초록 ▼

◆ 연구배경 및 필요성
허혈성 세포사멸시 NHE1 (sodium hydrogen excahnger 1)의 활성 조절을 통하여 세포사멸을 억제할 수 있다. 외국계 대형 제약회사들은 이미 허혈성 세포사멸 조절에 관여하는 치료제 개발에 많은 노력을 하고 있다. 그러므로 항허혈 치료제 개발을 위한 목적 단백질로서 이미 알려진 유전자를 대상으로 하는 경우 후발 연구자들에게 불리할 수도 있다. 따라서 본 연구의 최종 목적은 신규 항허혈성 치료제 목적 단백질을 제공하기 위하여 NHE1 결합 단백질로부터 허혈성 세포사멸 조절 및 NHE1 활

◆ 연구배경 및 필요성
허혈성 세포사멸시 NHE1 (sodium hydrogen excahnger 1)의 활성 조절을 통하여 세포사멸을 억제할 수 있다. 외국계 대형 제약회사들은 이미 허혈성 세포사멸 조절에 관여하는 치료제 개발에 많은 노력을 하고 있다. 그러므로 항허혈 치료제 개발을 위한 목적 단백질로서 이미 알려진 유전자를 대상으로 하는 경우 후발 연구자들에게 불리할 수도 있다. 따라서 본 연구의 최종 목적은 신규 항허혈성 치료제 목적 단백질을 제공하기 위하여 NHE1 결합 단백질로부터 허혈성 세포사멸 조절 및 NHE1 활성 조절에 관여하는 신규 유전자를 선별하고자 한다.
◆ 연구방법
1. NHE1 cytoplasmic domain에 결합하는 인자 선별
- Two-hybrid assay
- 동반 침강 및 2차원 전기영동
2. NHE1 결합인자 동정 및 재확인
- in vito protein binding assay
- invivo protein binding assay
3. NHE1 결합인자의 허혈성 세포사멸에 관여하는 기전 조사
- Caspase 활성 조사
- NHE 활성 조사
- 죽음실행섬유 형성 조사
- 세포사멸 조사
◆ 연구결과
1. NHE1 결합인자로 최종 11종이 선발됨.
2. NHE1 결합인자인 FAF1, LDHB에 의해 caspase의 활성이 증가됨.
3. FAF1에 의해 죽음실행섬유의 형성이 증가하며, antisense FAF1에 의해 죽음실행섬유 형성이 감소됨.
4. NHE 활성이 NHE1 결합인자인 Daxx에 의해 저해됨.
5. 세포사멸 조절에 근거한 신규 세포수준에서의 스크리닝 시스템이 확립됨.
6. 세포사멸 인자 조절이 허혈성 세포사에 대한 보호수단이 될 수 있음을 제시하였음.

Abstract ▼

◆ Purpose
Control of ischemic myocardial cell death can accomplish the regulation of NHE1 (sodium hydrogen exchager 1) channel upon ischemia/reperfusion (I/R). Big foreign pharmaceutical companies have made investing major efforts on developing drugs regulating ischemic cell death. Thus, studying

◆ Purpose
Control of ischemic myocardial cell death can accomplish the regulation of NHE1 (sodium hydrogen exchager 1) channel upon ischemia/reperfusion (I/R). Big foreign pharmaceutical companies have made investing major efforts on developing drugs regulating ischemic cell death. Thus, studying known target genes would be disadvantageous for late-comers. To this end, this study aimed to identify novel death-regulatory genes among NHE1 interacting proteins in order to provide novel targets for anti-ischemic drug development.
◆ Method
1. Selection of proteins interacting with the cytoplasmic domain of NHE1
- Two-hybrid assay
- Coprecipitation/2-DE analysis
2. Identification and confirmation of novel NHE1 regulatory proteins
- In vitro protein binding assay
- In vivo protein binding assay
3. Understanding molecular mechanisms of candiates in ischemic cell death
- Caspase assay
- NHE activity assay
- Death effector filament formation
- Cell viability assay
◆ Result
1. Selection of 11 NHE1 interacting proteins.
2. Activation of caspases by FAF1 and LDHB, NHE1 interactors.
3. Increase of DEF formation by overexpression of FAF1transfection, decrease by antisense FAF1.
4. Decrease of NHE1 activity by Daxx, a NHE1 interactor.
5. Establishment of a new cell-based screening system based on apoptotic regulation.
6. Control of apoptotic molecules can be an efficient way of cardioprotection against I/R damage.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제 출 문 ... 3
• 목 차 ... 4
• 요 약 문 ... 5
• SUMMARY ... 6
• 총괄연구개발과제 연구결과 ... 7
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 7
• 2. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과 ... 15
• 3. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 28
• 4. 사업화 목표 달성도 및 계획(개발과제만 해당함) ... 29
• 5. 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 30
• 6. 연구개발결과의 파급효과 ... 46
• 7. 첨부서류 ... 47
• 제1세부연구개발과제 연구결과 ... 76
• 1. 제1세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 77
• 2. 제1세부연구개발과제의 연구대상 및 방법 ... 80
• 3. 제1세부연구개발과제의 최종 연구개발결과 ... 84
• 4. 제1세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 88
• 5. 제1세부연구개발과제의 연구성과 ... 89
• 6. 참고문헌 ... 105
• 제2세부연구개발과제 연구결과 ... 121
• 1. 제2세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 122
• 2. 제2세부연구개발과제의 연구대상 및 방법 ... 125
• 3. 제2세부연구개발과제의 최종 연구개발결과 ... 129
• 4. 제2세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 133
• 5. 제2세부연구개발과제의 연구성과 ... 134
• 6. 참고문헌 ... 150