초록 ▼

주로 세균의 핵산의 주요성분인 비메칠화된 시티딘- 구아니딘형의 올리고핵산인 CpG ODN은 최근에 Toll-like receptor(TLR) 9과의 결합을 통하여 고유면역세포내로 신호를 전달하여 고유면역반응을 증폭시켜 강력한 면역반응을 유발하는 위험신호원(danger signal)으로 알려지고 있으며 여러 면역 어쥬반트중에서 가장 유망한 백신보조제로 부각되고 있다. 현재 정확한 기전은 미정이나 고유면역외에 T h 1 면역반응을 증진시키는데 가장 강력한 adjuvant로 평가 받고 있다. 본 연구과제는 아직 국내외로 시도되지 않은 단

주로 세균의 핵산의 주요성분인 비메칠화된 시티딘- 구아니딘형의 올리고핵산인 CpG ODN은 최근에 Toll-like receptor(TLR) 9과의 결합을 통하여 고유면역세포내로 신호를 전달하여 고유면역반응을 증폭시켜 강력한 면역반응을 유발하는 위험신호원(danger signal)으로 알려지고 있으며 여러 면역 어쥬반트중에서 가장 유망한 백신보조제로 부각되고 있다. 현재 정확한 기전은 미정이나 고유면역외에 T h 1 면역반응을 증진시키는데 가장 강력한 adjuvant로 평가 받고 있다. 본 연구과제는 아직 국내외로 시도되지 않은 단핵세포를 표적으로 활성화 CpG 올리고 핵산을 개발하기 위하여 단핵구 활성화시 방출되는 proinflammatory 사이토카인의 유전자표현을 측정하여 이를 일차 및 이차 검색계로 사용하여 1차년도에서는 단핵구 계열세포에 작용하는 CpG motif를 발견하였고 이를 이용하여 2차년도에서는 이를 질병모형에 적용하여 실제의 면역조절제로성의 효용성을 살펴보았다. 결과를 설명하면 : 1. 개발된 CpG adjuvant (SK-CpGs)의 특징은. 가. 인체에 투여할 목적으로 기존의 human CpG motif를 개선하여 B형 간염항원에 대하여 효과가 대등 또는 우수하며, 나. 3 에 Tsequence에 따른 활성(adjuvant action) 증가 현상 발견. 다. 유효농도(10-100ug)에서 마우스 생체에 미치는 기존의 알려진 부작용(granuloma, anaphylactic shock, death)이 발견되지 않았다. 라. 주로 대식세포 및 APC (항원전달 세포, 예 DC)를 자극하여 proinflammatory cytokine 을 분비시킴이 증명되었다. 마. chemical basic structure는 PTO(phosphorothioate)이며 도출된 SK- CpGs : SK-CpG13, SK-CpG14, SK-CpG15등이다. 바. 자연 전이암 모델 및 제1형 당뇨병 모델에서 지연 및 방어효과를 보였다. 사. 칸디다증 및 톡소플라스마증에서는 방어효과는 일부 증명되었으나 다른 감염모델에서 처럼 뚜렸하지는 않았다. 현재 이 물질을 이용한 면역요법제 개발 및 후속연구가 진행중이다.

Abstract ▼

One of major target cells of Immunologic adjuvant such as CpG ODN is innate immune cells (NK cell, macrophages, DC). To screen the potent monocyte activating-CpG motif, we investigated whether our newly synthetic ODNs(SK or KSK-CpGs ) affects mRNA expression of proimflammatory cytokine using mouse m

One of major target cells of Immunologic adjuvant such as CpG ODN is innate immune cells (NK cell, macrophages, DC). To screen the potent monocyte activating-CpG motif, we investigated whether our newly synthetic ODNs(SK or KSK-CpGs ) affects mRNA expression of proimflammatory cytokine using mouse macrophages and DCs(dendritic cells). Secondly we examined their adjuvant effects in HBs Ag or conjugate vaccine-vaccinated mice. SK/KSK-CpGs definitely influenced mRNA level of TNF-alpha, IFN-gamma, IL-6. IL-12 from mouse APCs. Interestingly KSK-CpGs enabled to potently augment target antibodies in test antigen-immunized mice. This data show that SK/KSK-CpGs could be potent adjuvant for medically-important Ag immunization. Taken together, cytokine profile from CpG-activated monocyte might be fairly corrected with adjuvant activity. This results prove the potent antibody in ducibility in vivo and upregulation proinflammatory cytokine gene in vitro by using our new K type-CpG motifs. Amon g the screened CpG motifs, KSK-13 was best adjuvant in mice system. Originally, KSK-13 was designed to selectively activate human type of innate immune cells as Ktype ODN. However, the mechanism of activation in innate immune cell trig gered by new CpG motifs was unknown. Besides, the impact of this motifs on humaninn at eimmune cells was obscure. To clarify this is sue, we used two different experiments. First, we examined whether our newly synthetic ODNs (KSK-CpGs) induce mRNA expression of proinflammatory cytokine in various monocyte cell lines and normal immune cells. KSK-13, containg poly T tail, induced expression of T NF-, IL-6, IL-12 mRNA on macroph ages and IFN-on mouse splenocytes. Next, In prolifer ation as say using thymidine uptake KSK-13 provoked a definite proliferation of splenocytes during 48h incubation. KSK-13 clearly induced expression of costimulatory molecule on antigen presenting cells. KSK-13 triggers macroph ages and splenic B cells to upregulate MHC II and costimulatory molecule (CD86). In summary, KSK-13 acts as potentimmun ostimulant viainduction of Th1 type cytokine in human and mouse immune cells, cellular proliferation in mouse immune cells as well a supregulation of MHC II and costimulatory molecule expression on mouse cells. Also using KSK-13. Our Ktype new CpG motifs enable to protect OVA-induced shoch or EL4-met astasis as well as to delay type 1 DM in NOD mice. In conclusion, KSK-CpG motifs could be useful for treatment of cancer, allergy and autoimmune disease.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 3
• 목차 ... 4
• I. 연구개발결과 요약문 ... 5
• (한글요약문) ... 5
• (영문요약문) ... 6
• II. 총괄연구개발과제 연구결과 ... 8
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 8
• 2. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과 ... 9
• 3. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 45
• 4. 총괄연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도 ... 46
• 5. 총괄연구개발과제의 활용계획 ... 48
• 6. 참고문헌 ... 49