보고서 정보
주관연구기관 |
건국대학교 KonKuk University |
연구책임자 |
유재란
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참여연구자 |
윤세정
,
김경진
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보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2012-11 |
과제시작연도 |
2012 |
주관부처 |
식품의약품안전청 |
사업 관리 기관 |
식품의약품안전청 Korea Food & Drug Administration |
등록번호 |
TRKO201300028986 |
과제고유번호 |
1475006865 |
DB 구축일자 |
2013-09-21
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키워드 |
식품매개원충,작은와포자충,람블편모충,이질아메바Foodborne protozoa,Cryptosporidium,Giardia lamblia,Entameba histolytica,Real-time PCR
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초록
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식중독 관리대상 원충인 작은와포자충, 람블편모충, 이질아메바, 원포자충의 신속 검사법 마련을 위해 식품 전처리법, 유전자 검사법을 개발하여 앞으로 식품 매개 원충 4종 검사를 위한 매뉴얼을 만들었으며, 식품에 실제 적용하여 오염 여부를 검증하였다. 검사법으로 항산성염색, 직접형광항체염색, Real-time PCR 검사 중 real-time PCR 검사법의 검출 회수율이 가장 높았다. 식품 전처리 방법으로 원충을 접종한 잎채소, 과일의 경우 검체 부피의 2~3배의 0.1% detergent 를 섞은 PBS 용액 사용시 작은와포자충과
식중독 관리대상 원충인 작은와포자충, 람블편모충, 이질아메바, 원포자충의 신속 검사법 마련을 위해 식품 전처리법, 유전자 검사법을 개발하여 앞으로 식품 매개 원충 4종 검사를 위한 매뉴얼을 만들었으며, 식품에 실제 적용하여 오염 여부를 검증하였다. 검사법으로 항산성염색, 직접형광항체염색, Real-time PCR 검사 중 real-time PCR 검사법의 검출 회수율이 가장 높았다. 식품 전처리 방법으로 원충을 접종한 잎채소, 과일의 경우 검체 부피의 2~3배의 0.1% detergent 를 섞은 PBS 용액 사용시 작은와포자충과 람블편모충의 회수율을 높였고, 원충 접종 후 IMS 법 적용시 작은와포자충 경우 약 2배 회수율이 높아졌으나 반대로 람블편모충은 IMS 비처리시 회수율이 높았다. 작은와포자충과람블편모충, 이질아메바와 원포자충 등 4종의 원충을 검사할 수 있는 각각의 real-time PCR 방법을 확립하였고 작은와포자충과 람블편모충 모두 식품시료에 첨가된 genomic DNA를 한 개 까지 검출할 수 있었다. 작은와포자충의 프로브는 교차반응을 하지 않았고 접종시료에서 37~100% 의 회수율을 보였다. 람블편모충의 경우 접종시료의 33~66% 만을 검출 할 수 있었고 회수율도 0.07~82.8%로 다소 넓은 범위를 보였다. 식품 잎채소, 허브류, 과일류, 음료류에 확립된 real-time PCR 법을 적용한 결과 모두 음성으로 판정되었다.
결론적으로 식품중 신속하게 작은와포자충 검출을 위해서는 세척후 IMS 처리후 real-time PCR을 적용하고, 그 외 람블편모충, 이질아메바, 원포자충을 검출을 위해서는 세척후 IMS법을 생략하고 real-time PCR을 적용하는 것이 적합할 것으로 생각된다. Real-time PCR 신속 검사 후 양성이 나온 검체에 대해서는 항산성 염색이나 직접 형광항체염색법, 염기서열 확인 등의 방법으로 확진을 하는 것이 필요하다고 생각된다.
Abstract
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Various vegetable and fruit salads are very popular as a healthy diet in our country. A recent food hygiene policy has a concern on the prevention of contamination of waterborne protozoa, such as Cryptosporidium parvum, Giardia lamblia, Entameba histolytica, and Cyclospora cayetanensis, due to cause
Various vegetable and fruit salads are very popular as a healthy diet in our country. A recent food hygiene policy has a concern on the prevention of contamination of waterborne protozoa, such as Cryptosporidium parvum, Giardia lamblia, Entameba histolytica, and Cyclospora cayetanensis, due to cause the outbreak of diarrhea disease. Accordingly, the development of specific and useful detection method for protozoa contamination in these foods is urgently needed for the prevention of the food poisoning. For this purpose, we developed pre-treatment manuals of vegetable and fruit for the genetic detection, and easy and accurate real-time PCR method using protozoa-specific primers and probes.
Furthermore, we tested the usefulness of the developed real-time PCR detection method in vegetables, fruit, and drinks which Cryptosporidium oocysts and Giardia cysts are spiked, and then, examined the contamination of protozoa in fresh commercial vegetable using the real time PCR method. Our research results contained the use of 0.1% liquinox in 500 ml PBS as a washing solution in the pretreatment manual, and specific primer and probe sets to detect four kinds of waterborne protozoa in real time PCR detection method. The result shows that the genomic DNA detection limit of Cryptosporidium and Giardia were one oocyst.
Moreover, the real time PCR method for Cryptosporidium showed no cross reaction with food samples.In conclusion, we developed a useful Real time PCR detection method and the detection manual of waterborne protozoa in vegetables and fruits.
목차 Contents
- 용역연구개발과제 최종보고서 ... 1
- 표지 ... 2
- 제출문 ... 5
- 목차 ... 6
- I. 총괄연구개발과제 요약문 ... 8
- 국문 요약문 ... 8
- Summary ... 10
- II. 총괄연구개발과제 연구결과 ... 12
- 제1장 총괄연구개발과제의 연구목적 및 필요성 ... 12
- 제2장 총괄연구개발과제의 연구내용 및 방법 ... 18
- 제3장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰 ... 25
- 제4장 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 68
- 제5장 총괄주요연구 변경사항 ... 69
- 제6장 총괄참고문헌 ... 69
- 제7장 총괄첨부서류 ... 72
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