초록 ▼

Ⅲ . 연구개발의 내용 및 범위
○ 방사선에 의한 와포자충 생사활성영향 정량적 측정법 개발 및 형태 손상측정
○ 작은와포자충의 방사선조사에 의한 DNA 손상 측정: Commet assay, r-H2AX, FACS 를 이용한 세포사멸 측정
○ 와포자충 방사선 반응단백질 규명 : 2D gel 전기영동법, Maldi-ToF을 이용한 방사선 반응 단백질 확인
○ 와포자충 방사선 반응단백질규명 : 방사선량별 와포자충 단백질 발현 변화 비교 분석 연구
○ 와포자충 방사선 내성 관련 단백질 및 유전자 특성 : 방사선

Ⅲ . 연구개발의 내용 및 범위
○ 방사선에 의한 와포자충 생사활성영향 정량적 측정법 개발 및 형태 손상측정
○ 작은와포자충의 방사선조사에 의한 DNA 손상 측정: Commet assay, r-H2AX, FACS 를 이용한 세포사멸 측정
○ 와포자충 방사선 반응단백질 규명 : 2D gel 전기영동법, Maldi-ToF을 이용한 방사선 반응 단백질 확인
○ 와포자충 방사선 반응단백질규명 : 방사선량별 와포자충 단백질 발현 변화 비교 분석 연구
○ 와포자충 방사선 내성 관련 단백질 및 유전자 특성 : 방사선 반응 단백질의 재조합 단백질 합성 및 특성 연구
○ 방사선 반응 단백질의 방사선 저항성 관련 시험 : 포유동물세포 transfection후 방사선 저항성 시험

Abstract ▼

Cryptosporidium is a protozoan parasite causing waterborne diarrheal illness through drinking water contaminated with oocysts. It could be fatal to person who is immunosuppresed by various situations. Previously we reported that this is one of the most radioresistant organism ever known. The object

Cryptosporidium is a protozoan parasite causing waterborne diarrheal illness through drinking water contaminated with oocysts. It could be fatal to person who is immunosuppresed by various situations. Previously we reported that this is one of the most radioresistant organism ever known. The object of this study is to evaluate the basic mechanism of radioresistance of organism using Cryptosporidium parvum as a model system.
Mechanism of radioresistance of Cryptosporidium parvum, one of the biohazard organism having the most highest radioresistance ever known, was evaluated. In the first two years, DNA damage and repair by irradiation were
examined. In the second two years, proteom change between normal and irradiated C. parvum was compared using 2D-gell electrophoresis and MALDI-TOF/TOF analysis. The results showed that antioxidant enzyme such as thioredoxin peroxidase was activated to high dose irradiation, and proteins related to GTPase activity, structural constituent of ribosome, ATP and
unfolded protein binding were also activated by irradiation. In the last two years, characterization and direct relationship of thioredoxin peroxidase with radioresistance of C. parvum were evaluated using recombinant protein and antibody technique. Relationship with radioresistance of thioredoxin peroxidase of C. parvum (cpTPx) was evaluated by mammalian cell (COS-7 cell)
transfection with cpTPx. The results of these studies will contribute for the following subjects.
1) Establish a new model for the study on radiation resistance
2) Development tools for DNA damage and repair study with C. parvum
3) Support the basic data for the study on radiation response of organisms
4) Construction of protein data base on radiation resistance
5) Training of researchers professional to irradiation research
6) Support the scientific data regarding to sensitivity of radiation therapy

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 3
• 보고서 요약서 ... 4
• 요약문 ... 5
• SUMMARY ... 8
• CONTENTS ... 9
• 목차 ... 10
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 11
• 제1절 연구개발 목적 ... 11
• 제2절 필요성 ... 11
• 제3절 연구 개발의 범위 ... 16
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 17
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 21
• 1. 와포자충의 방사선 손상 측정법 개발과 형태관찰 ... 21
• 2. 작은와포자충 방사선 조사후 γ-H2AX 발현 관찰 ... 30
• 3. 작은와포자충에 10 kGy 방사선 조사 후 장시간 경과 후 반응하는 단백질 확인 ... 31
• 4. 1 kGy 방사선 조사 후 단 시간 내 손상회복에 반응하는 작은와포자충 단백체 ... 34
• 5. 저선량 방사선 조사에 반응하는 작은와포자충 단백체 ... 36
• 6. 작은와포자충 thioredoxin peroxidase 재조합단백질 합성 및 특성 연구 ... 37
• 7. Proteasome subunit alpha type 4 (PSA) 재조합 단백질 합성 ... 48
• 8. 작은와포자충 항산화효소 재조합단백질 cpTPx 의 특성연구 II ... 51
• 9. Thioredoxin peroxidase inhibitor가 작은와포자충 방사선 저항성에 미치는 영향 ... 55
• 10. cpTPx 가 mammalian 세포의 방사선 저항성에 미치는 영향 ... 57
• 11. 결과요약 ... 64
• 12. 주요 학술지 게재 논문 ... 68
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 80
• 제5장 연구개발결과의 활용계획 ... 82
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 84
• 제7장 참고문헌 ... 87
• 연구성과(연구마루 입력성과) ... 90