분석물질 확인 ... 9
• 4. 정확도 및 정밀도 ... 10
• 5. 검출한계 및 정량한계 ... 12
• 6. 실험실간 비교시험 ... 12
• 7. 동물 체조직별 잔류소실양상 조사 ... 13
• Ⅳ. 연구결과요약 ... 18
• Ⅴ. 고찰 ... 20
• Ⅵ. 연구결과 활용실적 및 계획 ... 21
• Ⅶ. 참고문헌 ... 21
• Ⅷ. 영문초록 ... 23