초록 ▼

최근 저출산 및 고령 임신과 그에 따른 조산아 출생률이 사회적으로 매우 심각한 문제로 대두되고 있으며 이에 따라 조산아의 생존률을 높이는 것이 점차 중요한 의료계의 화두가 되고 있다. 신생아 괴사성 장염(necrotizingenterocolitis: NEC)은 신생아 중환자실에서 경험하는 위장관 질환 중 가장 흔한 응급 수술 적응증이며, 그 중 약 70% 정도가 36주 미만의 조산아에서 발생한다. 조산아의 건강과 생존에 있어 매우 중요한 질환임에도 불구하고 NEC의 발생 기전에 대한 이해는 여전히 부족한 상태이며, 정립된 치료방법도

최근 저출산 및 고령 임신과 그에 따른 조산아 출생률이 사회적으로 매우 심각한 문제로 대두되고 있으며 이에 따라 조산아의 생존률을 높이는 것이 점차 중요한 의료계의 화두가 되고 있다. 신생아 괴사성 장염(necrotizingenterocolitis: NEC)은 신생아 중환자실에서 경험하는 위장관 질환 중 가장 흔한 응급 수술 적응증이며, 그 중 약 70% 정도가 36주 미만의 조산아에서 발생한다. 조산아의 건강과 생존에 있어 매우 중요한 질환임에도 불구하고 NEC의 발생 기전에 대한 이해는 여전히 부족한 상태이며, 정립된 치료방법도 없는 실정이다. 본 연구는 NEC의 실험 모델을 정립하고 NEC 발생에 관여하는 apoptosis pathway를 확인함과 동시에 이러한 정립된 NEC 모델을 이용하여 VEGF의 NEC에 대한 protective effect 및 그 기전을 이해하는 데 목적이 있다. 연구내용은 다음과 같다.
<1차 년도의 연구내용>
● 조산쥐를 대상으로 경구 LPS 투여 및 반복적 저산소를 처치 한 후 48-72시간 후 소장 조직을 획득하여 NEC 발생을 확인하여 조산아 NEC와 유사한 NEC rat 모델을 정립
● NEC 발생 소장 조직 및 혈청에서 세포사멸(apoptosis) 양상을 확인을 위해 caspase-3 activity를 측정하고 TUNEL
staining을 하여 apoptosis score를 확인
● 장용해액 및 혈청을 이용하여 Bcl-2, Bax, PAF, P53, Fas, FasL, TNF, NF-kB 등의 apoptosis 관련 인자를 real
time RT PCR, western blot 등의 방법으로 분석 apoptosis pathway 규명
<2차 년도 연구 내용>
● 1차 년도에 정립된 NEC rat모델을 이용하여 VEGF를 투여(정주 및 경구 투여)하였을 때, NEC 및 apoptosis의 변
화 양상을 확인
● VEGF 투여(정주 및 경구 투여)시 어떤 기전을 통해 NEC 및 apoptosis를 감소시키는지 확인
1) real time RT PCR, western blot 방법으로 Bcl-2, Bax, PAF, P53, Fas, FasL, TNF, NF-kB 등의 apoptosis 관련
인자를 분석하여 해당 apoptosis pathway 규명.
2) PAI-1(plasminogen activator inhibitor-1), Microvessel quantification 등을 측정하여 VEGF의 소장(intestine) 상피와 혈관(vascular) 상피의 세포사멸에 대한 직접적인 효과 확인
3) VEGF를 정맥투여한 경우와 경구 투여한 경우의 protective effect를 비교
<연구결과>
● 조산쥐를 대상으로 경구 LPS 투여 및 반복적 저산소를 처치 한 후 48-72시간 후 소장 조직을 획득한 후, IHC를 통해 대조군에 비해 실험군에서 TUNEL staining score와 caspase-3 활성도가 증가하였음을 확인하였다. 이는 경구투여 및 반복적 저산소 처치를 통해 NEC 발생을 확인하였고, 본 실험에 필요한 조산아 NEC와 유사한 NEC rat 모델을 정립하였다.
● 본 실험결과 임상상과 유사한 처지(LPS 경구 투여+저산소)를 통해 NEC의 rat 모델 정립한 후 VEGF를 투여(정주 및 경구 투여)하였을 때, NEC 및 apoptosis의 변화 양상을 비교하고자, Bax, Bcl-2 등 관련 단백질 및 유전자의 발현을 westren blot과 real-timep PCR로 확인한 결과, Bax/Bcl-2 비가 감소하는 경향을 보였다. 이러한 결과로, VEGF는 경구투여에 비해 정주 투여시에 비해 효과적으로 NEC 모델의 장점막에서의 apoptosis를 차단함을 확인 할 수 있었다.
● 본 실험 결과 VEGF를 경구투여 쥐와 정주투여 쥐 모두 대조군에 비해 실험군에서 TUNEL staining score와 caspase-3 활성도가 감소하였으며, 이는 경구투여 시에 비해 정주투여로 유도된 쥐의 NEC도 다른 방법으로 유발된 NEC와 유사하게 apoptosis가 NEC 발생의 기저 과정임을 시사한다.
● Apoptosis를 저해한다고 알려져 있지만 현재까지 NEC에 대하여 적용된 바가 없는 VEGF를 실제 NEC rat mode에 적용시켜 NEC 및 apoptosis의 억제 효과를 확인함으로써 향후 NEC 치료에 있어 VEGF를 적용하여 NEC 치료성적을 높이고 조산아의 생존률 증가에 기여하므로써 현재 심각한 사회문제로 대두되고 있는 저출산률 문제 등을 해결하는 등 기여하는 바가 클 것으로 생각된다.

목차 Contents

• 일반연구자지원사업 최종(결과)보고서 ... 1
• 목차 ... 2
• I. 연구결과 요약문 ... 3
• II. 연구내용 및 결과 ... 4
• 1. 연구개발과제의개요 ... 4
• 2. 국내외 기술개발 현황 ... 4
• 3. 연구수행 내용 및 결과 ... 4
• 4. 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 9
• 5. 연구결과의 활용계획 ... 10
• 6. 연구과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 10
• III. 연구성과 ... 11