초록 ▼

가. 국내ㆍ외 내분비계장애물질 연구동향 파악
1) 일본 후생노동성 및 국립환경연구소에서는 내분비계장애물질의 시험을 수행할 때 In silico, In vitro, In vivo로 screening을 하여 우선연구 대상물질을 선정한 후에 확정시험 (상세시험)을 하도록 함
○ ① In silico (컴퓨터 가상실험 예측), ② 세포계, 무세포계를 이용한 In vitro (시험관실험), ③ 난소적출동물 또는 어린동물을 이용한 In vivo (생체실험)으로 screening하여 데이터를 축적
○ 생체의 성장과정 (태아기,

가. 국내ㆍ외 내분비계장애물질 연구동향 파악
1) 일본 후생노동성 및 국립환경연구소에서는 내분비계장애물질의 시험을 수행할 때 In silico, In vitro, In vivo로 screening을 하여 우선연구 대상물질을 선정한 후에 확정시험 (상세시험)을 하도록 함
○ ① In silico (컴퓨터 가상실험 예측), ② 세포계, 무세포계를 이용한 In vitro (시험관실험), ③ 난소적출동물 또는 어린동물을 이용한 In vivo (생체실험)으로 screening하여 데이터를 축적
○ 생체의 성장과정 (태아기, 신생아기, 사춘기)이나 생체반응 (신경계, 내분비계, 면역계 등에 미치는 변화)을 포괄적으로 평가하는 시험법 (확정시험)을 개발
○ 저용량으로 환경화학물질을 폭로했을 때 일어나는 신경계, 면역계 등에 미치는 유해성을 동정하여 평가하는 모델과 화학물질의 복합영향을 평가하는 시스템 개발
2) 내분비계장애물질 E1, E2, EE2 등의 제거를 위하여 광산화, 흡착 등으로 제거효율에 관한 연구를 비롯하여 하ㆍ폐수처리 공정인 물리적ㆍ화학적 처리, 생물학적 처리, 고도산화 처리, 막 여과 등에 따른 제거효과를 보고
나. 내분비계장애물질 평가를 위한 in vitro 기법 선정
○ 국내ㆍ외로 내분비계장애물질의 에스트로겐 활성도 측정에 많이 사용되면서도 화학물질을 민감하게 측정할 수 있는 방법인 E-screen assay를 대상으로 함
○ 최근 일본의 Osaka 대학과 일본국립환경연구소를 중심으로 Yeast Estrogen System을 개량ㆍ구축한 Yeast two-hybrid assay를 선정하여, 비교적 간단하고 경제적으로 화학물질과 환경수의 에스트로겐 활성도를 평가함

Abstract ▼

The major purpose of this research is to establish the in vitro bioassay of endocrine disrupting chemicals in the environmental water and chemicals. The toxic effects on ecosystem and human are generally caused by micropollutants.
E-screen assay with MCF-7 cells and Yeast two-hybrid assay with Y1

The major purpose of this research is to establish the in vitro bioassay of endocrine disrupting chemicals in the environmental water and chemicals. The toxic effects on ecosystem and human are generally caused by micropollutants.
E-screen assay with MCF-7 cells and Yeast two-hybrid assay with Y190 cells as in vitro assay were used to estimate the estrogenic activity. Among these methods, the E-screen assay was a sensitive tool that can estimate the total estrogenic activities for endocrine disrupting chemicals. The E-screen assay and the Yeast two-hybrid assay to assess the estrogenic effect by chemicals has been established and applied to the river water and sewage treatment plants effluents. The dose-response curves of 3 to 6 compounds based on the value were obtained. It showed high sensitivity to the river water and the effluent of sewage treatment plants which have very low estrogenic effect.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 요약문 ... 3
• Abstract ... 8
• 목차 ... 10
• 그림목차 ... 13
• 표목차 ... 14
• 약어 목록 (Abbreviation Lists) ... 15
• I. 서 론 ... 17
• II. 연구내용 및 방법 ... 20
• 1. E-screen에 의한 EDCs 평가 ... 20
• 2. Yeast two-hybrid assay에 의한 EDCs 평가 ... 22
• III. 연구결과 및 고찰 ... 26
• 1. 국내ㆍ외 내분비계장애물질 연구동향 ... 26
• 가. 구조활성상관법 (QSAR) ... 26
• 나. In vivo assay ... 27
• 다. In vitro assay ... 28
• 라. 거동연구 ... 29
• 2. E-screen assay 기법확립 ... 29
• 가. 실험세포 및 배양방법 ... 30
• 나. Cell Seeding ... 31
• 다. 계대배양 방법 ... 33
• 라. Chemical Treatment ... 36
• 마. SRB (sulforhodamin B) assay ... 38
• 3. E-screen에 의한 활성도 측정 ... 42
• 가. 정량적 평가 ... 42
• 4. Yeast two-hybrid assay 기법 확립 ... 44
• 가. 환경시료의 전처리 ... 44
• 나. Yeast two-hybrid assay 배지 제조 ... 45
• 다. Yeast 배양액의 준비 ... 47
• 라. 단계희석 시험 ... 47
• 마. 유전자조작 효모의 보존방법 ... 49
• 5. Yeast two-hybrid assay에 의한 화학물질과 환경시료 분석 ... 52
• 가. rER을 이용한 화학물질의 dose-response 곡선 ... 52
• 나. hER을 이용한 화학물질의 dose-response 곡선 ... 53
• 다. mER을 이용한 화학물질의 dose-response 곡선 ... 56
• 라. AhR을 이용한 화학물질의 dose-response 곡선 ... 58
• IV. 결 론 ... 61
• V. 참 고 문 헌 ... 62