초록 ▼

Ⅲ. 연구개발의 내용 및 범위
○ 식물의 OL 대사계를 이해하기 위해서 다양한 식물 소스로부터 유전자를 분리/동정하고 아미노산서열 해석을 통한 활성부위를 분석하였으며, 이러한 분석 데이터들을 DB로 구축하였다.
○ 확보한 유전자들의 기능 및 효소 특성 확인을 위하여 유전자들을 대장균에서 발현시키고 재조합단백질을 분리/정제 하였으며, 효소 활성, 생화학적 특성, 기질 특이성 등도 분석하여 효소의 특성을 확인하였다.
○ 특히, 본 연구에서는 OL 생합성 효소에 대한 아미노산잔기 변이를 통한 대사제어기반을 구축하는데 역점

Ⅲ. 연구개발의 내용 및 범위
○ 식물의 OL 대사계를 이해하기 위해서 다양한 식물 소스로부터 유전자를 분리/동정하고 아미노산서열 해석을 통한 활성부위를 분석하였으며, 이러한 분석 데이터들을 DB로 구축하였다.
○ 확보한 유전자들의 기능 및 효소 특성 확인을 위하여 유전자들을 대장균에서 발현시키고 재조합단백질을 분리/정제 하였으며, 효소 활성, 생화학적 특성, 기질 특이성 등도 분석하여 효소의 특성을 확인하였다.
○ 특히, 본 연구에서는 OL 생합성 효소에 대한 아미노산잔기 변이를 통한 대사제어기반을 구축하는데 역점을 두어, 활성 부위의 특정 아미노산잔기에 대한 다양한 효소변이체를 구축하였으며, 대장균에서 발현 시킨 후 분리/정제 하여 활성, 생화학적 특성, 기질 특이성 등을 분석함으로써 아미노산잔기의 변이를 통한 식물의 OL 대사를 제어할 수 있는 기반도 마련하였다. 뿐만 아니라 특정 변이체에 대해서는 구조적 특성분석을 위하여 결정을 제작하였다.
○ 식물에서 분리한 OL 생합성 유전자의 기능 및 특성을 식물체 내에서 확인하고자 형질전환식물체를 제작하였고, 분자생물학적으로 검증하여 식물에서의 OL 대사계의 변화를 분석할 수 있는 기반을 마련하였다.

Abstract ▼

[Research contents]
○ Isolation of gene related to OL biosynthesis in plant and prediction of its function by bioinformatics analysis
○ Identification of special amino acid residues influencing its activity by analysis of conserved amino acid residues in active site
○ Site-direct mutagenesi

[Research contents]
○ Isolation of gene related to OL biosynthesis in plant and prediction of its function by bioinformatics analysis
○ Identification of special amino acid residues influencing its activity by analysis of conserved amino acid residues in active site
○ Site-direct mutagenesis of the gene for activity swapping ○ Expression and purification of recombinant protein for wild type and site-mutated genes in E. coli
○ Analysis of recombinant protein activity and estimation of control elements to optimize OL biosynthesis in plant
○ Construction of transgenic plants to analyze gene function and to understand mechanism for insect/pathogen resistance by OL

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제 출 문 ... 2
• 요 약 문 ... 3
• S U M M A R Y (영 문 요 약 문) ... 6
• 목 차 ... 9
• 제1장 서 론 ... 10
• 제1절 연구개발의 목적 ... 10
• 제2절 연구개발의 필요성 ... 10
• 제3절 연구개발의 내용 및 범위 ... 11
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 14
• 제1절 국내 기술개발 현황 ... 14
• 제2절 국외 기술개발 현황 ... 14
• 제3절 국내외 연구현황 비교 및 필요 연구 분야 ... 17
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 18
• 제1절 OL 생합성 유전자 선발 ... 18
• 제2절 OL 생합성 유전자의 아미노산서열 해석 ... 24
• 제3절 OL 생합성 유전자의 재조합단백질 제조 ... 28
• 제4절 OL 생합성 유전자의 변이체 제작 및 재조합단백질 제조 ... 32
• 제5절 OL 생합성효소 변이체의 활성분석 ... 48
• 제6절 OL 생합성효소 단백질 구조결정 ... 56
• 제7절 형질전환식물체 제작 ... 62
• 제4장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도 ... 65
• 제1절 목표대비 달성도 ... 65
• 제2절 정량적 성과 ... 67
• 제5장 연구개발결과의 활용계획 ... 68
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 69
• 제7장 기타 중요 변동사항 ... 70
• 제8장 국가과학기술종합정보시스템에 등록한 연구장비 현황 ... 70
• 제9장 참고문헌 ... 71