초록 ▼

갑상선안병증은 아직까지 그 발생기전이 명확하지는 않으나, 전형적인 자가면역 염증질환으로, 안와섬유모세포의 급성 염증반응, hyaluronan 생성 및 지방분화의 증가로 인한 안와내지방 결체조직과 외안근의 팽창이 주요 기전으로 생각되고 있다. 고용량스테로이드와 방사선치료가 활동성염증기의 갑상선안병증에는 진행억제 효과가 있지만 비활동성, 만성염증 시기에는 효과가 없으며, 부작용으로 인해 사용에 한계가 있다. 본 연구자는 갑상선안병증을 일으키는 여러 병태생리학적 기전을 전반적으로 억제하면서 부작용이 적은 치료 방법을 찾아보고자 하였고 가

갑상선안병증은 아직까지 그 발생기전이 명확하지는 않으나, 전형적인 자가면역 염증질환으로, 안와섬유모세포의 급성 염증반응, hyaluronan 생성 및 지방분화의 증가로 인한 안와내지방 결체조직과 외안근의 팽창이 주요 기전으로 생각되고 있다. 고용량스테로이드와 방사선치료가 활동성염증기의 갑상선안병증에는 진행억제 효과가 있지만 비활동성, 만성염증 시기에는 효과가 없으며, 부작용으로 인해 사용에 한계가 있다. 본 연구자는 갑상선안병증을 일으키는 여러 병태생리학적 기전을 전반적으로 억제하면서 부작용이 적은 치료 방법을 찾아보고자 하였고 가장 유력한 물질로 tanshinone IIA를 선택하였다.
갑상선안병증 환자에서 안와감압술 시행후 버려지는 조직인 안와 지방결체조직으로부터 안와 섬유모세포를 일차 배양하고 비교실험을 위해 갑상선안병증이 없는 정상인을 대상으로 시행한 안와 수술 등을 통해 안와 지방결체조직을 얻어, 정상 안와섬유모세포도 일차 배양하였다. MTT, BrDU assay와 annexin V-FITC 를 이용한 flow cytometry실험을 통해 tanshinone IIA가 세포의 생존, 증식 및 세포사에 미치는 영향을 평가하였으며, 다양한 tanshinone IIA (0-10 μM) 농도를 안와섬유모세포에 전처치후, IL-1β 자극에 의해 증가된IL-6, IL-8, MCP-1 mRNA 표현이 억제되는지를 Real time-PCR을 이용하여 확인하였다.Tanshinone IIA의 항산화 효과를 확인하기 위하여 2%의 담배추출물 (CSE)와 H2O2로 자극을 준 후 reactive oxygen species (ROS)의 정도를 측정하였으며 heme oxygenase (HO)-1의 tanshinone IIA의 농도에 따른 변화 및 관련된 signaling pathway 확인은 western blot을 이용하여 측정하였다. 또한, peroxisome proliferator activator gamma (PPARγ) agonist (Rosiglitazone)을 포함한 지방분화 유도 배양액에 tanshinone IIA를 10일간 같이 처리한 세포에서 지방분화가 끝난 후, Oil red O 염색 결과 및 490 nm에서의 흡광도를 확인하고 western blot을 통해 PPARγ와 CCAAT-enhancer-binding proteins (C/EBP) α,β의 발현을 측정하였다.
MTT 분석결과, tanshinone IIA (0-10 μM)를 24시간 처리시 undifferentiated orbital fibroblast의 생존에 악영향이 없었다. Annexin V/FITC FACS 결과 tanshinone IIA μM까지 세포독성이 발생하지 않아, 최대 농도를 이와 같이 정하였다. Tanshinone IIA는 IL-1β (10ng/ml) 자극에 의한 IL-6, IL-8 과 MCP-1 mRNA 발현을 억제하였다 (P<0.05). 또한 Tanshinone IIA는 농도 의존적으로 ROS의 생성을 억제하였으며 HO-1의 정도는 증가시켰다 (P<0.001). 안와섬유모세포에 tanshinone IIA 10μM을 처리한 결과 phosphorylated extracellular signal-regulated kinase (pERK)의 발현이 증가하였으며 ERK inhibitor (PD98059)를 처리 후 tanshinone IIA에 의한 HO-1 발현이 억제되었다. 지방분화를 유도하는 세포에 처리한 후 oil red O 염색한 결과, 농도 의존적으로 lipid droplet 의 크기와 수가 감소하였고, 490 nm에서의 흡광도가 감소하였으며 PPARγ와 C/EBPα의 발현이 억제되었다 (P<0.001).
Tanshinone IIA는 in vitro 갑상선안병증 모델, 즉 일차 배양 안와 섬유모세포에서 치료약제로서의 가능성을 보여주었다. Tanshinone IIA는 항염증, 항산화 및 지방 억제 효과가 있었고, 농도의존적인 증식억제 효과가 뚜렷하였다. 본 연구는 갑상선안병증의 새로운치료제의 in vitro에서의 가능성을 입증하는 연구로, 향후 동물 실험 또는 임상연구를 통해 약물의 유효성과 안전성 평가가 필요할 것이다.

목차 Contents

• 일반연구자지원사업 최종(결과)보고서 ... 1
• 목 차 ... 3
• Ⅰ. 연구결과 요약문 ... 4
• Ⅱ. 연구내용 및 결과 ... 5
• 1. 연구과제의 개요 ... 5
• 2. 국내외 기술개발 현황 ... 10
• 3. 연구수행 내용 및 결과 ... 11
• 4. 목표 달성도 및 관련 분야에의 기여도 ... 16
• 5. 연구결과의 활용계획 ... 17
• 6. 연구과정에서 수집한 해외 과학기술 정보 ... 17
• Ⅲ. 연구성과 ... 19