국내 분리 신종 한타바이러스의 특성 분석: 수청바이러스의 유전자 분석, 병인성 연구와 진단항원 개발 Molecular biological characterization of Suchong virus : Sequence analysis, pathogenesis by integrin receptor and development for recombinant antigen원문보기
보고서 정보
주관연구기관
고려대학교 산학협력단
연구책임자
송진원
보고서유형
최종보고서
발행국가
대한민국
언어
한국어
발행년월
2005-05
과제시작연도
2004
주관부처
보건복지부
사업 관리 기관
한국보건산업진흥원 Korea Health Industry Development Institute
◆ 연구배경 및 필요성 최근 국내에서 채집된 흰넓적다리붉은쥐(Apodemus peninsulae)에서 새로운 한타바이러스인 수청바이러스가 분리되어 이 바이러스의 유전자 분석을 통한 기존에 알려진 한타바이러스와의 분자생물학적 차이 규명, 인체 병원성 여부, 세포내 감염시 작용하는 수용체와 이와 연관된 병인론적 기전 규명 및 기존의 국내 한타바이러스와의 감별진단법 개발이 요구됨. ◆ 최종연구목표 ① 수청바이러스의 L, M, S 분절 전체 염기서열 확보 및 유전자 특성 분석 ② 중화항체법을 이용한 수청바이러스의
◆ 연구배경 및 필요성 최근 국내에서 채집된 흰넓적다리붉은쥐(Apodemus peninsulae)에서 새로운 한타바이러스인 수청바이러스가 분리되어 이 바이러스의 유전자 분석을 통한 기존에 알려진 한타바이러스와의 분자생물학적 차이 규명, 인체 병원성 여부, 세포내 감염시 작용하는 수용체와 이와 연관된 병인론적 기전 규명 및 기존의 국내 한타바이러스와의 감별진단법 개발이 요구됨. ◆ 최종연구목표 ① 수청바이러스의 L, M, S 분절 전체 염기서열 확보 및 유전자 특성 분석 ② 중화항체법을 이용한 수청바이러스의 혈청형 결정 ③ 수청바이러스의 integrin receptor에 대한 결합반응 규명 ④ 한탄, 서울, 수청바이러스간의 감별진단을 위해 특이 N 단백을 이용한 유전자재조합 항원 개발 ⑤ 수청바이러스에 의한 신증후출혈열 환자 발생 여부 파악 ◆ 연구내용 및 방법 ① RT-PCR법으로 수청바이러스 L, M, S 분절 유전자 증폭 및 염기서열 결정 ② 중화항체법으로 수청바이러스가 새로운 혈청형의 한타바이러스 인지 조사 ③ 여러 integrin 수용체에 대한 항체를 이용하여 integrin수용체를 blocking함으로써 수청바이러스의 결합반응의 성질을 규명 ④ 바이러스의 S분절의 특이부분을 pET21b expression vector와 대장균을 이용하여 유전자재조합 항원 발현 ⑤ 기존의 진단법과 새로 개발된 유전자재조합 항원을 이용하여 수청바이러스 감염 환자 탐색 ◆ 연구 결과 ① 수청바이러스의 L, M, S 분절 전체 염기서열을 규명하여 GeneBank 등록 ② 수청바이러스와 다른 한타바이러스간의 유전자 분석을 통한 계통분석 확립 ③ 중화항체법을 이용하여 수청바이러스의 혈청형을 규명 ④ Integrin receptor 를 통한 수청바이러스의 침입기전 기반 규명 ⑤ 한타바이러스의 특정 N 단백 항원을 유전자재조합기법을 사용하여 발현 및 ELISA 를 이용한 진단법 개발 ⑥ 2002년부터 2004년까지 3년간 신증후출혈열 의심환자 혈청에서 수청바이러스 발생여부 확인을 위한 스크리닝 과 진단법 개발 ◆ 기대효과 (응용분야 및 활용방안) ① 한타바이러스의 혈청학적진단의 단점을 보완할 수 있는 유전자적 수준의 감별진단법 개발 ② 수청바이러스의 세포내 감염시 수용체를 규명함으로써 감염기전 규명과 새로운 감염 예방, 치료법 개발 ③ 수청바이러스의 인체 병원성 유무를 규명하여 환자 발생시 조기 진단과 치료가 가능 ④ 국내 존재 한타바이러스의 유전정보 확보 및 유사시 바이러스의 유입 경로 등 추적을 위한 정보로 활용
Abstract▼
Found primarily in mountainous areas, the Korean field mouse (A. peninsulae) is the second-most dominant field rodent species found throughout the ROK. A new hantavirus, designated Suchong (SC), was isolated in Vero E6 cell from four wild-caught A. peninsulae captured in August 1997 at Mt. Gaebang i
Found primarily in mountainous areas, the Korean field mouse (A. peninsulae) is the second-most dominant field rodent species found throughout the ROK. A new hantavirus, designated Suchong (SC), was isolated in Vero E6 cell from four wild-caught A. peninsulae captured in August 1997 at Mt. Gaebang in Hongcheon-gun and Mt. Gachil, Injen-gun, Gangwon Province, and in September 1998 at Mt. Dugyoo, Muju-gun, Jeollabuk Province, ROK. The entire S, M and L genomic segments of SC virus, amplified from infected Vero E6 cells by RT-PCR, diverged from HTN virus (strain 76-118) by 15.6%, 22.8 % and 21.7% at the nucleotide level and 3.5%, 9.5% and 4.6% at the amino acid level, respectively. Phylogenetic analyses of the nucleotide and deduced amino acid sequences, using the maximum parsimony and neighbor-joining methods, indicated that SC virus was distinct from A. agrarius-borne HTN virus. SC virus shared a common ancestry with Amur virus from Far East Russia, as well as with H5 and B78 hantaviruses, previously isolated from HFRS patients in China. Nucleocapsid protein of SC virus was expressed in E. coli( BL21) using pET28a-SCV76-1325 vector, and performed ELISA test for antibody screening for SC virus-infected HFRS patients. Cross-focus-reduction neutralization tests showed that the SC virus, which is the first isolated hantavirus from A. peninsulae, could be classified as a new serotype of hantavirus.
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